马铃薯组织培养.docx

1、马铃薯组织培养 马铃薯组织培养1、繁殖瓶苗 将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段，接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素MS固体或液体（可用纸桥）培养基的组培瓶中，置培养室内培养。培养条件为：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培养温度（252），空气相对湿度50%-60%，自然通风。叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。记录苗芽发生时间，生长状况，污染率。再按照上述方法重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。 2、繁殖微型薯 将上述具有3-5片叶幼苗，加入液体培养基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1mg/L+CCC100-500

2、mg/L+糖80-100g/L),放入培养室，遮光全黑暗或光照时数少于8h/d，温度（202），空气相对湿度50%-60%，自然通风。 经40-70d后，在植株叶腋处长出微型薯。记录微型薯发生时间，生长状况，污染率。马铃薯组织培养及原原种生产技术摘要：本文作者根据自己多年的工作经验，详细地介绍了马铃薯组织培养方法和原原种生产技术。关键词：马铃薯 组织培养 原原种 生产 技术病毒和类病毒的累积性感染是引起马铃薯种性退化的重要因素，而通过组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被马铃薯生产地区广泛采用。现将马铃薯组织培养方法和原原种生产技术介绍如下：1 马铃薯组织培养1.1外植体培养从已催出芽（芽

3、长一般24cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.10.15%的升汞溶液中浸泡810分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS6BA1.5mg/L（毫克/升）GA30.5mg/LIBA0.5mg/L琼脂8g/L蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种15个外植体。1.2茎尖剥离及初代培养外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.10.5mm部分剥离出来，转接到MS肌醇100mg/L+6BA1.5mg/LGA30.5mg/L泛酸钙1.5mg/L蔗糖30g/L琼脂8g/L活性炭0.17g/L（PH值为5

4、.8）的培养基上，每个培养瓶接种45个生长点。光照保持30006000Lux（勒克斯）左右，每天照光1316小时 ，温度控制在23，经26个月左右培养诱导，其间转接23次，生长点即可长成新的小植株。经病毒检测不带病毒的株系就可进行扩繁，未脱毒的株系淘汰。1.3试管苗扩繁1.3.1扩繁前的准备1.3.1.1扩繁培养基的制备。扩繁培养基以MS培养基为扩繁基本培养基，外加6BA0.5mg/L+NAA0.51.5mg/L+蔗糖30g/L琼脂8g/L活性炭0.17g/L，pH值为5.8。1.3.1.2把接种用具在超净工作台上用紫外线灯消毒2030分钟，关掉紫外线灯，打开日光灯和吹风机。1.3.1.3用肥

5、皂把手洗干净并擦干，再用75%酒精消毒，待手上酒精干后，点上酒精灯，把剪子、镊子培养皿等所需用具在酒精灯上进行消毒。1.3.2接种扩繁用75%酒精喷待接的试管苗和制备好待用的扩繁培养基表面，将已脱毒株系按每苗留12片叶为一个茎段剪下，正向插入扩繁培养基（即MS6BA0.5mg/LNAA0.51.5mg/L蔗糖30g/L琼脂8g/L活性炭0.17g/L，PH值为5.8的培养基）上。一般每个培养瓶接种15个茎段，在温度2527,光照20003000Lux，每天1516小时条件下培养34天即可生根长芽。30天后可按1：7瓶进行扩繁一次，即原来每瓶15苗扩繁一次可达7瓶105苗，以后每隔30天扩繁1次

6、，繁殖到目标苗数后，再经23个月培养即可扦插到原原种繁殖网室，进行原原种繁殖。2 网室原原种生产试管苗扦插到繁殖网室后生产出重1g以上可用于繁殖原种的微型种薯叫原原种，又称试管薯、迷你薯。2.1繁殖网室的构建用隔虫网温室进行原原种生产，不仅可进行大面积高密度无土栽培，而且繁殖速度快，生产数量多，质量好。网温室一般顶高2.22.8m，侧高1.82.0m，长和宽据场地大小而定，长一般30m以上，宽4.56m。上面覆盖防虫网，以防止害虫特别是传播马铃薯病毒的主要媒介蚜虫进入，暴雨来临时可加盖塑料薄膜防雨，夏季烈日暴晒时可加盖遮阳网遮阳。为便于管理，网室内用砖砌宽1.2m，高0.4m，中间留0.5m走

