保健功效及检测方法.docx

1、保健功效及检测方法一、多糖的检测方法1粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法2葡聚糖的分光光度测定法3硫酸软骨素的分光光度测定法二、皂苷类化合物的检测方法1总皂苷的分光光度测定法2绞股蓝皂苷的分光度测定法三、黄酮与苷类化合物的检测方法1总黄酮的风光光度测定法2原花青素的分光光度测定法3原花青素的铁盐催化比色测定法四、酶、激素与源性物质的检测方法1超氧化物歧化酶的氮蓝四唑测定法2超氧化物歧化酶的连苯三酚自氧化测定法3氯化高铁血红素的分光光度测定法五、其他类化合物的检测方法1总蒽醌的分光光度测定法2几丁胺糖的脱乙酰度滴定法3总三萜的分光光度测定法六、第一章概论(第3页)表1-1 常见的保健食品的成效成分

2、标志性成分、保健功能与主要来源成效成分标志性成分保健功能主要来源黄酮类银杏黄酮、山楂黄酮辅助降血脂、提高缺氧耐受力、抗氧化、增强免疫力、保护心血管系统、保护脑神经系统银杏叶、山楂、蜂胶、根、沙棘、红花、荷叶、甘草、桑叶、皮、花粉、桑葚、黄芪、淫羊藿、鱼腥草多糖类灵芝多糖、香菇多糖缓解体力疲劳、增强免疫力、辅助降血糖、辅助降血脂灵芝、香菇、枸杞、银耳、灰树花、人参、西洋参、昆布、木耳、山药、黄芪、茯苓、猪苓、黄精、苦瓜皂苷类红景天苷、人参皂苷缓解体力疲劳、增强免疫力、抗氧化、抗辐射、提高缺氧耐受力、辅助降血糖、保护心血管系统人参、西洋参、红景天、绞股蓝、三七、山药、黄芪、酸枣仁、桔梗、远志、知母

3、、甘草、大豆、蒺藜、太子参蒽醌类通便、美容、减肥、增强免疫力芦荟、大黄、决明子、何首乌花青素抗氧化、增强免疫力、抗辐射、保护心血管系统葡萄子、葡萄皮、越橘、黑加仑、玫瑰茄、甘蓝、桑葚、紫甘薯、茶叶三萜类灵芝三萜、角鲨烯抗氧化、增强免疫力、抗辐射、缓解体力疲劳、辅助降血脂、辅助保护化学性肝损伤、改善睡眠、改善记忆灵芝、赤芝、紫芝孢子粉、甘草、黄芪、人参、泽泻、积雪草、山楂、女贞子、苦丁茶、五味子、深海鱼油金枪鱼、沙丁鱼、鲨鱼、鲑鱼壳聚糖几丁聚糖增强免疫力、辅助降血脂、辅助降血糖、辅助保护骨粘膜虾、蟹壳的提取物硫酸软骨素辅助降血脂、增强免疫力、保护骨关节、参与制造骨骼动物的软骨第73页第三章保健食

4、品中成效成分的检测方法第一节多糖的检测方法一、粗多糖的苯酚硫酸分光光度测定法1、方法提要多糖经乙醇沉淀别离后，去除其他可溶性糖与杂质的干扰，再与苯酚硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶液中的糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。4、测定步骤（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.02.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，与沸水浴中加热1小时如保健食品添加的已是多糖提取物，那么加热15min，冷却至室温后补加水至刻度线V1,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。在这里必须强调的是不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处理，否那么结果偏高。添加淀粉的样品需加-淀

5、粉酶与糖化酶如葡萄糖苷酶处理。添加糊精的样品需加糖化酶如葡萄糖苷酶处理。处理的原那么是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到别离的目的。1）添加淀粉或淀粉+糊精的样品：可取50mL样品提取液置于100mL具塞锥形瓶中，冷却至60以下，加1mL10%淀粉酶液Singma公司的液状淀粉酶可直接加0.10.2mL和0.5mL0.2M磷酸盐缓冲液，加塞，至5560酶解1小时，再加适量的糖化酶如葡萄糖苷酶约为样液体积的1%于60以下再水解60min后取出用电业检验是否水解完全，如不完全可延长水解时间至酶解液加碘液不变蓝色为止，于电炉上小心加热至沸灭酶，冷却，

