动物解剖生理实验指导.docx

1、动物解剖生理实验指导实验内容实验一、显微镜的使用、组织切片的显微观察实验二、犬骨骼的观察、骨骼辨认测试实验三、血液的凝固实验四、红细胞的脆性试验实验五、蛙心活动观察实验六、红细胞计数实验七、反射弧分析及脊髓反射活动观察实验八、胃肠运动观察和小肠吸收观察实验一 显微镜的构造、使用和保养实验目的了解显微镜的基本构造，掌握显微镜的使用方法和保养方法。材料设备显微镜、组织切片、擦镜纸等。方法步骤（一）机械部分1、镜筒2、物镜转换器3、镜臂4、调焦器5、载物台6、镜柱7、镜座（二）光学系统部分光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置（反光镜、聚光器和光圈等）O1、 目镜：常见的有5X、10 X和15X

2、（X表示放大倍数）的目镜，可根据 不同的需要选择使用，最常使用的是 10X目镜。2、 物镜：常用物镜的放大倍数有 10X、40X和100X等几种。一般将 8X 或10X的物镜称为 低倍镜（而将5X以下的叫做放大镜）；将40X或45X的称为高倍镜；将90 x或100 x的称为油镜（这种镜头在使用时需浸在镜油中）图1-3物镜的性能参数及工作距离C线为盖玻片的的上表面，10物镜的工作距离为 7.63mm； 40 物镜的工作距离为 0.198mm； 10/0.25、40/0.65、100/1.25 表 示镜头的放大倍数和数字孔径。 160/0.17表示镜筒长度为160mm盖玻片厚度为 0.17mnr。

3、3、 聚光器：调节光线的强弱，升高聚光器可使光线增强，反之则光线变弱。光圈能控制进入聚光器的光束大小的可变光阑。 以调节光线的强弱。 在光圈的下方常装有滤光片框，可放置不同颜色的滤光片。4、 反光镜：反光镜有两个面，一面为平面镜，另一面为凹面镜，凹面镜有聚光作用，适于较弱光和散射光下使用，光线较强时则选用平面镜。二、光学显微镜的使用方法（-）准备将显微镜平稳地放在身前的实验桌上，略偏左，使镜臂对着身体，镜筒向前。（二）对光1转动转换器，使低倍镜对准通光孔， 转动粗调节器，使低倍镜前端距载物台约1-2厘米的距离。2将光圈放大；让左眼朝目镜里注视，同时用手将反光镜转向光源； 调节反光镜，直至从目镜

4、里看到一个白色明亮的圆形视野。（三）低倍镜观察1将玻片标本放在载物台上， 使待检查部分位于通光孔中心， 用弹簧夹片压住载玻片两端。2两眼从侧面注视，将物镜降至距标本约 0.5厘米时停止。3用左眼朝目镜里观察， 同时转动粗调节器，缓慢上升镜筒，直到视野中出现物 象，再用细调节器调节。（四）高倍镜观察1先将低倍镜下找到所需观察的物象，把要进一步放大的部位移到视野正中央。2转动转换器， 使高倍镜到位。 调节反光镜和光圈，使光照明亮，再微微调节细 调节器，直到物象清晰。（五）显微镜复原用擦镜纸揩净目镜和物镜， 用清洁纱布揩净镜体。 再转动转换器， 把两个物镜偏 到两旁，并将镜筒下降，然后将显微镜平稳地

5、放入镜箱内保存。实验二 动物主要组织的显微镜识别实验目的 掌握单层扁平上皮、 单层柱状上皮、 单层立方上皮、 疏松结缔组织、 骨骼肌、 平滑肌、神经元的结构特点。材料设备 显微镜、单层扁平上皮、单层柱状上皮、单层立方上皮、疏松结缔组织、骨 骼肌、平滑肌、神经组织切片及相关的图。方法步骤 1、取镜与放置 移动显微镜时，要一手拿镜臂，一手托镜座，将显微镜放置在前方桌面上。2、打开光源，上升聚光镜，开大孔径光阑。3、观察将被检标本置于载物台上，用压片夹夹住 , 旋转最低倍数物镜观察。 调节粗调焦螺旋，使载物台缓缓上升，直至物镜镜头接近标本。这时，一边 使用目镜观察，一边调节粗调焦螺旋使载物台下降，直

6、至视野中看到物像为止。移动载片位置， 使物象处于视野的中心， 此时再调节细调焦螺旋以增加物象 的清晰度，可以调节聚光镜和孔径光阑，使光线强弱适中，以便于观察。转动物镜转换器，换用高倍镜头。用细调焦螺旋调节，换用高倍镜后，可调 节聚光镜和孔径光阑以增加亮度。观察更细微结构必需使用油镜时， 则在制片上滴一滴香柏油。 油镜使用完后， 要及时地用蘸有乙醚的擦镜纸把油镜镜头擦拭干净。4. 收显微镜关闭光源； 下降聚光镜； 关闭孔径光阑； 转动物镜转换器，使之处于最低倍 数物镜下。显微镜保持清洁。显微镜的光学部分只能用专门的擦镜纸擦拭。 按实验室的要求，做好显微镜的使用记录等。实验结果 1复层上皮组织2平

