2生物安全评估和管理.docx

1、2生物安全评估和管理2. 生物安全评估和管理在建设实验室或开展实验活动之前，生物安全办公室应参照卫生部名录组织各相关方面的专家对拟操作的生物因子的危害程度、实验活动的危险性、气溶胶传播的可能性、预防治疗的获得性、防护屏障的安全性、应急预案的有效性等因素进行评估，确定相应的生物安全防护水平等级。实验室生物危害评估结果应由医院的法定代表人签字认可，并归档保存。生物安全负责人最终对实验室内的安全负责，其职责之一是指导现行工作以判断潜在的危害（生物安全评估），职责之二是实验开始前采用合适的安全程序（风险管理）。特定的实验开始前需要预先进行登记和通过生物安全负责人的批准。风险评估和风险管理的5个“P”是

2、指： Pathogen 病原体 危险的生物因子 Procedures 规程 推荐的实验操作和安全的操作规范 Personnel 人员 相应的培训与技能 Protective equipment 防护设备 防护衣和安全设备 Place 地点 实验室所在位置实验室工作的每一方面都应考虑风险评估和风险管理的5个“P”。正确地指导和风险评估能帮助免受生物危害的暴露，以及最大程度减少实验室受到感染的可能性。2.1 风险评估和风险管理表风险评估风险管理病原体 传染因子类型 (见附录A) 感染途径 感染性疾病发生过程病毒性、致病性、数量、浓度、人群中影响程度、昆虫媒介的存在 登记 生物安全办公室 感染机构

3、约束机构 疾控中心 选择机构规程 气溶胶风险：超声、离心 、混匀、混合、振动 经皮风险: 针头、注射器、玻璃吸液管、解剖刀、低温刀片/刀等 飞溅/溅泼风险: 吸液管、接种环 建立一套结合安全使用的标准操作规程 遵守基本的生物安全规则 实验室、工作区域、 BSL-2或更高传染因子实验室内的设备贴上标识 指导实验室操作和检查实验设备 用非传染性材料做尝试性试验，以测试新的规程/设备人员 人员免疫 赘生物疾病 感染 免疫抑制治疗 年龄、种族、性别、妊娠 手术 (脾、胃切除) 免疫力 后暴露预防 血清库 对安全的态度 安慰 外伤、破损皮肤、湿疹、皮炎 安全培训 以前从事生物危害的经历 技术的熟练程度

4、立即向生物安全负责人和生物安全办公室报告所有的暴露事件、被忽视的事件以及相关疾病的症状 调查/核实事件/飞溅等，以防止再次发生防护设备 防护： 气溶胶-可以吸入粒子直径5m 飞溅/溅泼 锐器 个人防护设备 (PPE): 口罩 HEPA, N-99, N-95,等 面部（眼、鼻、嘴）防护-面具和安全眼镜、或盖住下颌的面罩、前面无缝外衣或实验室外衣 手套 生物安全柜 安全离心管/转子地点 风险组/生物安全等级、设备 气溶胶风险 受限制的过道 基本的实验室-门、易清洁的地方、冲眼器、窗户 标签 用直接气流预防2.2 暴露途径生物因子要导致疾病发生，首先必须有足够数量的因子进入或侵入人体，进入的途径有

5、经口、呼吸道、黏膜及与动物的接触（叮、抓伤），当生物危害物进入人体，它产生疾病还需满足其它条件，它们必须在人体细胞、组织和/或器官内生长繁殖，克服人体的自然免疫机制和变异或适合人体的变化。年龄、免疫状况、职业、物理或地理环境等因素会导致个体对疾病的不同易感性。在涉及生物危害时，确定其最低感染量是很困难的。同一病原体相同剂量在一个人身上可能无症状，而在另一人身上可能导致严重的症状甚至致命。有些微生物只要一个进入到人体就足以侵入并促使疾病的发生，结核杆菌就是一个例子。暴露途径的更多信息见下图。Mucous Membranes:Exposures to mucous membranes of the