6、定容，过滤，取滤液沉淀粗多糖。2）添加糊精的样品：如上法处理免加淀粉酶（2）沉淀粗多糖：准确吸取上滤液或液体样品5.0mLV2，置于50mL离心管中或2.0mL于15mL具塞离心管中，参加无水乙醇20mL或8mL,混匀，于4冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%V/V乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。残渣用水溶解并定容至1025mLV3(根据浓度而定)。（3）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mLL、0.60 mL、0.80mL、1.00mL相当于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg

7、、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg置于25mL比色管中，补加水至2.0mL,参加5%苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心参加浓硫酸10mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。（4）样品测定：准确吸取上液适量V4含糖0.020.08mg置于25mL比色管中，补加水至2.0mL,然后按3法测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。6、注释1本方法线性围在0.010.1mg/mL，线性方程为y=0.3

8、095x+0.0004，r=0.9989,假设工作需要标准曲线可延长至0.20mg/mL。2本法测定样品中多糖时，提取时间以1小时为宜，以免因提取时间过长引起糖结构变化甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低。3比色法测定多糖并非特异性反响，本法灵敏度高，出现测定结果平行性偏差较大，主要是操作不够严谨所致，反复几次的沉淀、洗涤、弃去上清液、样液的转移等都是造成测定结果偏差的原因。实际操作时每个样品要多做几个平行样，并尽量取用几个近似值的均值报告结果。由不同材料组成的保健品所形成乙醇沉淀物的结构也不同，用80%的乙醇洗涤沉淀物时如在15mL离心管中操作可先加少量0.5mL在旋涡混合器或超声波振荡器中

9、以增大撞击与分散沉淀物的强度，尽量将沉淀物打散，然后再加数毫升80%乙醇洗涤，对于一些粘黏包裹状的沉淀物，也可先加少量水溶解，然后再加80%的浓度洗涤，力求将附在沉淀物的杂质除去。4关于乙醇的浓度：由于保健食品组方的复杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效果是不同的，通常使用80%乙醇浓度不一定完全使用于所有的保健品中粗多糖测定，最好能在75%、80%、85%、90%、95%的乙醇浓度之间做预实验以优选最正确的乙醇浓度。5关于酶解1淀粉酶的水解具有专一性，她只水解淀粉而不会水解其他多糖，在淀粉酶的作用下，使淀粉水解成低分子糊精和麦芽糖，再在糖化酶如葡萄糖苷酶的作用下变成葡萄糖。酶的用量应根

10、据酶的活力而定。2糖化酶是几种酶的简称学名-1,4-葡萄糖水解酶，包括葡萄糖苷酶、淀粉葡萄糖苷酶简称为葡萄糖苷酶、普鲁兰酶。药用辅料的淀粉一般都是直链淀粉，用-淀粉酶+葡萄糖苷酶作用于直链淀粉，1,4糖苷键处理就可，如要作用于支链淀粉，需同时参加普鲁兰酶作用于1,6-糖苷键才能完全变为葡萄糖。3酶的活性对酶解的效果影响较大6多糖复原糖换算系数0.9之解释7粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖计或葡聚糖计，因两者测定值相差很大。第82页四、葡聚糖的分光光度测定法本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构、相对分子质量1*104以上的水溶性粗多糖的测定。本方法的最低检出浓度为5.0mg/L。1、方法

11、提要食品中相对分子质量大于1*104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖别离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚硫酸反响以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。4、测定步骤1样品处理1样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，与沸水浴中加热2小时，冷却至室温后补加水至刻度线,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。2沉淀粗多糖：准确吸取1项终滤液5.0mL或液体样品5.0mL，置于50mL离心管中，参加无水乙醇20mL,混匀

12、5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%体积分数乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作34次。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后供沉淀葡聚糖。3沉淀葡聚糖：准确吸取2项终溶液2mL，置于20mL离心管中，参加100g/L氢氧化钠溶液2.0mL、铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%体积分数硫酸溶液2.0mL溶解并移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度线，混匀。（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0mL、0.10mL、0.2

13、0mL、0.40mLL、0.60 mL、0.80mL、1.00mL相当于葡聚糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg置于25mL比色管中，准确补加水至2.0mL,参加50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心参加浓硫酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡聚糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。（3）样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL，置于25mL比色管中，参加50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀

