1、8.09氯化铵-氨水把0.1 mol/L 氯化铵与0.1 mol/L 氨水以2:1比例混合均匀9.110把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀11.612磷酸氢二钠-氢氧化钠把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀,加水稀释至100 ml12.013氯化钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0
2、.2 mol/L KCl与66.0 ml 0.2 mol/L NaOH混合均匀,加水稀释至100 ml13.0一、常用溶液的配制(一)溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed reagent,GR)、分析试剂(Antalytical reagent,AR)化学纯(Chemical pure,CP)和实验试剂(Laboratory reagent,LR)等等。工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在5.57.0之间
3、才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸缓冲液11/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:称取磷酸二氢钾(KH2PO4,AR)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1000ml)。21/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO4,A.R.)9.47g(或者Na2HPO42H2O 11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1000ml)
4、。3按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。附表1 磷酸盐缓冲液配制法(单位:毫升)pH1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO45.892.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.780.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.743.556.58.894.75.349.650.48.195.84.26.
5、955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0(三)0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法0.15Mol/L Na2HPO4(ml)0.15Mol/L NaH2PO4(ml)26.573.549.051.061.039.07.481.019.0Na2HPO42H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。NaH2PO4H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23
6、.4g/L。(四)0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法0.2 Mol/L Na2HPO4(ml)0.2Mol/L NaH2PO4(ml)12.387.718.581.50.2Mol/L Na2HPO42 H2O溶液35.61g/L12 H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含27.60g/L2 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时,则在溶液中加0.85的NaCl溶液即可。(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)(0.15Mol/L
7、PH 7.2)NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g(如为Na2HPO412H2O,则为2.89g)KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中,完全溶解后,115高压灭菌10min15min,存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。(六)硼酸盐缓冲液(Borate saline buffer)1硼酸(3BO3)0.2Mol/L硼酸:硼酸12.37g加水至1 000ml。2硼砂(Na2B4O7)0.05Mol/L硼砂:硼砂19.07g加水至1 000ml。附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法0.05Mol/L硼
8、砂(ml)0.2Mol/L硼酸(ml)1.09.03.51.54.55.58.74.0(七)巴比妥缓冲液1pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml(1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水) 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。 加1.17 N HCl 55ml。 用HCl调节pH到8.2,并加蒸馏水至4 265ml。2pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠 10.30g加蒸馏水至 1 000.00ml3pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥
9、 1.66g巴比妥钠 12.76g加蒸馏水 1 000.00ml(八)0.2Mol/L醋酸盐缓冲液 见表附表5附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)23379.108.95258.067.9027.58.928.767.967.8230.08.758.6010.57.877.7332.58.628.4812.57.777.6335.08.508.3715.57.667.528.408.2717.57.547.4040.08.328.1820.07.367.2242.5(九)三羟甲基甲烷盐酸缓冲液(TrisHCl缓冲液)不同pH,
10、0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加ml0.1NHCl,加水稀释至100ml(见下表)附表6 TrisHCl缓冲液配制法0.1NHCl(ml)8.968.058.788.7415.08.238.1022.57.207.0545.08.148.0025.0三羟甲基氨基甲烷(Tris)分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷:Tris24.23g,加水至1 000ml。0.1NHCl:取HCl8.6ml,加水至1 000ml。(十)0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。不用时塞紧
11、瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。(十一)甘油磷酸缓冲液1配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可29份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。用途:用于免疫荧光试验。(十二)Hanks液1贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00g12 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4酚红液 50.00ml双馏水加至 100.00ml115高压灭菌15min,冰冻保存。2工作液贮存液 1份双馏水 9份115高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6NaHCO3液
12、调pH值至7.2左右(溶液呈橙红色)。(十三)萘(钠)氏试剂(Nesslers reagent)配方1:氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20NaOH 30ml加蒸馏水至 100ml配方2:碘化汞 11.5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml(完全溶解后)过滤,加20NaOH 50ml。检测溶液中氨离子。(十四)阿氏(Alsevers)液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.80g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml溶解后,以10%柠檬酸调节pH至6.1,过滤,分装,10磅10min灭菌,4保存。(十五)青、链霉素混合液(简称SP液或双抗液)青霉素(40万U) 5支链霉素(200万g) 1支分别溶于100
13、ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置-10-20冰箱保存备用(1万单位g/ml)。临用时,按1%的量加入营养液或其他溶液中,最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。(十六)洗液(清洁液)重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套,以保安全。洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用。如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。浓硫酸 50%蒸馏水 50%重铬酸钾 5%此为中等强度洗液。配方3:重铬酸钾 100g蒸馏水 1 000ml加热溶解,冷却后缓慢加入工业硫酸 100ml此液为弱洗液,为棕红色。使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净,经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效。
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