1、1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。2.试剂:斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO溶液);4苏丹染液;双缩脲试剂; 体积分数为50%的酒精溶液;蒸馏水。六、方法步骤(演示教学课件) 1.制备试剂。2.可溶性还原糖的鉴定、方法、步骤。3.脂肪的鉴定、方法、步骤。4.蛋白质的鉴定、方法、步骤。七、教学过程 新课引入:我们在化学中学习过物质的鉴定,其原理是被鉴定的 物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应,要么产生沉淀,我们生物学上也
2、采用此原理,在生物学中物质鉴定的理念是:某些化学试剂能 够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。新课教学: (具体原理) + 斐林试剂砖红色沉淀。(水浴加热)可溶性还原糖 + 苏丹染液橘黄色小颗粒。(要显微镜观察)脂肪小颗粒再溶液液蛋白质 + 双缩脲试剂紫色反应。(要先加ANaOH CuSO加B液 溶液)4教师提问:在我们高中生物中还学习过那些利用颜色反应鉴定物 质的?用到了那些化学试剂?由产生了那些特定的颜色呢? 学生回答:略。如果回答不全教师补充:醋酸洋红(或龙胆紫) 红色(或紫色)染色(质)体+ 淀粉+碘液 蓝色 蓝色(水浴加热) DNA+二苯胺试剂 大肠杆菌+伊红产生紫色,略
3、带金属光泽 -美蓝 今天,我们学习鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。(一)、还原糖的鉴定 1、还原糖的鉴定步骤: 放如研钵中5g苹果:洗净、去皮、切块,取 选材: 研磨成浆:加石英砂,加 水研磨5 ml制备组织样液过滤:将玻璃漏斗插入试管中,漏斗上垫一2ml 注入组织样液 层纱布加斐林试剂:2ml(由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成,不能分别加入) 水浴加热:煮沸2min 观察溶液颜色变化:浅蓝色棕色砖红色。结论:还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀 组织样液2ml 刚配制斐 林试剂2ml 砖红色 开水 2min 无色 蓝色 加热 2、实验成功的要点:还原糖的鉴定实验:斐
4、林试剂要两液混合均匀且现配现用。斐林试剂的配制过程示意:斐林试剂甲液( 0.1 g/ml的 NaOH 溶液) 按一定比例混合均匀 斐林试剂 CuSO 0.05 g/ml斐林试剂乙液(的溶液) 4 在鉴定尿液中是否含有葡萄糖时还能用其他那些鉴定方法?学生回答:还可以用斑氏试剂产生砖红色沉淀;及糖尿试纸据糖 的由少到多产生浅蓝、浅绿、棕或深棕色。 (二)、脂肪的鉴定:1、脂肪的鉴定步骤 ,将子叶削成薄片取材:花生种子(浸泡3-4h) 取理想薄片 滴苏丹染液 2-3在薄片上滴 制片去浮色 制成临时装片 观察:先在低倍镜下,找到材料的脂肪滴,然后,转为高倍镜观察。细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色
5、。2、实验成功的要点:.脂肪的鉴定实验:该试验成功的关键是获得只含有单层细胞理想薄片。滴苏丹染液染液染色2-3min,时间不宜过长,以防细胞的其他部分被染色。(三)、蛋白质的鉴定 1、 蛋白质的鉴定步骤:选材:卵清稀释液或黄豆(浸泡1-2d) 豆浆 滤液 呈色 液织样组 试缩双剂试双缩脲 稀蛋白(或 2ml 剂A 滴5B液4 2ml 释液) 无颜色变化 紫色 结论:蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。 、实验成功的要点:2或用豆浆、的黄豆种子(2d:可用浸泡1d蛋白质的鉴定实验 )。或用鸡蛋蛋白稀释液溶NaOH 即0.1 g/ml的双缩脲试剂的使用,一定要先加入A液( )。溶液0.01 g/ml的
6、 CuSO ()液,再加入双缩脲试剂B液即4进行空白对照,还可设计一只加底物的试管,不加双缩脲试剂,说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应,而不是 空气的氧化引起。 教学小结: 、斐林试剂和双缩脲试剂的比较1 相同点: 溶液构成;CuSO都由NaOH溶液和4溶液。0.1g/mL NaOH都为斐林试剂甲液和双缩脲试剂A 不同点:CuSO溶液浓度不一样:斐林试剂乙液为 0.05 g/mLCuSO溶液,44双缩脲试剂 B为 0.01g/mLCuSO溶液。 4配制比例不一样。使用方法不一样:斐林试剂是甲、乙液一起混合后再使用,双缩脲试剂则是先向待鉴定材料加入A试剂摇匀后,再加入试剂B。鉴