14、，小心参加浓硫酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量。同时做样品空白试验。6、准确度与精细度在不同食品中进展不同浓度的加标回收试验，回收率为87.8%110.87%，不同实验室对同一样品进展10此测定结果的相对标准偏差为5.8%。7、注释本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残基。经过五个检测单位的验证，本方法所测定的结果一葡聚糖计。（3）干扰因素试验证明，在样品中参加与粗多糖灯亮的乳糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖与2倍量得淀粉、糊精，不

15、影响样品中粗多糖的测定结果。但在测定过程中应防止糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚硫酸与糖和碳水化合物起反响。（6）某些保健食品中成效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进展测定，但样品预处理时将乙醇改为丙酮即可。（7）液体样品中粗多糖含量低时，可取样50.0mL加热浓缩至5.0mL后，再依法操作测定。（8）洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物用80%乙醇洗净，否那么结果偏高。8、关于保健食品粗多糖测定方法分光光度法的说明多糖因单体组成、结构、聚合度、物化性质等各异，故测定方法不同，此法适用于测定高分子量的糖类物质10000Da多糖的定义是聚合度大于9的糖第110页十一、硫

16、酸软骨素的分光光度测定法本方法硫酸软骨素的检出限为0,01mg/L。1、方法提要结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带正电荷，易与带酸性基团的生物大分子发生静电作用而形成离子配合物，已用于脱氧核糖核酸、干扰素等的分光光度法分析。结晶紫结构中的氨基带正电荷，硫酸软骨素的磺酸基和羧基带负电荷，两者通过静电引力和输水作用力形成络合物，产生变色效应，吸光度降低。吸光度的降低量与硫酸软骨素含量线性相关。4、测定步骤1样品处理：精细称取容物25mg，置于100mL量瓶中，加水适量，超声处理10min，加水定容至100mL,过滤，取续滤液4mL,置于100mL量瓶中，加水至刻度，得样品溶液。2分光光度法测定

17、：取供试品溶液1mL，置于10mL具塞刻度试管中，参加pH5.0的醋酸醋酸钠缓冲液1.0mL和结晶紫并粗三溶液0.6mL，加水至10.0mL，摇匀，30水浴保温20min,放至室温。以水为参比，于588nm波长下测定吸光度。6注释硫酸软骨素是提取于动物软骨的黏多糖类物质，在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要作用。硫酸软骨素除了作为药用品外，大量的是作为改善关节病的补充品，作为健康食品应用，在美国已经风行多年，经过多年的应用，已经证明硫酸软骨素对改善老年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果。第113页第二节皂苷类化合物的测定方法一、总皂苷的分光光度测定法1、方法提要样品中总皂苷经提取、PT

18、大孔吸附树脂柱预别离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。4、测定步骤1样品处理1固体样品：称取1.0g左右样品置于100mL烧杯中，参加2040mL85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL,摇匀，放置，吸取上清液1.0mL,挥干后以水溶解残渣，进展柱别离。2)液体样品：含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进展柱层析。非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL,直接进展柱别离。2柱层析：以PT大孔吸附树脂柱进展层析别离，准确吸取上述已处

19、理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。3显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确参加0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再参加0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL比色管中，塞紧盖子，于60以下水浴加温15min取出，冷却后准确参加冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm比色皿与560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。4标准曲线绘制：人参总皂苷浓度在40200g/mL之间与吸光度值呈线性关系，相关系数r0.999.6、注释回收率：90%105%。第122页第

20、三节黄酮类与苷类化合物的检测方法一、总黄酮的分光光度测定法本方法总黄酮检出限为3.5g/mL。1、方法提要黄酮类化合物是具有苯骈吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4位羰基，且呈黄色。黄酮类化合物多分布于植物中，大多数以苷的形式存在。黄酮类化合物中的3-羟基、4-羟基或5-羟基或邻二位酚羟基与铝盐进展络合反响，在碱性条件下生成红色的络合物。4、测定步骤1样品处理1固体样品：称取12g枯燥的固体样品，用滤纸包紧，置于平底烧瓶中参加50100mL70%乙醇溶液，浸润后，在80水浴下回流2h，至黄酮类化合物根本提取完全。粗提取液冷却后，减压抽滤，并用少量70%乙醇溶液洗涤残渣，合并滤液。在5

