本科毕业设计贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究.docx

1、本科毕业设计贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究本科毕业论文（设计）贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究 安徽新华学院本科毕业论文（设计）独创承诺书本人按照毕业论文（设计）进度计划积极开展实验（调查）研究活动，实事求是地做好实验（调查）记录，所呈交的毕业论文（设计）是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中特别加以标注引用参考文献资料外，论文（设计）中所有数据均为自己研究成果，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的工作已在论文中作了明确说明并表示谢意。毕业论文（设计）作者签名： 日期： 贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究 摘 要 目

2、的对贡菊花和野菊花进行对比鉴别，找到合适的薄层鉴别方法，从化学成分上对贡菊花和野菊花进行鉴别。方法按有关文献方法及改进法分别对贡菊花和野菊花中绿原酸及蒙花苷进行薄层色谱鉴别试验。结果本文中贡菊花和野菊花中绿原酸鉴别方法二和蒙花苷鉴别方法二操作简便、色谱斑点显色清晰、分离效果好。贡菊花和野菊花供试品色谱中，在与绿原酸对照品色谱相应的位置均有相同颜色的荧光斑点，贡菊花的斑点略暗于野菊花的斑点；在与蒙花苷相应的位置亦均有颜色相同的荧光斑点，野菊花的斑点明显亮于贡菊的斑点。结论比较贡菊和野菊花的实验结果，贡菊花和野菊花中绿原酸鉴别方法二和蒙花苷鉴别方法二具有良好的专属性，重现性,更具有可行性，可用于贡

3、菊花和野菊花的薄层色谱鉴别。从色谱图直观分析，贡菊花和野菊花中均含有绿原酸和蒙花苷，但其含量存在差异，本研究内容为贡菊花和野菊花的薄层色谱指纹图谱分析奠定了基础。关键词：贡菊花；野菊花； 绿原酸； 蒙花苷； 薄层色谱法 Study on identification of the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum of thin-layer chromatography AbstractPurpose:Compared to identify the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum

4、 ,and find the right TLC method to identify them from the chemical composition.Method: Making a TLC identification test on the chlorogenic acid and Linarin in the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum according to the literature method and improvement method.Outcome: The second method to iden

5、tify chlorogenic acid with Linarin in the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum is easy to operate, and chromatographic spots is clear, and separation is good, the tribute chrysanthemums and wild chrysanthemums test products for chromatography, The corresponding position in the chlorogenic ac

6、id reference standard chromatographic have the same color fluorescent spots, The tribute chrysanthemums spots slightly darker than wild chrysanthemums spots;The corresponding position in the Linarin reference standard chromatographic have the same color fluorescent spots, The wild chrysanthemums spo

7、t is noticeably brighter than the tribute chrysanthemums spots.Conclusion: Compare the experimental results of the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum, The second method to identify chlorogenic acid with Linarin in the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum is good on specificity, rep

8、roducibility which can be used to make a TLC to identify The tribute chrysanthemum with wild chrysanthemum . Visual analysis from the chromatogram ,the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum both contain the chlorogenic acid and Linarin, but differ in their contents. The content of this study

9、laid the foundation for making a thin-layer chromatographic fingerprint analysis for the tribute chrysanthemum and wild chrysanthemum .Keywords: the tribute chrysanthemum; wild chrysanthemum; chlorogenic acid; Linarin; thin-layer chromatography前言.11实验材料.21.1 仪器.21.2 试药.22 试验方法.22.1 试剂的配制.22.2 供试品的制备

10、.22.2.1以绿原酸为对照品时供试品溶液的制备.22.2.2以蒙花苷为对照品时供试品溶液的制备.32.3对照品溶液的制备.32.3.1绿原酸对照品的制备.32.3.2蒙花苷对照品的制备.32.4鉴别试验.32.4.1贡菊花和野菊花中绿原酸的鉴别.32.4.2 贡菊花和野菊花中蒙花苷的鉴别.43 实验结果.64 讨论.74.1吸附材料.74.2 展开系统 .74.3 显色方法.74.4 检识条件.84.5试验温度 .8综述.91菊花的临床应用.101.1眩晕.101.2眼疾.101.3偏头痛.111.4急慢性咽炎.111.5溃疡性结肠炎.112野菊花的临床应用.122.1治疗盆腔炎.122.2