7、道的苗床。人员进入时要换消过毒的工作服，用1%甲醛洗手，禁止抽烟。网室内浇水和排水要方便，基质和空间要作严格充分的消毒。2.2基质的准备马铃薯试管苗网室繁殖用的无土基质主要有锯木、粗糠、炭渣、珍珠岩、蛭石、河沙等。其中最好的基质是蛭石，无病菌、膨松，但成本高（9元/kg）；其次是珍珠岩；最后是河沙，易渍水，易死苗，但成本低，结薯率高，为大量繁殖脱毒马铃薯原原种最常用基质。基质适宜的PH值为67,偏酸或偏碱都要进行调节。2.3网室及基质消毒2.3.1网室消毒网室建好后，应用“功夫”杀灭地下害虫，用抗蚜威灭蚜，空间用高锰酸钾水溶液喷雾，网室周围要经常除草。网室内每收完一茬薯，都要进行1次空间消毒和

8、基质灭菌。2.3.2基质灭菌在繁殖苗床内放入2030cm厚的河沙，用0.3%的甲醛溶液浇湿，然后用塑料薄膜覆盖7天，期间放风两次，每次1小时，揭膜57天后插苗（用蛭石和珍珠岩作基质，第一次使用时可不进行消毒）。2.4栽培管理2.4.1试管苗扦插扦插前1天在苗床上浇清水，湿度23cm，最多不超过5cm；第2天再浇1次后刮平墒面。将瓶苗打开浇少量清水，然后取出试管苗洗净培养基，用消毒剪从基部剪下按早熟种25cm、中晚熟种37cm用竹筷划沟扦插（若试管苗根数少可不剪而直接进行扦插）；若试管苗长超过10cm可按5 cm（留23个节）一段剪成若干茎段进行扦插，扦插深度23cm，苗长可埋入23个节，苗短1

9、2个节。苗插好后浇定根水23次，吸透为止。2.4.2水肥管理2.4.2.1浇水：扦插后相对湿度保持95100%，每天用七功能的喷枪或洒水壶喷洒68次水，主喷地上部分，防止萎蔫，515天（冬季15天、夏季5天）后开始生根、长新叶。扦插15天后13天浇1次透水，一般掌握阴雨天不浇，基质上部不干不浇，暴雨天气还应注意防雨。收获前1520天停止浇水。2.4.2.2追肥：扦插生根后（即扦插15天后）开始追施1号营养液（用N、P、K之比为15：15：15三元复合肥50g水20kg），按每23kg/m2浇施，每周2次，浇后用雾状水洗苗，洗至叶子滴水为度。30天后施2号营养液（用N、P、K之比为15：15：1

10、5三元复合肥60g硫酸钾5g+普钙5g水20kg，按每23kg/m2浇施，每周1次，浇后用雾状水洗苗。60天后1、2号营养液交叉使用，34天1次。收获前1520天停止追肥。2.4.3温度控制网室温度保持1527，夏季气温高，应注意网室通风，也可用70%遮光率的遮阳网遮挡扦插苗至成活后揭开，冬季气温低时可加盖塑料薄膜增温，同时注意通风和光照情况。2.4.4中耕培土除草试管苗扦插后30天左右开始第一次树苗培土，培土高度不宜过高，一般12cm；扦插后50天左右第二次培土，培土高度34cm。同时从试管苗扦插到收获期间都要注意及时人工拨除杂草。2.4.5病虫害防治2.4.5.1病害防治主要病害有早、晚疫

11、病，特别在阴雨天气发病率最高。发病前遇阴天雨季可用10001500倍液瑞毒锰锌喷雾预防，每隔7天1次，连喷2次；发病后用8001000倍液瑞毒锰锌喷雾，每隔7天1次，连喷24次；也可用1：1：200倍的波尔多液进行防治，每隔712天1次，连喷4次。2.4.5.2虫害防治网温室主要害虫有蚜虫、白粉虱、螨类及地下害虫地老虎等。蚜虫防治要注意检查网室，及时防堵漏洞，严防蚜虫侵入传毒。温室白粉虱可用敌敌畏1000倍稀释液加溴氰菊酯3000倍稀释液喷雾，每隔37天1次，连喷3次。螨类可用800倍三氯杀螨醇防治。地老虎在有土栽培条件下容易发生，而在无土栽培条件下则很少发生。2.4.6适时收获、储藏马铃薯苗