21、0下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至烧瓶溶液呈无醇味。倒数烧瓶溶液，并用30mL热水分3次洗涤烧瓶，抽滤后，将滤液导入分液漏斗中，以75mL氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集下层水溶液并定容至50mL。称取12g经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法装柱，用水饱和。吸取上述脱脂后的水溶液12mL，沿层析柱慢慢滴入柱，放置一定时间，待测液被充分吸附后，用70%乙醇或甲醇洗脱，流速为1.0mL/min,至流出液根本无色，一般收集10mL即可。上述洗出液用洗脱剂70%乙醇或甲醇定容后即可用于测定。2液体样品：准确吸取样品3.0mL，定容至50mL后，直接以75mL氯仿分3次萃取脱脂，其余步骤同上。2标准曲

22、线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL相当于芦丁0g、75g、150g、300g、450g、600g，分别移入10mL刻度比色管中，参加30%乙醇液至5mL,各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振摇后放置5min，参加10%硝酸铝溶液0.3mL,摇匀后放置60min，加1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL,用30%乙醇定容至刻度，以零管为空白，摇匀后用1cm的比色皿，在510nm处测定吸光度，绘制芦丁含量g与吸光度的标准曲线。3样品测定：根据样品中总黄酮含量上下，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤与510nm处进展吸光度的测定

23、样品如有沉淀，应过滤后测定。芦丁浓度在0.00750.060mg/mL围呈直线关系。6、注释1方法精细度：对同一样品在一样条件下，重复测定6次，其相对标准差为4.4%。2方法回收率：对总黄酮含量为1.52%的减肥茶参加相似浓度的芦丁标准品进展回收试验，其平均回收率为103.2%。3对于以葡萄、山楂等有色水果味原料的样品，可用未加铝盐试剂的样液为空白或采用标准参加法进展测定，以防止样液颜色对测定干扰而引起结果偏高。第131页六、原花青素的分光光度测定法本法适用于各种植物组织、器官与其制剂如葡萄子与松树皮提取物中原花青素含量的测定。1、方法提要原花青素也称缩合单宁是黄烷3醇的寡聚体与多聚体，属多份

24、类化合物。与其他酚类化合物不同，黄烷醇缩合单宁、单体、双体等在酸性介质中可与香草醛反响，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。如无提纯的原花青素，可用儿茶素代替4、测定步骤1样品中原花青素液的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水7+3，体积比或者经60%甲醇提取，40以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后沉淀。冰冻枯燥的固体原青花素制剂，直接溶于水中先加少量甲醇助溶，制成原青花素液。原青花素液与5下暗环境中保存备用。2样品测定：用锡箔将试管14mm*120mm包裹严，仅留试管口用于加样。向管参加试样0.5mL，再加3.0mL4%香草醛甲醇液混合，然后参加1,5mL浓盐酸

25、，彻底混匀，室温下显色15min，也可在暗环境下进展以上操作。最后在500nm处比色。0.1mg原花青素在500nm处的吸收值为0,556、注释1本方法的检测围为5500*10-3mg/0.5mL样液。精细度与准确度大于1*10-3mg。2反响试管应用清洁剂浸泡24小时，彻底洗涤干净。3进展比色时，用水作空白对照。4500nm处的OD值应控制在3以下。5试样中花青素含量较高时，应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。6显色液应避光放置。第133页七、花青素的铁盐催化比色测定法1、方法提要原花青素氧化后能生成红色的花青素。通常用铁盐催化比色法测定总量，利用硫酸高铁铵的催化作用，

26、以盐OD550,与原花青素化学对照品比拟，便可定量计算出样品中原花青素的含量。4、测定步骤1标准曲线的绘制:分别移取上述不同浓度系列使用液1.00mL置于10mL刻度试管中，参加9mL上述反响混合液，置于沸水与中加热，待水浴温度恢复至99+1时开始计时，并塞紧塞子勿摇匀，准确加热40min后，立即取出，用冰水快速冷却至室温，以正丁醇定容至刻度线，塞紧后充分摇匀，在550nm处以空白管调零扣除背景，测定吸光度值OD550，并以最小二乘法绘制原青花素浓度g吸光值OD550曲线。2待测样品液的制备：准确称取胶囊容物0.51.0g，加污水乙醇遇醇溶性较差的样品，可参加少量的蒸馏水促进溶解，溶解对于软胶