6、 eyes, nose and mouth through splashes or splatters.Ingestion:Mouth pipetting, eating, drinking, smoking in the lab.Inhalation:Breathing in respirable sized aerosols (5m), centrifuge leaks, spills, pipetting, etc.Percutaneous:Through intact or non-intact skin via needlestick, puncture with contamina

7、ted sharp object, animal scratch or bite, through wounds abrasions, or eczema.Contact (indirect transmission):Via mucous membranes or nonintact skin from hands that have been in contact with a contaminated surface (i.e. benches, phones, 2.2.1 实验室内传染因子的传播途径 暴露途径 防护措施黏膜：通过飞溅或溅泼暴露眼、鼻、嘴里的黏膜通过以下方式进行面部的预防

8、： 戴护眼镜或面罩 在生物安全柜内或保护罩后工作 进行规范的微生物操作吸入：由于离心渗漏、溢出或产生气溶胶的操作如吸液、混匀等而吸入了可吸入的气溶胶粒子 (直径5m)。 通过以下方式避免暴露气溶胶： 在生物安全柜内工作 离心时使用密封转子或杯 进行规范的微生物操作吞咽；口腔吸入、吃、喝、在实验室里抽烟通过以下方式防止经吞咽产生的暴露： 不在实验室内吃、喝或吸烟 始终使用手工吸液 进行规范的微生物操作经皮:被感染过的锐器刺伤完好或破损皮肤、动物叮咬、抓伤、湿疹通过以下方式防止皮肤破损： 用塑料制品代替玻璃制品 使用锐器要非常小心 用后立即将锐器丢弃在坚固防漏容器内 适当限制动物 戴不易划破的手套

9、、袖套、 用防水绷带包扎好破损皮肤并戴双层手套接触 (间接传播):通过接触污染面（如凳、电话、电脑、设备把手等）的手来触摸黏膜或破损皮肤，或实验后洗手不彻底。通过以下方式防止间接暴露： 工作台面消毒 工作后、脱去手套后总是洗手。 不要用戴手套或不戴手套的手触摸脸部（良好的个人习惯） 实验室内不使用化妆品。在实验室内的任何时候始终执行以下工作制度： 不在实验室内吃、喝或吸烟 工作结束后或脱去手套后总是洗手 实验室内穿戴好个人防护设备，离开实验室前务必脱去个人防护设备 不用口吸、始终用手工吸液 使用锐器格外小心 用合适的设备抑制气溶胶的产生 对工作台面、溢出物和废弃物进行消毒2.3 生物安全等级国

10、家和卫生部对微生物和生物医学实验室确立了从事生物危害工作对应的生物安全等级。提供了微生物操作、实验室设备和安全设施的结合使用，以及所选的感染因子与使用推荐的四种生物安全等级的实验室操作。以下是1-4级生物安全所要求的实验室操作、防护设备、实验室设施和传染因子的概括。2.3.1 所推荐的生物安全等级与相应感染因子生物安全等级感染因子规 程安全设备（第一道屏障）实验室设备（第二道屏障）BSL-1已知对健康成人 和动物不造成疾病。标准微生物操作需要时， 限制进入 生物危害警示标记不需要。 开放工作台。 防止节肢动物和啮齿动物进入。 实验室靠近出口处有洗手池。 实验室的窗户有纱窗。 适当的消毒设备，必

11、要时配备灭菌设备。BSL-2能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。BSL-1操作加： 限制进入 生物危害警示标记 锐器谨慎使用 制定安全手册，确定所有废物消毒和医疗监督计划I 级or II级生物安全柜或其它物理防护设备，这些设备应用于可能会产生飞溅或气溶胶的感染因子的操作；个人防护设备：外套、手套、所需要的面部防护BSL-1加： 实验室门应带锁并可自动关闭。 应设洗眼设施、高压灭菌锅。BSL-3能引起人或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能