7、定的对象不一样:斐林试剂鉴定的是还原糖,双缩脲试剂鉴定的是蛋白质。反应本质及颜色反应不一样。2、还原糖、脂肪、蛋白质鉴定之比较 还原糖的鉴定 脂肪的鉴定 蛋白质的鉴定 富含糖,颜色为白色或近材料的选 富含蛋白质富含脂肪 取:于白色 材料的处 浸泡去皮、研磨 理:液再滴加甲液与乙液混合均匀后使染色和洗浮色试剂的使先加A 不宜过长 液 用: 用B2+ 碱性条件下反应的本Cu(OH)新制的溶液与Cu2 反应)还原糖的醛基质: CHO( 与肽键反应 、苏丹染液与苏丹染液的比较3都是用来鉴定脂肪。苏丹染液更易溶于脂肪,所以染色更深,同时要求染色时间更短 课后作业:基础检测 1.可用于鉴定生物组织中还原糖
8、的试剂是( ) A.斐林试剂 B.双缩脲试剂 C.苏丹染液 D.苏丹染液 2.下列哪个实验用到显微镜( ) A.还原糖的鉴定 B.蛋白质的鉴定 C.脂肪的鉴定 D.淀粉的鉴定 3.下列哪组试剂在使用过程中,必须经过加热( ) A.斐林试剂鉴定还原糖的过程中 B.苏丹和苏丹染液在鉴定动物组织中的脂肪时 C.双缩脲试剂鉴定蛋白质时 D.碘化钾溶液鉴定淀粉时 4.用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液颜色的变化过程为( ) A.无色一砖红色(沉淀) B.浅蓝色一砖红色(沉淀) C.浅蓝色一蓝色一砖红色(沉淀) D.浅蓝色一棕色一砖红色(沉淀) 5、用苏丹染液对脂肪组织进行染色时,可用来冲洗浮色的药品是 ) (
9、 A.吸水纸 B.H C.50%的酒精 D.无水酒精 6.用斐林试剂鉴定还原糖时,必须注意以下几点:(1)被鉴定材料应选择含 较高,颜色为 的植物组织, 以 为最好。(2)斐林试剂很不 ,必须 时再配制并 立即使用。配制的方法是将4 5滴 滴入2m1 中。(3)鉴定反应必须在 中进行。7.在鉴定花生种子细胞内含脂肪的实验过程中,应先将花生子叶薄片用 染色,然后用 洗去 ,再制成 最 后,镜检结果是 . 8.鉴定豆浆中的蛋白质时,应先加入2m1 ,摇荡均匀后,再 加入34滴 ,再摇荡均匀后,颜色变化 是 . 能力素质提高 9.下列物质中,能被苏丹IV染液染成红色的是( ) A.马铃薯块茎 B.浸
10、软的蓖麻种子 C.蛋清液 D.苹果 10下列可用于鉴定脂肪的实验材料是( ) 花生种子D. 卵白C. 梨B. 苹果A.11.对斐林试剂和双缩脲试剂的配方,叙述不正确的是( ) A.都含有NaOH溶液和CuSO溶液 4B.斐林试剂的配制是将45滴0.05g/ml的CuSO溶液滴入2ml 40.1gml的 NaOH溶液中即成 C.双缩脲试剂是将34滴0.01g/ml的CuSO溶液滴入2ML0.1g/ml4的 NaOH溶 液中混合而成的 D.双缩脲试剂含有两种试剂:质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液和质量浓度为0.O1g/ml的CuSO溶液 412鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂的正确做法是( )
11、A. 先加A液,混合后再加B液摇匀观察 B. 先加B液,混合后再加A液摇匀观察 C.A、B液混合后加入,摇匀后观察 D.A、B液同时加入样液,摇匀后观察 迁移与扩展 13与硫酸铜溶液在碱性环境中反应,生成紫色物质的是( ) A.淀粉 B.脂肪 C.蛋白质 D.核酸 14将面团包在纱布中在清水中搓洗,鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是( ) A.碘液、苏丹溶液 B.双缩脲试剂、碘液 C.亚甲基蓝溶液、苏丹 D.碘液、斐林试剂 15下列实验中所用试剂错误的是( ) A在观察植物细胞有丝分裂实验中,使用醋酸洋红溶液使染色体着色 在提取叶绿体色素实验中,使用丙酮提取色素B C在DNA的粗提取与鉴定实验中,使用氯化钠溶液析出DNA D在蛋白质的鉴定实验中,使用苏丹染液鉴定蛋白质 练习答案:15:ACADC 6、(1)糖,白色或近白色,苹果、梨 (2)稳定,使用,斐林试剂乙液,斐林试剂甲液 (3)加热条件 7、苏丹染液,50酒精,浮色,临时装片,细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色 8、双缩脲试剂A,双缩脲试剂B,变成紫色 。BDCACBD:159
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