27、囊取整粒称重后再用小刀割破，用超声波以乙醇屡次提取,定容至100mL,摇匀，即得到样品储藏液。再移取0.51mL储藏液根据提取物浓度上下确定具体的量，使待测液原花青素浓度在0.050.20mg/mL围定容至50mL,摇匀得到待测样品液。3样品测定：移取1.00mL待测液依照上述标准曲线绘制同样操作，测定OD550，查标准曲线，并计算原花青素的含量。6注释（1）线性围：本法原花青素浓度在26.00416.0g围，最低检出限为4g。（2）准确性：添加浓度为52.00208.0g的标准OD550在0.1570.520围，3次测定平均回收率在90.64%109.5%。（3）精细度重现性：同一样品液8次

28、测定，相对标准差为2.13%2.98%。（4）干扰物质：常见的维生素，芦丁、类胡萝卜素、食品抗氧化剂、各类油脂基体未见明显干扰，由于多糖、蛋白质不溶于无水乙醇，故不会干扰测定。第151页第四节酶、激素与源性物质的检测方法七、氯化高铁血红素的分光光度测定法本方法氯化高铁血红素的最低检出浓度为0.15g/mL。1、方法提要氯化高铁血红素是以新鲜猪血经冰醋酸法提取加工而成的动物性补铁剂，能被人体黏膜上皮细胞分解为原卟啉与二价铁，从而进入血液被机体吸收和利用。氯化高铁血红素制品以氢氧化钠溶液溶解和定容后，以1cm比色皿于波长385nm处进展检测，与标准品比拟进展定量。4、测定步骤1样品处理1固体样品胶

29、囊或片剂：准确称取一定量样品，一边研磨，一边参加0.1mol/L氢氧化钠，使氯化高铁血红素充分溶解注意不能加热溶解，否那么引起结果偏高，定容后备检测。2液体样品：摇匀后准确吸取一定量样品，用0.1mol/L氢氧化钠稀释后待测定。2标准曲线绘制：准确称取经105枯燥至恒重的氯化高铁血红素标准品10.00mg，用0.1mol/L氢氧化钠充分溶解并定容至100mL,容量瓶中。吸取此储藏液10mL，加于100mL容量瓶中，参加0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度，摇匀，配成10g/mL的标准使用液。分别准确吸取标准使用液0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL至10mL比色刻度

30、试管中，加0.1mol/L氢氧化钠至刻度，以零管作空白调零，于385nm处测定吸光度，并绘制氯化高铁血红素含量吸光度标准曲线。氯化高铁血红素浓度在1.27.0g/mL围吸光度与浓度呈直线关系3样品测定：取上述样品处理液依照标准曲线操作步骤测定385nm处的吸光度值，依据标准曲线查得氯化高铁血红素含量。第201页第九节、其他化合物的检测方法四、总蒽醌的分光光度测定法1、方法提要蒽醌类化合物经酸水解用氯仿提取后，再用稀碱液萃取，与1,8二羟基蒽醌对照品比拟，在分光光度计530nm处比色定量。4、测定步骤1样品处理：准确称取均匀的样品粉末0.52g或适量，液体样品可取10mL左右视含量而定，置于200mL带冷凝管的锥形瓶中，加5mol/L硫酸40mL，加热回流水解2小时，稍冷后加氯仿30mL，水浴加热回流1小时，别离出氯仿液，再加氯仿30mL，加热回流水解30min，别离出氯仿液，再加氯仿20mL，如此反复，提取至氯仿无色位置，收集氯仿提取液过滤，将滤液移至容量瓶中，用氯仿定容至刻度V1,摇匀，精细吸取一定量10mL左右V2置分液漏斗中，用混合碱液每次5mL萃取至无色，将萃取液移至50mL量瓶中，用混合碱液调至刻度。6、注释1总蒽醌包括游离蒽醌和结合蒽醌，游离蒽醌测定，样品直接用氯仿提取至无色，再用混合碱液