12、用抗生素抗寄生虫药治疗的病原体。BSL-2操作加： 控制进入 所有废弃物消毒 实验室衣服洗之前对其进行消毒II级（B2）或级生物安全柜和用于所有感染因子操作的其它物理防护设备；个人防护设备：防护衣、手套、需要的呼吸道防护。清洁区设置淋浴装置。BSL-2加： 自成隔离区，进入实验室的过道用物理方式隔开。 入口处采用自动关闭双层门。 独立的送排风系统，空气排至室外，不在室内循环。 实验室负压实验室污染区内设不排蒸汽的高压蒸汽灭菌器。BSL-4能引起人或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接、间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与 动物之间传播的病原体。BSL-3操作加： 进

13、入实验室前更衣 出口处冲淋 所有材料在出口处消毒按照级生物安全的所有步骤进行，全身穿上有空气供应系统、正压个人防护衣。BSL-3加： 远离建筑物或单独的区域 安装供应、排放真空系统 BMBL上的其它需求根据国家标准GB 19489-2008实验室生物安全通用要求编制2.3.2生物安全评估目前本院实验室内开展的病原体检测的范围为：病毒名称危害程度分类未经培养的感染材料的操作英文名中文名分类学地位Hepatitis A virus甲型肝炎病毒小RNA病毒科第三类BSL-2Hepatitis B virus乙型肝炎病毒嗜肝DNA病毒科第三类BSL-2Hepatitis C virus丙型肝炎病毒黄病

14、毒科第三类BSL-2Hepatitis D virus丁型肝炎病毒卫星病毒第三类BSL-2Hepatitis E virus戊型肝炎病毒嵌杯病毒科第三类BSL-2Human immunodeficiency virus（HIV） 艾滋病毒逆转录病毒科第二类BSL-2Cytomegalovirus巨细胞病毒疱疹病毒科第三类BSL-2Dengue virus登革病毒黄病毒科第三类BSL-2Japanese encephalitis virus乙型脑炎病毒黄病毒科第二类BSL-2Rubivirus (Rubella)风疹病毒披膜病毒科第三类BSL-2Measles virus麻疹病毒副粘病毒科第三类

15、BSL-2序号病原菌名称危害程度分类样本检测所需生物安全实验室级别学名中文名1. Mycobacterium tuberculosis结核分枝杆菌第二类BSL-22. Vibrio cholerae霍乱弧菌第二类BSL-23. Staphylococcus spp葡萄球菌属第三类BSL-24. Streptococcus spp链球菌属第三类BSL-25. Enterococcus spp肠球菌属第三类BSL-26. Micrococcus spp微球菌属第三类BSL-27. Moraxella spp莫拉菌属第三类BSL-28. Moraxella spp莫拉菌属第三类BSL-29. Nei

16、sseria spp奈瑟菌属第三类BSL-210. Corynebacterium spp棒状杆菌属第三类BSL-211. Bacillus spp芽胞杆菌属第三类BSL-212. Listeria spp李斯特菌属第三类BSL-213. Erysipelothrix spp丹毒丝菌属第三类BSL-214. Rhodococcus equi马红球菌第三类BSL-215. Nocardia spp诺卡菌属第三类BSL-216. Enterobacteriaceae肠杆菌科第三类BSL-217. Vibrio spp弧菌属（除霍乱弧菌）第三类BSL-218. Aeromonas spp气单胞菌属第

17、三类BSL-219. Plesiomonas spp邻单胞菌属第三类BSL-220. Pseudomonas spp假单胞菌属第三类BSL-221. Acinetobacter spp不动杆菌属第三类BSL-222. Flavobacterium spp黄杆菌属第三类BSL-223. Haemophilus spp嗜血菌属第三类BSL-224. Pasteurella spp巴斯德菌属第三类BSL-225. Gardnerella spp加德纳菌属第三类BSL-226. Legionella pneumophila嗜肺军团菌第三类BSL-227. Clostridium spp梭菌属第三类BS