11、预防昏迷患者口臭及口腔炎的发生.122.3治疗新生儿尿布皮炎.122.4治疗儿童疱疹性咽峡炎.132.5预防治疗高血脂症.132.6慢性支气管炎.132.7治疗前列腺电切术后急迫性尿失禁.133 结语.14致谢.15参考文献.16贡菊花与野菊花薄层色谱鉴别方法的研究 前 言 贡菊和野菊花都是非常重要的药用植物。贡菊也称“黄山贡菊”、“徽州贡菊”，又称徽菊。中华人民共和国药典2010年版一部菊花品种收载贡菊、滁菊、毫菊和杭菊4种，被称为中国的四大药用菊1。因在古代被作为贡品献给皇帝，故名“贡菊”。产于古徽州，今安徽省黄山市，主产区在黄山歙县金竹村一带。黄山贡菊为菊科植物菊( Chrysantem

12、um morifolium Ramatde) 的干燥头状花序,含挥发油、菊甙、氨基酸、黄酮类及绿原酸等多种成分 2 ，具有抗癌抗肿瘤、抑菌抗病毒、抗氧化抗衰老、抗心脑血管疾病、抗凝血及中枢神经作用等3，长期饮用贡菊可以避暑解烦、排毒健身、清净五脏、明目醒脑、益智延年4 。 野菊花是菊科植物菊花( Chrysanthemum indicum)的干燥头状花序，在我国大部分地区广泛分布，具有疏风、清热、明目、解毒的功效，主要治疗头痛、眩目赤、心胸烦热、痔疮、肿毒等症。本草纲目有：菊，味甘，性寒，散风热，平肝明目。神农本草经认为菊花能“主诸风头眩、肿痛、目欲脱，味甘，性寒，散风热，平肝明目”。近年研究

13、发现，野菊花富含黄酮类、挥发油、萜类、维生素、有机酸类等化学成分，以及硒、锰、镍等微量元素5，而且Ca、Mg、Fe的含量比菊花中的高6。其中野菊花的主要药效成分是黄酮类化合物。药理学研究表明野菊花提取物具有抗菌消炎、抗癌、抗肿瘤、抗病毒、免疫、降血压、保护心血管系统、保肝和神经保护等作用。目前临床多用于治疗各种炎症、 病毒性疾病、 心血管疾病等，如病毒性肝炎、慢性咽炎、高血压、传染性软疣、前列腺炎等。因此具较好的临床应用价值和潜力7。 故对贡菊花和野菊花进行鉴别研究是具有非常重要的意义。而目前药典及有关文献收载的贡菊花和野菊花薄层鉴别方法不够严密完整。为进一步有效控制贡菊花和野菊花的质量标准，

14、本课题将文献中鉴别方法进行改进，采用绿原酸和蒙花苷为对照品，探索薄层色谱的最佳条件。使得贡菊花和野菊花鉴别更加严密、完整、科学，更能体现出贡菊花和野菊花的质量，提高其鉴别标准，同时为其薄层色谱指纹图谱分析提供依据。1 实验材料1.1 仪器 电子天平（型号：AB135-S;厂家：switertand） 超声波清洗仪（型号：AS515OA） 水浴锅(型号：HH-S2;厂家：江苏金坛市几金城国胜实验仪器厂) 紫外光灯（型号：ZF-2;厂家：上海安亭电子仪器厂） 烘箱（型号：GZX-9030MBE;厂家：上海博迅实业有限公司医疗设备厂） 吹风机（型号：SB80；厂家：上海超人电气有限公司） 1.2 试

15、药 石油醚(3060) 甲醇 乙醇 稀盐酸 甲苯 冰醋酸 乙酸乙酯 丁酮 三氯甲烷 甲酸 三氯化铝（规格均为AR）贡菊花和野菊花(来源于宣城百草药业有限公司） 绿原酸和蒙花苷(纯度98，由安徽中医学院天然药化教研室提供）2 实验方法2.1试剂的配制稀盐酸 取盐酸23.4ml加水稀释至100ml，本液含盐酸9.5%-10.5%2%三氯化铝溶液 称取0.5克三氯化铝溶解到25ml水中即可2.2供试品的制备2.2.1以绿原酸为对照品时供试品溶液的制备1 取野菊花1g，剪碎，加石油醚(3060)20ml，超声处理10分钟，弃去石油醚，药渣挥干，加乙酸乙酯50ml及稀盐酸1m1，超声处理30分钟，滤过，

