植株全氮全磷全钾含量的测定定11分解Word文件下载.docx

1、H2BO3 + H2O 滴定过程的反应： NH4H2BO3 + H2SO4 （NH4）2SO4 + 2H3BO32、主要仪器、试剂（1）主要仪器：万分之一电子天平、移液枪（2ml）、移液管（5、10ml）、三角瓶（50、150ml）、容量瓶（100、1000ml）、量筒、研钵、酸式滴定管、pH仪、定氮仪（2）需用的试剂：40%NaOH溶液（10mol/L氢氧化钠溶液）：称取40g氢氧化钠（GB 629分析纯）溶于100ml水中硫酸（GB 62577）：分析纯，0.005mol/L硫酸（将0.01mol/L硫酸标准溶液用水稀释一倍）或0.01mol/L盐酸标准溶液0.02mol/L硫酸标准溶液：

2、量取浓硫酸（C.R）2.83ml，加蒸馏水稀释至5000ml，此为0.02mol/L的（1/2H2SO4）标准溶液，然后用标准碱或硼砂标定之，将0.02mol/L的（1/2H2SO4）标准溶液用水稀释4倍。硼酸指示剂溶液：硼酸-指示剂混合液：每升A溶液中加20ml B混合指示剂，并用稀碱调节至红紫色（pH值约4.5）。此液放置时间不宜过长，如在使用过程中pH值有变化，需随时用稀酸或稀碱调节之。A 2硼酸溶液：20g硼酸（GB 628-78分析纯）溶于1L约60去离子水中。B 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5g溴甲酚绿（HG 3-1220-79）和0.1g甲基红（HG 3-958 -76）于研

3、钵中，加入少量95乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，加95乙醇至 100ml。pH4.5的水3、测定步骤在150ml三角瓶中，加入2硼酸-指示剂混合液5ml，放在定氮仪冷凝管末端，管口置于硼酸液面以上34cm处。之后吸取待测液10.00 mL（含NH4+-N约1mg）置于蒸馏器的定氮内室中，于定氮仪相应位置上，盖上具塞并密封使之不漏气。然后从加液漏斗处向蒸馏室内缓缓加入20ml 10mol/L氢氧化钠溶液，立即关紧蒸汽发生器上排气口的旋钮，同时打开蒸汽发生器和定氮冷凝管连接橡皮管上的夹子。通入蒸汽蒸馏，蒸馏约15min左右，馏出液体积约50ml时，即蒸馏完毕。取下三角瓶，关闭蒸汽发生器和定氮冷凝管

4、连接橡皮管上的夹子，并打开蒸汽发生器上排气口的旋钮。用少量已调节至pH4.5的水洗涤冷凝管的末端，取下三角瓶。之后，用气压差的原理，倒吸的方法洗蒸馏瓶中的废液，洗净蒸馏瓶。用0.005 mol/L硫酸（或0.01mol/L盐酸）标准溶液滴定馏出液由蓝绿色至刚变为紫红色。记录所用酸标准溶液的体积（ml）。空白测定所用酸标准溶液的体积，一般不得超过0.4ml。4、结果计算植株中N（%）=（V1-V0）C14D10-3 100/m式中： V1 样品测定所消耗标准酸mL数； V0 空白试验所消耗标准酸mL数； C标准酸（H+1）的浓度molL-1； 14 氮原子的摩尔质量（gmol）； 10-3 mL

5、换算为L； D分取倍数，定容体积/分取体积，100/10 m 干样品质量（g）。5、注意事项（1）碱液要过量。要求中和完硫酸后再过量2mL；（2）蒸馏装置不能漏气；（3）硼酸要足量。估算方法：按1mL浓度为10.0gL-1的硼酸能吸收0.46mg的N计算；（4）指示剂和硼酸最好分开配置保存。因二者混合过久，有指示终点不明显的可能。（5）指示剂和硼酸的pH要调到4.5（变色点）。（6）定氮仪参数设置中，加碱量设置为3S；定氮仪开机预热后，要多空蒸几次，等读数稳定后再进行样品测定。在酸性条件下，正磷酸能与偏钒酸和钼酸发生反应，形成黄色的三元杂多酸钒钼磷酸。溶液黄色稳定，黄色的深浅与磷的含量成正相关