18、L-228. Fusobacterium spp梭杆菌属第三类BSL-229. Bacteroides spp拟杆菌属第三类BSL-230. Actinomadura spp放线菌属第三类BSL-231. Candida albicans白假丝酵母菌第三类BSL-232. Cryptococcus neoformans新生隐球菌第三类BSL-2根据上述病原体检测的表格，本医院开展的检测允许在生物安全等级为1、2 的实验室里工作。各专业实验室根据实际情况编写病原微生物危害评估报告。2.3.3本实验室生物安全等级在福州市传染病医院实验室，仅仅允许在生物安全等级为1，2的实验室里工作，这里没有3、4

19、级生物安全实验室可供工作。世界卫生组织（WHO）已有建立了生物安全手册，各专业科室内应配备该手册可供查阅。2.3.4生物安全的原则“防护”这个词语用于描述在运行或维持实验室环境下管理传染源的安全方法。防护的目的在于减少或排除实验室人员、其他人员和具有潜在危险物对外部环境的暴露。一级防护，为使个人和实验室环境不受传染因子的暴露，可以通过好的微生物技术和使用适当的安全设备而得以提供。接种疫苗可以提供更好的个人防护。二级防护，为使实验室外部环境不受传染因子的暴露，可以通过设备的设计和熟练操作相结合而得以提供。因此，防护的三个因素包括实验室操作与技术、安全设备和设备设计。这些因素之间相应的结合是由专门

20、机构对所从事这一工作所做的风险评估来决定的。实验室操作与技术 防护最主要的因素是严格执行标准的微生物操作和技术。与具传染性或潜在传染性因子打交道的人必须意识到其潜在的危害，必须通过培训，熟练掌握安全处理这些物质的操作和技术。实验室的领导或主管有责任提供或安排全体人员的相关培训。每一个实验室应制订生物安全操作程序，该程序表明了将会或可能遇到的危害，以及减少或排除这种危害的操作和设计步骤的详细说明。全体人员应该知道一些特殊危害，并且应了解和遵循所要求的操作程序。受过专业培训，并且了解相关实验技术、安全程序和危害物处理的专家必须指导实验室相关工作。当标准操作不足以充分控制由特定的传染因子或实验步骤所

21、产生的危害时，则需增加附加措施。实验室领导有责任选择附加的安全措施，该措施必须能控制由传染因子或实验步骤所产生的危害。实验室全体人员、安全操作和技术必须通过适当的设备设计、工程优化、安全设备和管理加以补充。2.3.5安全设备（一级屏障） 安全设备包括生物安全柜（BSC）、密闭容器、或其它用于清除或减少生物危害物质暴露的工程设计。生物安全柜主要是对许多微生物操作过程中所产生的液体飞溅或气溶胶进行防护。微生物实验室里使用的三种生物安全柜(Class，)。当应用较好的微生物技术时，级和级生物安全柜起到了主要屏障的作用，该屏障为实验室的人员和环境提供了更好的保护。级生物安全柜还能保护在柜内处理时的物质

22、（如细胞培养液，微生物繁殖液）。密闭式型生物安全柜为实验室的人员和环境提供了目前为最高等级的保护。另一个主要屏障是安全的离心管，为防止离心时产生气溶胶而设计的密闭容器。为减少危害，处理因暴露的气溶胶而传播的感染源时必须使用象生物安全柜或离心管之类的安全设备来控制污染。安全设备也包括手套、帽子、隔离衣、鞋套、长统靴、口罩、面罩、护眼镜。个人防护设备通常与生物安全柜和从事包括感染因子、动物和其它工作的设备结合使用。因个人防护设备可以成为人与感染因子之间的初级屏障，因此某些工作在生物安全柜内进行是不可行的。如某些动物研究、动物石尸体解剖、制剂生产和与实验室设备维修、服务、或其它支持性工作。2.3.6

23、设备的设计（第二道屏障） 设备的设计在提供屏障方面起了重要作用。该屏障可保护实验室内外的工作人员，也可保护群体中的人或动物不受偶然从实验室内释放出来的传染因子的危害。实验室管理者有责任提供与实验室功能和所从事的传染源所推荐的生物安全等级相适应的设备。所推荐的第二道屏障取决于特定传染源所传播的风险程度。例如，在生物安全等级为级和级的实验室，其暴露风险将与感染源的接触或忽视在污染的工作环境中的暴露，第二道屏障可以包括实验室工作区与公共通道的隔开，有效的去污设备（如压力消毒锅）和洗手设备。随着气溶胶传播危险的增加，为了防止气溶胶扩散到环境中，需要更高等级的保护和多重二级屏障，这些设计的特点包括确保空