16、滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另贡菊花1克同法制成供试品溶液。2.2.2以蒙花苷为对照品时供试品溶液的制备8 取野菊花粉末0.3g，加甲醇15ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取贡菊粉末0.3g，同法制成供试品溶液。2.3对照品溶液的制备2.3.1绿原酸对照品的制备 取绿原酸对照品5mg，用乙醇定容在10ml容量瓶中超声溶解即可。2.3.2蒙花苷对照品的制备 取蒙花苷对照品2mg，用甲醇定容在2ml容量瓶中超声溶解即可。2.4鉴别试验2.4.1贡菊花和野菊花中绿原酸的鉴别方法一1 取聚酰胺薄膜一张，在薄膜一端1cm处轻轻的画一条起始线，在起始线上均

17、匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取绿原酸对照品溶液点样于点1上，取贡菊花和野菊花供试品溶液分别点样2和3上，各11。配制甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(1：15：1：1：2)的混合溶液，置于分液漏斗中，振摇，静置，取上层溶液置层析槽中作为展开剂，将点好样的聚酰胺薄膜放进层析槽中展开，等到展开剂上行到距离薄膜上方1cm左右时，拿出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果如图1.1。方法二（改进方法一） 取聚酰胺薄膜一张，在薄膜一端1cm处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取绿原酸对照品溶液点样于点1上，取贡菊花和野菊花供试品溶液分别点样2和3上，各

18、11。配制甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(1：15：1：1：2)的混合溶液，置于分液漏斗中，振摇，静置，取上层溶液置层析槽中作为展开剂，将点好样的聚酰胺薄膜放进层析槽中（不接触展开剂）饱和10分钟后再将薄膜置展开剂中展开，等到展开剂上行到距离薄膜上方1cm左右时，拿出，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。如图1.2。图1.1 从左到右依次为绿原酸，贡菊花，野菊花图1.2 从左到右依次为绿原酸，贡菊花，野菊花2.4.2 贡菊花和野菊花中蒙花苷的鉴别方法一8 取硅胶G板一块放置烘箱中活化半小时，取出冷却，在板一端1cm处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，

19、取蒙花苷对照品溶液点样于点1上，取野菊花和贡菊供试品溶液分别点样2和3上，各41。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:0.5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝水溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。如图1.3。方法二 取硅胶G板一块放置烘箱中活化半小时，取出冷却，在板一端1cm处轻轻的画一条起始线，在起始线上均匀地用铅笔画三个点，依次为1,2,3，取蒙花苷对照品溶液点样于点1上，取贡菊花和野菊花供试品溶液分别点样2和3上，各31。以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（8:2:1:0.5）为展开剂，将点好样的硅胶G板放进层析槽中（不接触展开剂）饱和10分钟后再将板置展开剂中展

20、开，展开，取出，晾干，将其放入2%三氯化铝水溶液中浸润，迅速取出，热风吹数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。如图1.4。图1.3 从左到右依次为蒙花苷，野菊花，贡菊花图1.4 从左到右依次为蒙花苷，贡菊花，野菊花3 实验结果 以上试验方法，贡菊花和野菊花供试品色谱中，在与绿原酸和蒙花苷对照品相应的位置上，都能显示相同颜色的荧光斑点（365nm）。方法一斑点模糊，有拖尾现象，分离度不好，薄层图谱所显示的斑点少，而方法二通过改进后试验，结果分离效果好，斑点清晰，且分离的斑点较多，Rf值适中，薄层色谱所提供的信息也更加丰富，更有利于对贡菊花和野菊花进行分析研究。由图谱还可观察到贡菊花和野菊花鉴别

21、绿原酸时，其两者斑点近乎相同；而鉴别蒙花苷时，野菊花的斑点亮而明显，贡菊花的斑点模糊不清。 通过上述实验薄层色谱图及讨论可知，方法一参照了中国药典及有关文献中菊花和野菊花薄层色谱鉴别方法稍作改进试验，结果薄层图谱所显示的斑点少，模糊，有拖尾现象，分离度不好。方法二较方法一斑点分离效果较好，斑点也比较清晰圆整，且分离的斑点较多，Rf值较适中，故方法二可作为贡菊花和野菊花薄层色谱鉴别的较优选择。 经过对方法二多次薄层鉴别试验，发现色谱图中特征斑点Rf值差异范围0.1，表明方法二重现性也很好，故可作为贡菊和野菊花定性鉴别的方法。此外，由实验可大致推断出贡菊花和野菊花中绿原酸含量相近，而蒙花苷含量差异

