western转膜条件.docx

1、western转膜条件western转膜条件蛋白来源：总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：4070KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA转膜时间：6090minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：内皮细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100V转膜时间：6070min设备名字是“Bio-Radmini”

2、。蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12V转膜时间：30-40min设备：“Bio-Radmini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。蛋白来源：293T细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90V-110V，控制电流不要超过300mA。转膜时间：70min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33KDaWB用膜类型

3、、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KDaand42KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120V恒

4、压转膜时间：90min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72KD，42KD和22KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜，两张膜。转膜时间：90min设备：“Bio-Radmini”建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。蛋白来源：大鼠PBMC蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：55KDWB用膜类型、孔径：的PVDF膜转膜方式（恒

5、流）：湿转转膜时间：60-90min设备：“Bio-Radmini”建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了其实的膜一般不怕转过头以我们的经验，转膜时间、电压其实也有很大范围的调整，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过一张膜转，17KD的和170KD的，按照170KD的条件，17KD的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB用膜类型、孔径：milliporePVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流。转膜时间：180min设备：“Bio-Rad”建议：电转保持电压在70V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓

6、冲液了。蛋白来源：白血病细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB用膜类型、孔径：的NC膜转膜方式（恒流）：湿转，90min，设备：“Bio-Rad”建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200KDaWB用膜类型、孔径：milliporePVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：120v恒压转膜时间：120min转膜设备：湿转Bio-Rad建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BS

7、A封闭，减少背景。蛋白来源：胰腺细胞蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：90-130KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：250mA恒流转膜时间：150min转膜设备：湿转蛋白来源：原核表达蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：38KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100V转膜时间：120min蛋白来源：心脏蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：220kDa，130kDa，70kDa，41kDaWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70v120min，180min，5-6h转膜设备：伯乐湿转建议改进方向（可选）：40kDa一下，7

8、0v，60-90min足够，40-70kDa90-120min即可。70-120kDa，70v，120-180min足够，120-180kDa，180-240min，180kDa以上建议6h。蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：53KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：80V100min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：-actin蛋白分子量：42WB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：504h转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：脑组织蛋白名称（可保密）：蛋白

9、分子量：16KD、27KD、32KD、42KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒流1mA/cm2或2mA/cm2转膜时间：不定转膜设备：北京六一仪器建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。在预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时间有时会有问题。蛋白来源：CHOcell蛋白名称（可保密）：酶原蛋白分子量：40KDWB用膜类

10、型、孔径：的PVDF膜（Biorad）转膜方式（恒压）：100V，湿转，转膜时间：60min。设备：Tanon（上海天能）建议：1.转膜液现用现配，用完倒掉。2.转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。蛋白来源：Hepg2蛋白名称（可保密）：EGFR蛋白分子量：170kdWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：24V转膜时间：2个半小时转膜设备：伯乐半干转蛋白来源：肝癌细胞蛋白名称：HIF-1蛋白分子量：120kDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式（恒压）：80伏，湿转转膜时间：150分钟设备：“Bio-Radmini”建议：湿转，转膜液特别重要，

11、否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36kD。蛋白来源：心肌细胞总和膜蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：128KD，100，60，55，43KDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70V200min转膜设备：湿转Bio-Rad建议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70V电压下，电流约154mA。甲醇可以加到150ml。对大分子量如200KD转膜时间延长6-8h

12、。蛋白来源：肺脏蛋白名称（可保密）：ICAM-1蛋白分子量：85110KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA转膜时间：120min设备名字Bio-Radmini一抗用的santacruz1mL包装的。比例调整到1：800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16KDaWB用膜类型、孔径：膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流转膜时间：65min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：28KDaWB用膜类型、孔径：膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流转膜时间

13、：60min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80KDWB用膜类型、孔径：膜转膜方式（恒压、恒流）：半干转移系统恒流，勿超过cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）转膜时间：60-90min设备：Bio-Rad其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：17-116kdWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流2

14、00mA转膜时间：3h转膜设备：湿转北京六一24Dmini蛋白来源：COCOS7293T蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：482518KDWB用膜类型、孔径：膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转90V电流约为230-280mA之间。两张膜串联叠加。转膜时间：40min设备：Bio-Rad法码西亚蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：30-60KDaWB用膜类型、孔径：pallNC膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流平方厘米膜转膜时间：60-90min转膜设备:北京六一半干转建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和