24、气直接流入的专用同通风系统，清除空气中感染因子的空气处理系统，控制通道区，实验室入口处的气锁，与实验室隔开的缓冲区。实验室设计工程师可以参考国家关于特殊实验室通风系统中的要求。2.3.7生物安全等级 由实验室操作和技术、安全设备、实验室设备相结合构成四级生物安全等级，每一种结合对于经证明或有疑问的传染源的传播途径与实验室的功能是很合理的。生物安全级的操作、安全设备和实验室设备不仅适应大学生、再教育培训及教学实验室，也适用研究一些限定的有特异性的活性微生物，而这些微生物不知道会对人类引起疾病。枯草杆菌、传染性狂犬肝炎病毒是这些微生物的代表。许多感染源虽不与疾病发生过程直接相关，但它是潜在的病原体

25、，并会使年轻的、年老的、免疫力缺乏或低下的人群引起感染。经多次传代的疫苗不应认为是无毒病原体，因它们毕竟是疫苗菌株。生物安全级代表基本的防护水平，在无任何屏障的情况下，依靠规范的微生物操作，而不仅仅依靠洗手来进行防护。生物安全级的操作、安全设备和实验室设备即适用于临床、诊断、教学，也适用研究一些人群和人类疾病存在显著变异的具内在中度传染源的工作。通过好的微生物技术，这些传染源可以在开放的工作台上安全地处理，所产生潜在的飞沫和气溶胶也较低。乙型肝炎病毒，沙门菌属,弓型虫、 spp是这些微生物的代表。生物安全级适合从事人类血液、体液、或目前为未知的感染源组织的工作（接触人类组织的实验室人员应该提供

26、从事血液病原体具体的和需要的预防）。接触这些传染源的人员，其主要危害来源于经皮或黏膜的意外接触，或传染性物质的吸收，被污染的针头、锐器应高度重视。尽管BSL2常规处理的生物并不知道回通过气溶胶可以传播，但产生气溶胶或飞溅物的过程可能增加人员被暴露的风险，因此，必须在具备防护设备、或有BSC、或有安全离心管等设备的情况下进行操作。其它主要防护品如隔离衣、面罩、长外衣和手套也应使用。二级防护如洗手及废弃物处理也可以减少潜在的环境污染。2.3.8临床实验室 临床实验室是根据诊断和临床服务的需要来接收标本。一般来说，临床样品有无传染性是未知的，而且标本是根据微生物多项检查的要求而接收的（如，唾液“常规

27、”检查，抗酸，真菌培养）这就要求实验室领导者建立标准的实验室程序，该程序客观揭示临床标本的出染危险性。除非特殊情况（如怀怀疑出血热），临床标本最初步骤和分离鉴定可在级生物安全室进行。HBV和HIV在所推荐的生物安全等级下进行。生物安全级的要求重点在于预防临床样品与皮肤和黏膜的接触，当处理过程有可能产生飞溅、喷洒或飞沫时应使用生物安全柜。当实验证明或其他信息表明临床标本可呢感有传染性气溶胶扩散时，其最初的处理也应在生物安全柜内进行（如肺结核），或需保护临床标本的完整性时也需在生物安全柜内进行。实验室功能的区分和通道等区域限制性进出是实验室领导者的责任，建立标准、书面提示潜在的危害、以及所需的预防措施也是实验室领导者的责任。2.3.9生物安全检查生物安全办公室应定期组织人员对实验室进行生物安全检查，每年至少一次。检查的内容可参照附件A(一、二级生物安全实验室检查表）。检查结果应与实验室人员和管理者一起讨论，并输入到管理者评审中。对于在检查过程中发现的所有不足之处，实验室应指定专人负责采取改正措施。