6、，所以，可用比色法测定溶液中磷的含量。万分之一电子天平、电磁炉、移液管（1、5、10ml 2个）、吸耳球、容量瓶（50ml 8个、100、1000ml）、量筒吸管、塑料瓶、棕色瓶、pH试纸、烘箱 722或723型分光光度比色计（2）试剂 浓硝酸（分析纯）0.2%二硝基酚指示剂（0.25g 2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中，其变色范围是pH 2.4（无色）4.0（黄色），变色点是pH 3.1）6mol/LNaOH溶液（24g NaOH（分析纯）溶于水，稀释至100ml）磷标准液50ugmL-1（准确称取经105烘干的KH2PO4（分析纯） 0.2195g溶于水，移入1L容量瓶

7、，加水约400ml，加入5ml浓H2SO4（或浓硝酸），用水定容，装入塑料瓶中低温保存）。 钒钼酸铵试剂：A液：将25.0g的钼酸铵（NH4）6Mo7O244H2O，分析纯溶于400mL水中。B液：将1.25g的偏钒酸铵（NH4VO3，分析纯）溶于300mL沸水中，冷却后，加入250mL浓硝酸（分析纯），冷却至室温。将A液缓缓注入B液中，不断搅匀，加水稀释到1L，贮入棕色瓶中。吸取消煮好的待测液20.00 mL（含P 0.051.0mg）置于50ml容量瓶中，加2,6-二硝基酚（或2,4-二硝基酚）指示剂2滴，用6molL-1NaOH 调pH至刚显黄色，准确加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水

8、定容，摇匀。同时做空白实验。15min后，用分光光度计在450nm处比色，以空白液调节吸光值的零点。标准曲线制作：准确吸取50ugmL-1的P标准溶液0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0mL，于50mL容量瓶中，加与吸取的待测液等量的空白消煮液，同上述操作步骤显色和比色。该标准系列P的浓度分别为0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0 ugmL-1 P。植株全P（%）=V分取倍数10-4 /m 式中：从标准曲线查得显色液P的质量浓度（ug/mL） V 显色液体积（mL）分取倍数：定容体积/分取体积，100/10 m 烘干样品质量（g） 104将ug/L浓度单位换算为百分

9、含量的换算因数显色液的酸度要求在0.041.6mol.L -1H+ 内，酸度过高时，显色不完全或不显色，酸度太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色；比色要在15min后、24h内完成。四、植株全钾的测定（H2SO4H2O2消煮，火焰光度法）植物体内的钾几乎全部以离子状态存在于植物组织中，样品经消煮或浸提，并经稀释后，待测液中的K可用火焰光度法测定。容量瓶（50ml 8个、1000ml）；移液管（1.0、5.0、10ml）+吸耳球、火焰光度计。（2）试剂：100 ugmL-1K标准溶液（准确称取在105干燥2h后的0.1907gKCl，溶于水，于1L容量瓶中定容，存于塑料瓶中。 3、测定步骤吸取消

10、煮好的待测液5.000mL（含K 10 mg/L50 mg/L），置于50 mL容量瓶，用水定容，摇匀，直接在火焰光度计上测定，读取检流计读数。准确吸取100 ugmL-1标准溶液0，0.5，1.0，2.5，5.0，10，20ml，分别放入50ml容量瓶中，加入与吸取的待测液等量的空白消煮液，加水定容即得0，1，2，5，10，20，40mg/L K的标准系列溶液。以浓度最高的标准溶液定火焰光度计检流计的满度，然后从稀到浓依次进行测定，记录检流计读数，以检流计读数为纵坐标绘制标准曲线。植株全钾（%）=：从标准曲线查得显色液K的质量浓度（ugmL-1）V：测定液体积（mL） 50mlm：烘干样质量

11、（g）104：将ug/L浓度单位换算为百分含量的换算因数（1）按要求制作标准曲线；（2）标准溶液和待测液的组成要基本相同。因为，溶液组成的改变（包括酸碱、阴、阳离子的浓度）对测定结果有影响；（3）仪器状态（如空气压力、火焰的状态等）对测定结果有影响。植物全氮、磷、钾的测定植物中氮、磷、钾的测定包括待测液的制备和氮磷钾的定量两大步骤。植物全氮待测液的制备通常用开氏消煮法（参考有机肥料全氮的测定）。植物全磷、钾可用干灰化或其他湿灰化法制备待测液。本书介绍H2SO4H2O2消煮法，可用同一份消煮液分别测定氮、磷、钾以及其它元素（如钙、镁、铁、锰等）。一、植物样品的消煮（H2SO4H2O2法）方法原理

