细胞电融合仪 ECM安装操作手册.docx

1、细胞电融合仪 ECM安装操作手册细胞电融合仪ECM2001安装/操作手册1 检查清点货物及安装2 技术规格3 操作细则4 产生杂交瘤的实验方法5 服务及保修6 附录：电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用第一节检查清点货物及安装1. 拆封包装：ECM2001细胞电融合仪采用纸箱包装，收到货物后，请检查包装完好程度，如果有任何损伤请速与我公司联系。请小心地拆开包装，将仪器及附件取出，并依据合同清点货物内容及数量，如果有任何外观损伤或者货物与合同有差异，请速与我公司联系。请保留包装箱，以便满足将来一旦要运送该仪器的需求。2. 电源：该仪器采用220V电源，请确认您的电源为稳定的220V。如果电源不稳

2、定的话，有可能对仪器造成严重损害！请确认您的电源严格接地，我们提供给您的电源线为三芯带地线电源。请不要改动该三芯电源线结构，否则有可能对仪器造成严重伤害！3. 安装：如果确认仪器包装无问题，且与合同相符，则可以进行安装。请将仪器安装在一个干燥，水平，常温环境中。尽量避免灰尘和化学药品对仪器的损害。仪器与其他物品的距离不少于15厘米，以保证仪器冷却的需求。将电源线等附件拆包装，待用，依据后续章节继续操作。第二节技术规格1. 外观尺寸：宽：17高：11长：17.52. 重量：47磅3. 电气规格：电源：220V，单相，7A耐熔保险交流：频率固定在1MHZ电压：075V（从零到峰值）脉冲时间：099

3、秒直流：高电压模式（HV）电压：103000V（峰值）脉冲时间：199毫秒低电压模式（LV）电压：10500V（峰值）脉冲时间：199毫秒1.01 0.99毫秒脉冲次数：1994.前面板控制介绍：编号名称功能1SETACVOLTAGE此旋钮用于设置交流电压（0-75V）。调整的数值显示在左侧的显示屏上。2ACDURATIONSECONDS此按钮用于设置自动模式下交流电被激活时间的长度。时间用“+”和“-”按钮设置，最大到99秒。3POSTFUSIONACSECONDS此按钮用于设置自动模式下脉冲施加后作用的时间。最大到9秒，使融合后的细胞聚集在一起。4SELECTTHEMODE此旋钮用于选择电

4、穿孔模式：HV高压模式（10-3000伏/1-99微秒）；LV低压模式（10-500伏/0.01-0.99毫秒）；LV低压模式（50-500伏/1-99毫秒）。一旦模式选择好，相应的指示灯就会亮起。5PULSELENGTH此按钮用于控制电穿孔/电融合方形脉冲的脉冲长度，设定选择用Lower(+)和Upper(-)按键。6SETVOLTAGE此旋钮用于调节脉冲电压。HV高压模式下，电压显示单位为千伏，设定范围为10-3000伏；LV低压模式下，设定范围为10-500伏。顺时针旋转电压增加，逆时针旋转电压减小7NUMBEROFPULSES此按钮用于设定脉冲个数（1-99）。“+”和“-“按钮用来选

5、择所需脉冲个数。每向融合池发送一个脉冲，黄灯就会亮一下，同时发出一声嘟嘟声8WAIT当仪器运行到一个循环结束时，出于安全原因放掉电容器中的所有电荷，此灯会亮。当此灯亮起的时候，绝对不能操作主机。9AUTOMATICSTART按一下并释放此按钮，可根据预先设定的电压、脉冲长度、脉冲个数激发一个排列和电穿孔循环。10REMOTE此接口用于连接远程控制盒，可以远距离操作主机。11NUMBEROFREPEATS此按钮用于设定重复循环次数，最多可达9次。12MANUALSTART此双位置按钮允许手动控制ECM2001，第一次按下按钮，仪器开始工作，灯亮表示电压持续施加。第二次按出按钮，灯熄灭时，电融合电

6、压被送到融合池上。13PRINTSETTINGS此按钮用来打印排列设置和电融合/电穿孔参数。如果使用Enhancer400的话，请使用Enhancer400上的该功能按钮。第三节操作细则1. 注意事项：请严格按照下述操作细则对ECM2001进行操作。在没有连接打印机的情况下，严禁按“PRINTSETTINGS”按钮！否则仪器将会锁死。如果打开仪器电源的时候，发现“MANUALSTART”按钮处于亮灯状态，请马上关闭电源！2. 程序或步骤（操作过程）高电压警告：为了实际操作和安全的原因，在手动或自动操作模式中，ECM2001在施加交流电场或直流脉冲的过程中，请不要接触任何电缆或电极连接处，当需要

7、连接或拆下电缆时，要检查系统不在操作中或处于备用状态。Automatic自动操作模式：1. 连接Chamber（融合池）和位于ECM2001背面的输出插口。2. 如果使用打印机的话，把打印机电源电缆插到ECM2001背面的打印电源接口上(J4)。3. 如果使用打印机的话，用串口线缆将打印机连接到ECM2001背面的打印机输入口上。4. 如果使用Enhancer400（示波器）的话，将Enhancer400的电源线插在市电上。5. 如果使用Enhancer400（示波器）的话，先用电缆将Enhancer400的输入插口与ECM6. 2001背面的输出插口连接，然后用电缆把融合池连接在Enhanc