7、滑肌3. 神经组织4. 心肌切片5. 硬骨组织6. 软骨组织实验三 犬全身主要骨、关节、骨性标志的识别实验目的 在犬骨骼标本上识别各部位骨骼及骨性标志。材料设备 犬骨骼标本。方法步骤 1 脊柱骨的组成：颈椎、胸椎、腰椎、荐椎、尾椎的形态与连结。2 胸廓的组成：胸椎、肋骨和胸骨。3 骨盆腔构造：背侧荐骨、侧面髋骨、后侧坐骨、腹侧耻骨组成。4 四肢骨组成及分布：骨骼名称、形态、关节名称、关节角度。5 骨性标志：肩胛冈、大结节、髋结节、大转子、坐骨结节。 实验结果 绘制犬全身主要骨、关节和骨性标志的图示。技能考核 在标本和活体上识别主要骨、关节及骨性标志。* 骨骼辨认测试实验三 血液凝固实验目的 以

8、血液凝固时间作为指标， 了解对血液凝固影响的因素， 加深对生理止血过 程的理解。实验原理 血液凝固是一个酶的有限水解激活过程， 可分为三个环节： （1）凝血酶原激活物的形成；（ 2）凝血酶原激活为凝血酶； （3）纤维蛋白的形成。在此过程中有 多种凝血因子和 Ca 离子的参与。根据凝血过程起动时激活因子来源不同，可将 血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。 内源性激活途径是指参与血液 凝固的所有凝血因子在血浆中， 外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进 入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。实验药品和器材 生理盐水，液状石蜡、草酸盐、柠檬酸盐、肝素（ 8 U/ml ）。

9、注射器，试管 6 支，小烧杯 2 个，试管架，竹签 1 束 （或细试管刷 ），秒表。实验方法与步骤 1.采血（动物不限） 。2. 准备试管。试管 1 不加任何处理（对照管）试管 2 用液状石蜡润滑整个试管内表面试管 3 放少许脱脂棉试管4 加草酸钾12 ml试管5 加柠檬酸盐12 ml3. 每管加入血液 1-2 m l 。将多余的血盛于小烧杯中，并不断用竹签搅动直 至纤维蛋白形成。4记录凝血时间 每个试管加血1-2 ml后，即刻开始计时，每隔壁 15 s倾斜一次， 观察血液是否凝固， 至血液成为凝胶状不再流动为止， 记录所经历的时 间。 4、 5 号试管加入血液后，用拇指盖住试管口将试管颠倒两

10、次，使血液与药 物混合。5.如果加草酸钾和柠檬酸盐的试管不出现血凝 ,可再向两管内分别加入0.025 mol?L-1的CaCb溶液23滴，观察血液是否发生凝固 ？注意事项 1.采血的过程尽量要快，以减少计时的误差。对比实验的采血时间要紧接 着进行。2.判断凝血的标准要力求一致。一般以倾斜试管达 45 度时，试管内血液不 见流动为准。3.每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。实验结果 将实验结果及各种条件下的凝血时间， 并进行比较、 分析解释产生差异的原 因。思考题 1.血液凝固的机制及影响血凝的外界因素？2.为什么有几管不凝？为什么有几管比对照组管凝血时间长？为什么有几 管比对照管

11、凝血时间短？实验四红细胞脆性的测定实验目的学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形 态与功能的重要性。实验原理正常红细悬浮于等渗的血浆中， 若置于高渗溶液内， 则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继 续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。 红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。 红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血， 即红细胞 渗透脆性越小。将血液滴入不同的低渗溶液中， 可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗溶液浓

12、度， 为该血液红细胞的 最小抵抗力；出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的 最大抵抗力。生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液 ；而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。 等渗溶液不一定是等张溶液（如1.99%的尿素溶液），但等张溶液一定是等渗溶液。实验药品1%肝素，1%氯化钠溶液，2%氯化钠溶液，蒸馏水。仪器与器材10 ml小试管，试管架，滴管， 1 ml移液管，2 ml移液管。实验方法与步骤1溶液配制：取11个小试管，配制出11种不同浓度的氯化钠低渗溶液。不同浓度的NaCL溶液配制试吕号试液12345678910111%NaCI/ml1.41.31.2

13、1.11.00.90.80.70.60.52%NaCl 2蒸馏水/ml0.60.70.80.91.01.11.21.31.41.50NaCl浓度/%0.70.650.60.550.50.450.40.350.30.2522制备抗凝血：不同动物采血方法各有所异，但多采用末梢血，将血滴在有 1%肝素（或柠檬酸盐）的表面皿上，混匀 （1%肝素0.1 ml可抗10 ml血）。3加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀，静置0.51 h 。4.观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。1上层为无色透明， 表明未发生溶血的试管： 液体下层为大量红细胞沉淀， 无红细胞破裂。

14、2部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红 （淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。3管底无红细胞沉淀， 表红细胞全部溶血的试管： 液体完全变成透明红色， 明红细胞完全破裂，称为完全溶血。实验结果 报告该实验动物红细胞的最小渗透抵抗力和最大渗透抵抗力。 将全班的结果 加以统计， 并用平均值标准差表示。 讨论如何通过渗透脆性特征判断机体的健 康状况。注意事项 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，只加一滴。混匀时，轻轻倾倒 12 次，减少机械震动，避免人为溶血。抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。配制不同浓度的 NaCl 溶液时应力求准确、 无误。 NaCl 溶液的浓度梯度可根 据动物的实际情况适当进行调整。思考题 1.红细胞的形态与生理特征有何关系？2.根据结果分析血浆晶体渗透压保持相对稳定的生理学意义。3.输液时应注意的事项。实验五 蛙心活动观察 实验目的 观察滴加乙酰胆碱、肾上腺素对心脏运动的影响。 实验原理 心脏的特殊传导系统具有自动节律性， 但各部分的自动节律性高低不同。 两栖类动物的心脏起搏点是静脉窦（哺乳动物的是窦房结）。正常情况下，静脉窦（窦 房结）的自律性最高，能自动产生节律性兴奋，并依次传到心房、房室交界区