12、植物中的氮磷大多数以有机态存在，钾以离子态存在。样品经浓H2SO4和氧化剂H2O2消煮，有机物被氧化分解，有机氮和磷转化成铵盐和磷酸盐，钾也全部释出。消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾等元素的定量。本法采用H2O2加速消煮剂，不仅操作手续简单快速，对氮磷钾的定量没有干扰，而且具有能满足一般生产和科研工作所要求的准确度，但要注意遵照操作规程的要求操作，防止有机氮被氧化成N2或氮的氧化物而损失。试剂：（1）硫酸（化学纯、比重1.84）（2）30%H2O2（分析纯） 操作步骤：（1）常规消煮法 称取植物样品（0.5mm）0.30.5g（准确至0.0002g）装入100ml开氏瓶的底部，加浓硫酸5ml，

13、摇匀（最好放置过夜），在电炉上先小火加热，待H2SO4 发白烟后再升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下，稍冷后加6 滴H2O2，再加热至微沸，消煮约710 分钟，稍冷后重复加H2O2 再消煮，如此重复数次，每次添加的H2O2 应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热约10 分钟，除去剩余的H2O2，取下冷却后，用水将消煮液无损转移入100ml 容量瓶中，冷却至室温后定容（V1）。用无磷钾的干燥滤纸过滤，或放置澄清后吸取清液测定氮、磷、钾。每批消煮的同时，进行空白试验，以校正试剂和方法的误差。（2）快速消煮法 称取植物样品（0.5mm）0.30.5g（称准至0.0002g），放入100ml

14、开氏瓶中，加1ml水润湿，加入4ml 浓H2SO4摇匀，分两次各加入H2O2 2ml，每次加入后均摇匀，待激烈反应结束后，置于电炉上加热消煮，使固体物消失成为溶液，待H2SO4发白烟，溶液成褐色时，停止加热，此过程约需10 分钟。待冷却至瓶壁不烫手，加入H2O22ml，继续加热消煮约510分钟，冷却，再加入H2O2 消煮，如此反复一直至溶液呈无色或清亮后（一般情况下，加H2O2总量约8-10ml）再继续加热5-10分钟，以除尽剩余的H2O2。取下冷却后用水将消煮液定量地转移入100ml 容量瓶中，定容（V1）。同时做空白试验，校正试剂和方法误差。注释：植物体内的钾以离子态存在于细胞液或与有机成

15、分呈现松散结合态。因此，若只测定钾时，可采用简易的浸提法制备待测液。浸提剂可用0.5mol/LHCl或2mol/LNH4AC0.2mol/LMg（OAC）2 溶液，也可用热水。所用的H2O2 应不含氮和磷。H2O2在保存中可能自动分解，加热和光照能促其分解，故应保存于阴凉处。在H2O2中加少量H2SO4 酸化，可阻止H2O2分解。二、 植物全氮的测定（半微量蒸馏法和扩散法）方法原理 植物样品经开氏消煮、定容后，吸取部分消煮液碱化，使铵盐转变成氨，经蒸馏和扩散，用H3BO3 吸收，直接用标准酸滴定，以甲基红溴甲酚绿混合指示剂指示终点。（1）40%（m/v）NaOH 溶液称取工业用氢氧化钠（NaO

16、H）400g，加水溶解不断搅拌，再稀释定容至1000ml 贮于塑料瓶中。（2）2% H3BO3指示剂溶液称取20g 硼酸加入热蒸馏水（60）溶解，冷却后稀释定容至1000ml，最后用稀盐酸（HCl）或稀氢氧化钠（NaOH）调节pH 至4.5（定氮混合指示剂显葡萄酒红色）。（3）取标准溶液C（HCl 或1/2 H2SO4）=0.01mol/L（4）碱性溶液（5）定氮混合指示剂。称取0.1g 甲基红和0.5g 溴甲酚绿指示剂放入玛瑙研钵中，加入100ml95%酒精研磨溶解，此液应用稀盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）调节pH 至4.5。（6）0.02mol/L 盐酸标准溶液。取浓盐酸（HCl）（