8、er400上的输出插口上。7. 把ECM2001的电源线插到合适的电源插座上（220伏）。8. 打开ECM2001背面上的电源开关。9. 设定所需的ACVoltage(1)即交流电压。10. 设定所需的ACDurationSeconds(2)即交流持续时间。11. 选择HV或LV模式(4)。12. 设定DCPulseLength(5)即直流脉冲长度。13. 设定DCVoltage(6)即直流电压。14. 设定NumberofPulses(7)即脉冲个数。15. 设定Post-FusionACSeconds(3)即融合后交流时间到所需的脉冲长度。16. 把细胞悬液/试剂倒入BTXChamber（

9、融合池）中。17. 检查所有的设置。18. 按下AutomaticStart(9)即自动按钮，ECM2001发出一声嘟嘟声，把预先设置的所有参数送到Chamber（融合池）上。19. 仅对电穿孔来讲，设置ACVoltage(1)、ACDuration(2)和Post-FusionAC(3)为零，其余步骤不变。Manual手动操作模式：1 其余步骤同1-11，按一下ManualStart(12)即手动按钮，手动模式中，ACDuration(2)即交流持续时间按钮不再起作用，持续施加交流电场。在显微镜下观察Chamber中细胞，当细胞相互接近成二聚体时，再次按一下ManualStart(12)即手

10、动按钮，结束交流场。ECM2001发送电穿孔脉冲。注意：交流电压的值不能在指示器上调节。3. 仪器设置： 与打印机的连接方式：1. 将ECM2001的电源线插在市电插线板上。（220伏）2. 把打印机电源电缆插到ECM2001背面的打印电源接口上(J4)。3. 用串口线缆将打印机（501型）连接到ECM2001背面的打印机输入口上。4. 使用5343型连接电缆或者464型连接电缆（适用于Microslide450，450-1，450-2，5. 450-3）或者465型连接电缆（适用于Microslide453，453-10）连接ECM2001与6. Microslides,将连接电缆插入到EC

11、M2001背面的输出插口中。630B安全操作池或7. 者其他电极针的连接与此类似。与Enhancer400的连接方式：1. 仔细阅读Enhancer400的使用手册。2. 将ECM2001的电源线插在市电插线板上。（220伏）3. 将Enhancer400的电源线插在市电插线板上。（220伏）4. 将红/黑高电压电缆两端分别依照颜色插入ECM2001的相对应的输出和Enhancer5. 400的相对应的输入插口中。6. 连接电击设备。（参见与打印机连接的第四步）4. 操作：自动操作1. 打开ECM2001背面的电源开关。2. 设置所需的交流脉冲时间（2）。3. 选择高压模式（HV）或低压模式（

12、LV）（4）。4. 设置直流脉冲长度（5）。5. 设置直流电压（6）。6. 设置直流脉冲个数（7）。7. 设置融合后所需的交流脉冲时间（3）。8. 把细胞悬浮液/试剂倒入BTXChamber中。9. 检查所有的设置。10. 按一下自动按钮（9）会发出一声嘟嘟声，ECM2001输送设置的所有参数到融合槽中。11. 对于电穿孔，设置ACVoltage(1)、ACDuration(2)和Post-FusionAC(3)为零，其余步骤不变。手动操作：1. 其余步骤同自动操作中的1-9步。2. 按一下ManualStart(12)即手动按钮（指示灯只亮90秒）。手动模式中，AC3. Duration(2

13、)即交流持续时间按钮不再起作用，持续施加交流电场。在倒置显微镜下观察载玻片上的细胞时，可以变动AC幅值，以得到最优的排列（串）结果。4. 当细胞近似成串时，再次按一下手动按钮，撤掉交流电场，加上所设置的直流参数。打印数据：1. 从ECM2001打印输出，按打印按钮两次（2）。2. 从Enhancer400打印输出，按Enhancer400上的打印按钮一次。5. 操作参数的选择：1. 排列参数：ACVoltage：设置交流电压。ACPulseLength：设置脉冲长度。2. 电穿孔参数：选择高压模式（HV）或低压模式（LV）（4）PulseLength：设置直流脉冲长度。DCVoltage：设置

14、直流电压。NumberofPulses：设置脉冲次数。3. 融合后交流参数：6. 显微镜和载玻片的使用用464连接电缆或465连接电缆连接载片与ECM2001，用461连接电缆连接464连接电缆或465连接电缆与1269同轴电缆接头连接。（参见前述章节）选择ACVoltage使细胞缓慢向载片电极移动，建议用胶带固定同轴电缆在显微镜载物台上来防止电缆线过重使载波片移动。用微量移液吸头或注射器加入或吸出细胞悬液。选择ACVoltage，使细胞向向载片电极缓慢移动。按10%比率逐渐增加融合电压和脉冲长度，使融合率增加。靠近电极的电场最强，融合首先在这里发生，如果电场太强，细胞会立即解体。如果细胞不移

15、动和电压的增加导致培养基的沸腾，说明细胞溶液的作用象电解使用新鲜的甘露醇配置准备0.3M甘露醇（0.2微孔过滤）（pH7-7.3），用无菌0.1NNaOH调节pH。在融合前调节甘露醇的pH。缓冲液在融合前程序5.3.1中说明。其它低分子量糖类如蔗糖和葡萄糖也已得到成功的应用。在显微镜下操作载玻片时，使用手动模式更有利。这样，只要排列已经成功立即停止使用秒表测量所需的排列时间。当使用更大一些的融合池时，在自动模式中设定相同的或更长一点的时间。如果演示给许多人，使用带有电视摄象机和显示器的显微镜。第四节产生杂交瘤的实验方法本章节中的相关具体步骤请参照英文版说明书，以英文说明书为准！下面只是一种推荐的方法，每个研究者应根据不同的细胞密度、融合培养基和融合前和融合后的不同处理进行实验，并参考相关文献。Ohnishi等(BTX书目#218)和Ruzin(BTX书目#18