12、生长后期，停水停肥后，其营养生长逐渐减缓、停止。当薯苗变黄，薯皮老化时即可收获种薯。早熟种一般90天左右收获，每株收种薯35粒；晚熟种100110天左右收获，每株收种薯56粒。新收获的种薯含水量较高，需晾干，但不能在阳光下直晒，晾干的种薯分级后分别放在编织袋、尼龙网袋等透明的容器中，按不同品种、不同收获日期分别储存，以免混杂。脱毒马铃薯原原种的休眠期约6080天，用赤霉素处理能打破休眠，加快萌芽速度，萌芽时间可缩短30天左右。处理方法是用3040ppm赤霉素浸泡2030分钟，或将原原种放入冰箱在28条件下保存，播种前2个月从冰箱中取出，在室温下促其萌动、生芽。原原种萌芽后便可拿到高海拔地区进行

13、原种繁殖。2.5茎尖扦插扩繁茎尖扦插扩繁是在试管苗数量不足的情况下，以试管苗扦插苗为母本，剪取其茎尖进行扦插的一种快速繁殖方法。2.5.1茎尖的剪取以扦插成活的试管苗为母株，在母株扦插30天后剪取其茎尖12叶一心或23叶一心进行扦插，剪取量3040%；710天后第二次剪，剪取量100%；40天后每隔7天可剪一次茎尖进行扦插。母株一般最多可剪半年。剪苗次数越多，生育期越长，结薯个数越多。剪取茎尖达半年的母株单株结薯可达50粒以上。母株在收获前30天停止采苗，并停止浇水追肥，促进营养转移，使苗不恋青，薯块迅速成熟，小薯块也能作种。2.5.2茎尖扦插将剪下的茎尖泡在清水里（如苗老可用35ppm赤霉素

14、或奈乙酸浸泡5分钟再扦插），用竹筷在浇透水的墒面上按23cm或34cm的株行距插23cm深的小洞，然后把剪下茎尖的第1个节放在洞里（所埋叶和节会产生掖芽薯），栽几行后就要浇水23次，使其自然封洞，确保苗不萎蔫。2.5.3水肥管理水分管理与试管苗扦插相同。收获前1530天停止浇水。茎尖扦插后15天开始施1号肥，每隔7天1次，共施2次；然后施2号肥，每隔7天1次，共施2次；45天后1、2号肥交叉使用，34天1次，收获前1530天停止追肥。2.5.4中耕培土除草及病虫害防治茎尖扦插一般在扦插后15天进行1次培土，培土高度3cm。除草及病虫害防治方法与试管苗扦插相同。2.5.5收获、储藏早熟种一般60

15、天左右收获，每株可收种薯12粒；晚熟种8090天左右收获，每株可收种薯34粒。马铃薯茎尖脱毒培养方法优化研究1以甘肃省主栽品种陇薯6号为材料,研究了茎尖大小及培养基中激素和活性炭对马铃薯茎尖培养成活的影响。结果表明,叶原基数为2的茎尖脱毒效果最好;MS培养基中加入0.5 mgL-1 6-BA、0.1mgL-1 GA3和0.1 mgL-1 NAA有助于陇薯6号茎尖分生组织分化;加入0.05%活性炭,茎尖成苗时MS培养基母液的配制1.材料与用具配制MS培养及所需的药品、生长调节剂、各类天平、烧杯、 容量瓶、 量筒、 蒸馏水、 磁力搅拌器、 95%的酒精、0.1mol/LNaOH或0.1mol/LHCL、母液瓶、标签、冰箱2方法步骤1.母液类型：四种母液分别是：大量元素、微量元素、铁盐、有机母液。如下表所示（单位mg)：2.配置步骤（1）准备：500/1000烧杯（盛少许蒸馏水）1个，1L容量瓶1个，1L试剂瓶4个，盛有蒸馏水的洗瓶，滴管，标签纸。（2）称取各种药品，按顺序依次溶解在烧杯内。（3）定容：将溶液引流在1L容量瓶中进行定容。（4）储存：将容量瓶中母液倒入试剂瓶中，写好母液名称，贴标签。并贮藏在冰箱中。由于亚铁容易氧化