17、比重1.19）1.67ml，用蒸馏水稀释定容至1000ml，然后用标准碱液或硼砂标定。（1）蒸馏法 吸取定容后的消煮液5.0010.00ml，（V2，含NH4N 约1ml），注入半微量蒸馏器的内室，另取150ml 三角瓶，内加入5ml2% H3BO3指示剂溶液，放在冷凝管下端，管口置于H3BO3 液面以下，然后向蒸馏器内室慢慢加入约3ml40%（m/v）NaOH 溶液，通入蒸气蒸馏，（注意开放冷凝水，勿使馏出液的温度超过40）待馏出液体积约达5060ml 时，停止蒸馏，用少量已调节至pH 为4.5 的水冲洗冷凝管末端。用酸标准溶液滴定馏出液至由蓝绿色突变为紫红色（终点的颜色应和空白测定的终点相

18、同）。用酸标准溶液，同时进行空白液的蒸馏测定，以校正试剂和滴定误差。（2）扩散法 吸取定容后的消煮液200500ml（V2，含NH4N0.050.5mg）于10 厘米的扩散皿外室。内室加入2%H3BO3指示剂溶液3ml，参照土壤碱解氮测定的操作步骤进行扩散和滴定，但中和H2SO4 需用40%NaOH 溶液2ml，扩散可在室温下进行，不必恒温，室温在20以上时，放置约24h，低于20时，须放置较长时间。在扩散期间，可将扩散皿内容物小心转动混匀23 次，加速扩散，可缩短扩散时间。在测定样品的同时，须在同一条件下做空白试验。结果计算全N%=C（V-V0）0.041100/（mV2/V1）式中 C酸标

19、准溶液浓度，mol/L；V滴定试样所用的酸标准液，ml；V0滴定空白所用的酸标准液，ml；0.041N 的毫摩尔质量，g/mmol；m称样量，g；V1消煮液定容体积，ml；V2吸取测定的消煮液体积ml。三、植物全磷的测定（钒钼黄吸光光度法）方法原理 植物样品经浓H2SO4 消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，其吸光度与磷浓度成正比，可在波长400490nm处用吸光光度法测定磷。磷浓度较高时选用较长的波长，较低时选用较短的波长。此法的优点是操作简便，可在室温下显色，黄色稳定。在HNO3，HCl,HClO4 和H2SO4 等介质中都适用，对酸度和显

20、色剂浓度的要求也不十分严格，干扰物小。在可见光范围内灵敏度较低，适测范围广（约为120mg/L，P），故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。（1）钒钼酸铵溶液 25.0g 钼酸铵（NH4）6Mo7O244H2O 分析纯溶于400ml 水中，另将25g 偏钒酸铵（NH4VO3，分析纯）溶于300ml 沸水中，冷却后加入250ml 浓HNO3（分析纯）。将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵溶液中，不断搅匀，最后加水稀释到1L，贮入棕色瓶中。（2）6mol/LNaOH 溶液 24gNaOH 溶于水，稀释至100ml；（3）0.2%二硝基酚指示剂0.2g 2，6二硝基酚或2，4二硝基酚溶于

21、100ml 水中；（4）磷标准液C（P）50mg/L0.2195g 干燥的KH2PO4（分析纯）溶于水，加入5ml 浓HNO3，于1L 容量瓶中定容。吸取定容、过滤或澄清后的消煮液10.00ml（V2 含磷0.050.75mg）放入50ml容量瓶中，加2 滴二硝基酚指示剂，滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色，加入10.00ml 钒钼酸铵试剂，用水定容（V3）。15分钟后用1cm 光径的比色杯在波长440mm 处进行测定，以空白溶液（空白试验消煮液按上述步骤显色）调节仪器零点。标准曲线或直线回归方程 准确吸取50mg/L P 标准液0，1，2.5，5，7.5，10，15ml 分别放入50ml