15、膜一起浸泡，这样效果很好。蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：notch蛋白分子量：60-120KDaWB用膜类型、孔径：pallNC膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流转膜时间：-20度冰柜120min转膜设备:湿转Bio-Rad建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。蛋白来源：胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：18KDa、36KDa、55KDa、98KDaWB用膜类型、孔径：NC膜PALL转膜方式（恒压、恒流）：恒流转膜时间：60min转膜设备：湿转Bio-Radmini转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于

16、一百多，一般加入SDS，时间延长结果会更好些。由于，目前试验的蛋白就都不大，所以，我们都采用不加SDS的转缓液，跑出来的条带也很整齐、干净。蛋白来源大肠癌205蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：92kd，43kdWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：90min转膜设备：湿转，天能。蛋白来源：大鼠脑组织蛋白名称（可保密）：BDNF（28KDa）、Bactin（42KDa）、LaminB（72KDa），以及磷酸化蛋白（保密43KDa）WB用膜类型、孔径：PVDF（）膜转膜方式（恒压、恒流）：300mA恒流转膜时间：60min转膜设备：湿转Bio-RadMini转膜缓冲液：25

17、甲醛觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker转到膜上很鲜艳。用立春红染色效果也很好。蛋白来源：表达产物蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：29KDaWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒流转膜时间：80min转膜设备:湿转Bio-Rad蛋白来源：celllysate,culturemedium蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：15-50kDWB用膜类型、孔径：NC，PVDF，转膜方式（恒压、恒流）：恒压，semi-dry转膜时间：about2hisokiftheproteinissmallandthevoltagecankeep100V，i

18、fnotincreaseto3-4h。转膜设备：Bio-Rad蛋白来源：肺脏、肝脏等。蛋白名称（可保密）：actin蛋白分子量：43kDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流200mA转膜时间：4560min设备名字Bio-Radmini用的santacruz分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。蛋白来源肺脏蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：19kd,35kdWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒流250转膜时间：150min转膜设备：湿转Bio-Radmini蛋白来源：大鼠血管蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：140k

19、dWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒流，200mA转膜时间：210min转膜设备:湿转,北京六一蛋白来源：心肌蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：90kDa，70kDa,WB用膜类型、孔径：NC转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70v240min，120min，60min转膜设备：伯乐湿转蛋白来源：脑蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：16KD60KDWB用膜类型、孔径：16的用的PVDF，60的用的NC转膜方式（恒压、恒流）：20V转膜时间：16的30min，60的90min转膜设备：Bio-Rad半干蛋白来源：子宫内膜癌组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：WB用膜类型、孔径：N

20、C膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流400mA转膜时间：90min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：真核表达蛋白名称（可保密）：（多种，30个以上）蛋白分子量：40-200kDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒压100V（电流在280mA至350mA之间）转膜时间：60min（M100kD）,60-100min(100kDM200kD)转膜设备：湿转蛋白来源：大鼠肾脏蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：130kDWB用膜类型、孔径：膜PALL转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流350mA转膜时间：120min设备名字Bio-Radmini一抗用的sigma羊抗大鼠，包装的，打折

21、后价格3000多，有些贵哦。比例调整到1：1500左右条带可，用BSA封闭。但是背景稍高。蛋白来源：脑组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：38KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜，转膜方式（恒压、恒流）：80v恒压转膜时间：180min转膜设备：湿转Bio-Radmini蛋白来源：真核表达蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：约35kD（双亚基）WB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒流200mA转膜时间：60min转膜设备：湿转Bio-rad,天能，六一转膜时间其实不需要那么长的，转膜没转上一般原因不在这里，可能是转膜液的原因：有些蛋白SDS可能影响其与膜的结合，还原型电泳因巯基乙醇的原因也

22、可能导致后面的抗体不结合（这是我最近的经验教训），还有一抗的选择很重要，一定要选识别线性表位的抗体，才能用于做WB。蛋白来源：细菌蛋白蛋白名称（可保密）：全部的可溶性蛋白蛋白分子量：11-170KDWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA转膜时间：80min蛋白来源：骨肉瘤细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：72kDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒流200mA转膜时间：20-30min转膜设备：Bio-Rad型号忘了，就是有4个插孔的电泳仪。建议改进方向：低温很重要，新鲜的电转液也很重要。蛋白来源：骨肉瘤CELLLINE蛋白名称（可保密）：