22、较大，其中野菊花中蒙花苷含量明显大于贡菊花的含量。 由于本实验的薄层指纹图谱还是不太理想，所以还需改进。4 讨 论4.1吸附材料 比较了硅胶G板，H板，254板及聚酰胺薄膜这四种吸附剂的吸附效果，结果表明，鉴别贡菊花和野菊花中绿原酸时使用聚酰胺薄膜显示的色谱斑点集中、清晰、圆整、重现性好，所提供的信息量大；而鉴别蒙花苷时则使用硅胶G板效果好。4.2 展开系统 试验了多个展开系统和二十余种不同的配比，结果表明， 鉴别贡菊花和野菊花中绿原酸时以甲苯一乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水(1：15：1：1：2)混合液的上层溶液为展开剂效果好；鉴别蒙花苷时以乙酸乙酯一丙酮一甲酸一水(8:2:1:0.5)为展开剂

23、效果好 。4.3 显色方法 对于绿原酸的显色方法直接将展开好的薄膜用暖风吹干即可。而黄酮类化合物多用三氯化铝试液喷雾显色，然而试验用三氯化铝试液喷雾所得的薄层色谱斑点很不均匀，斑驳隐隐，对于未完全分离的斑点或分离度不大的斑点的观察十分困难，这是由于三氯化铝试液喷雾不均匀所造成的。三氯化铝试液大多以乙醇为溶剂，喷雾量少了很难显色或显色不均匀，喷多了不仅不能使显色清晰，反而会将色谱斑点推移、扩散，甚至洗脱。试验采用2%三氯化铝水溶液将晾干的板浸润。因为蒙花苷很难溶于水，而且水对于硅胶吸附的蒙花苷洗脱能力极弱，因此不会出现色谱斑点推移、扩散，甚至洗脱的现象。故使用2%三氯化铝水溶液浸板显色，其板面及

24、斑点显色均匀，清晰柔和，操作更为简便，但板吸附了较多水分，需要热风吹至数分钟后才易显色。4.4 检识条件 贡菊花和野菊花鉴别试验将处理好的聚酰胺薄膜和硅胶G板放在254nm和365nm紫外灯下比较后，结果表明，在254nm紫外灯，均不显示有效荧光斑点或者斑点不清晰。而在365nm紫外灯下具有明显而清晰的荧光斑点。4.5试验温度 在试验过程中，环境温度对其影响也较大。温度太高展开剂挥发快，薄层板展开速度较快，有些斑点不易分离。蒙花苷鉴别显色时，板在浸润显色剂后需要热风吹数分钟才可显示较好的斑点。综述菊花与野菊花临床应用的研究进展摘要 菊花是一种疏散风热、明目解毒的常用药材，自古以来人们一直将其誉

25、为解百毒、利血脉的良药。而野菊花为其同属近缘植物，与菊花在性味、功效方面多有相似之处。临床上常有人将菊花与野菊花相互代替使用。二者虽功效相近，然而临床应用多有差异9，现作进一步比较如下。关键词 菊花； 野菊花； 临床应用Abstract: Chrysanthemum is a commonly used herbs, for evacuation of wind-heat, eyesight detoxification. Since ancient times, it has been hailed as detoxification medicine. And the wild chrys

26、anthemum belongs to its related plants, is similar to chrysanthemum on taste, efficacy. In clinical applications, chrysanthemum and wild chrysanthemum is often used intercheangably. Although they are similar on Efficacy,clinical application, However, exist many differences, Now for further comparison as follows.Keywords: Chrysanthemum; Wild Chrysanthemum; Clinical Cpplication 菊花10是我国传统常用中药材。菊花味甘、苦，性凉。主要功效有疏散风热，平肝明目。主治风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花，高血压等。菊花分为观赏菊、食用菊和药用菊。 中华人民共和国药典)2010年版一部收载贡菊、滁菊、毫菊和杭菊4种，被称为中国的