22、 容量瓶中，按上述步骤显色，即得0，1.0，2.5，5.0，7.5，10，15mg/LP 的标准系列溶液，与待测液一起测定，读取吸光度，然后绘制标准曲线或求直线回归方程。全P%C（P）（V1/m）（V3/V2）104式中 C（P）从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷浓度，mg/L；V3显色液体积，ml；V2吸取测定的消煮液体积，ml；104将mg/L 浓度单位换算为百分含量的换算因数。注释显色液中（CP）1-5mg/L 时，测定波长用420nm；520mg/L，用490nm。待测液中Fe3+浓度高的选用450nm，以消除Fe3+干扰。校准曲线也应用同样波长测定绘制。一般室温下，温度对显色影响不

23、大，但室温太低（如15时，需显色30分钟，稳定时间可达24小时；如试液为HCl，HClO4 介质，显色剂应用HCl 配制；试液为H2SO4介质，显色剂也用H2SO4配制。显色液酸的适宜浓度范围为0.21.6mol/L，最好是0.51.0mol/L，酸度高显色慢且不完全，甚至不显色，低于0.2mol/L，易产生沉淀物，干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为1.610-310-2mol/L，钡酸盐为810-52.210-3mol/L。此法干扰离子少，干扰离子是Fe3+，当显色液中Fe3+浓度超过0.1%时，它的黄色有干扰。可用扣除空白法消除。UV254测定一、实验仪器：紫外分光光度计、1cm

24、 石英比色皿。真空抽滤机。过滤装置：孔径为0.45m 的滤膜。清洗滤膜和过滤装置时应保证至少50mL 不含有机物的清洗水通过滤膜。清洗水：DOC 含量低于0.3mg/L 的双蒸馏水。二、操作过程水样的制备：将水样通过过滤装置,去除水中悬浮物质和非溶解性有机物。分光光度法测定：以去离子水作为空白对照，在254nm 波长、室温下测定。色度测定一、主题内容与适用范围1、本标准规定了两种测定颜色的方法。本标准测定经15min澄清后样品的颜色。pH值对颜色有较大影响，在测定颜色时应同时测定pH值。1.1 铂钴比色法参照采用国际标准ISO 78871985水质颜色的检验和测定。铂钴比色法适用于清洁水、轻度

25、污染并略带黄色调的水，比较清洁的地面水、地下水和饮用水等。1.2 稀释倍数法适用于污染较严重的地面水和工业废水。两种方法应独立使用，一般没有可比性。样品和标准溶液的颜色色调不一致时，本标准不适用。2、定义:本标准定义取自国际照明委员会第17号出版物（CIE publication No.17），采用下述几条。2.1 水的颜色 :改变透射可见光光谱组成的光学性质。2.2 水的表观颜色 :由溶解物质及不溶解性悬浮物产生的颜色，用未经过滤或离心分离的原始样品测定。2.3 水的真实颜色 :仅由溶解物质产生的颜色。用经0.45m滤膜过滤器过滤的样品测定。2.4 色度的标准单位，度：在每升溶液中含有2mg

26、六水合氯化钴（）和1mg铂以六氯铂（）酸的形式时产生的颜色为1度。二、铂钴比色法1、原理 :用氯铂酸钾和氯化钴配制颜色标准溶液，与被测样品进行目视比较，以测定样品的颜色强度，即色度。样品的色度以与之相当的色度标准溶液的度值表示。注：此标准单位导出的标准度有时称为“Hazen际”或“PtCo标”GB 3143液体化学产品颜色测定法（Hazcn单位铂钴色号）、或毫克铂/升。2、试剂 :除另有说明外，测定中仅使用光学纯水及分析纯试剂。 2.1 光学纯水：将0.2m。滤膜（细菌学研究中所采用的）在100mL蒸馏水或去离子水中浸泡1h，用它过滤250mL蒸馏水或去离子水，弃去最初的250mL，以后用这种水配制全部际准溶液并作为稀释水。2.2 色度标准储备液，相当于500度：将1.2450.001g六氯铂（）酸钾（K2PtC16）及1.0000.001g六水氯化钴（）（CoCl26H2O）溶于约500mL水中，加1001mL盐酸（=1.18g/mL）并在1000mL的容量瓶内用水稀释下标线。将溶液放在密封的玻璃瓶中，存放在暗处，温度不能超过30。个溶液至少能稳定6个月。2.3 色度标准溶液：在一组250mL的容量瓶中，用移液管分别加入2.50、5.00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50、20.00、30.00及35.00mL储备液，并用水稀释至标线。溶液色度分