23、Betaactin蛋白分子量：42kDaWB用膜类型、孔径：(Invitrogen)转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒压22v转膜时间：90min转膜设备：X-cellSureLockMini-cell(Invitrogen)建议改进方向：转膜过程冰水浴，保持低温，TransferBuffer重复使用。蛋白来源：肾瘤细胞蛋白分子量：39kDaWB用膜类型、孔径：(Invitrogen)转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100v转膜时间：50min蛋白来源：MCF7蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：70kDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜（GE）转膜方式（恒压、恒流）：湿转100伏转膜时间：60min

24、转膜设备：伯乐小转膜仪蛋白来源：pichia分泌表达蛋白名称（可保密）：细胞因子等蛋白分子量：17到30kDaWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100V转膜时间：60min这个条件除了100KDa的预染maker转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。？所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上，便于分析交流。我先说我的吧，是大师兄师姐的配方，我用了感觉还不错，但是100KDa以上的转的不好。蛋白转印缓冲液:Tris碱，甘氨酸

25、9g，甲醇200ml，加水定容至1000ml。蛋白来源：大鼠坐骨神经蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：30kDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA转膜时间：45min转膜设备:Bio-Rad蛋白来源：小鼠胚胎成纤维蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：36KDa、55KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流转膜时间：60min转膜设备:湿转Bio-Radmini垫子变薄时，可用三层纤维垫，也没问题。蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞蛋白名称（可保密）：P53P21RAD51GAPDH蛋白分子量：53KDa、21KDa、37KDa、36KDaWB用膜

26、类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：恒压110v转膜时间：60min转膜设备:湿转Bio-Radmini蛋白来源：HEK293总蛋白蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：200KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜(用甲醇预先处理)转膜方式（恒压、恒流）：恒压25V转膜时间：过夜(16-20hours)转膜设备:bioradmini蛋白来源：人前列腺癌细胞蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：40KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜(用甲醇预先处理)转膜方式（恒压、恒流）：恒压20V，限制最高电流。转膜时间：过夜(16-20hours)转膜设备：bioradsemi-dry蛋白来源：组织蛋白名称（

27、可保密）蛋白分子量：42KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜（）转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流转膜时间：60-90min转膜设备：湿转Bio-Rad蛋白来源：蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：4kdWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒压15v转膜时间：O/N转膜设备:Bio-RadMini湿转转膜液的配制：for1Ltransferbuffer，200mlMethanol，。用了Trcine-gelSDSPage，效果不错蛋白来源：肾脏蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：23kdWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒压20v转膜时间：35mins转膜设备:Bio-Rad半干

28、蛋白来源：来自MDCK增殖的流感病毒裂解物蛋白名称（可保密）：PB1蛋白分子量：96kd（注意，10%SDS-PAGE，冰上电泳。用预染marker观察100kd的条带跑到胶的正中间位置时，才开始转膜，否则转膜效率降低）WB用膜类型、孔径：NC膜，转膜方式（恒压、恒流）：恒压，100V转膜时间：2hours转膜设备:BIO-rad转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。转膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS以及多大质量浓度等）：甘氨酸，200ml甲醇。蛋白来源：肾脏蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：9kdWB用膜类型、孔径：转膜方式（恒压、恒流）：恒压20v转膜时间：30min转膜

29、设备:Bio-Rad半干蛋白来源：软骨细胞蛋白名称（可保密）：b-actin蛋白分子量：43kdWB用膜类型、孔径：PVDF膜，转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流，350mA转膜时间：85min转膜设备:BIO-rad转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。转膜液的配制：（甘氨酸，200ml甲醇，用双蒸水定容到1L）蛋白来源：宫颈癌细胞蛋白名称：保密蛋白分子量：60kDWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流，按膜的面积来算电流，标准大小的膜-60mA/张（转膜时间：2h转膜设备：Bioradsemi-dry转膜液的配制：BostonBioproductTransf

30、erbuffer+10-20%甲醇建议改进方向：做半干转的时候，三明治上面再压一张滤纸，可以保证压紧，转膜效率稳定。用这个条件做过不少不同分子量的蛋白，最小从15kD，到最大235kD，都可以得到稳定结果。转膜液只用一次，不重复使用。蛋白来源：家牛肝细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：30kDaWB用膜类型、孔径：NC，6x8 cm，转膜设备：Invitrogen湿转，外层冰水浴冷却。转膜方式（恒压、恒流）：恒流170mA转膜时间：根据胶的厚度而定，每转30min，的超厚预制胶转。转膜液的配制：10mM碳酸氢钠，3mM碳酸钠，20%甲醇。建议改进方向：已考染的胶脱色后可以用此法转膜，条带稍