常用pH缓冲液配置方法及注意事项Word格式.docx

1、8.09氯化铵-氨水把0.1 mol/L 氯化铵与0.1 mol/L 氨水以2：1比例混合均匀9.110把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀11.612磷酸氢二钠-氢氧化钠把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml12.013氯化钾-氢氧化钠把 25.0 ml 0

2、.2 mol/L KCl与66.0 ml 0.2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml13.0一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，GR）、分析试剂（Antalytical reagent，AR）化学纯（Chemical pure，CP）和实验试剂（Laboratory reagent，LR）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2药品称量要精确。3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.57.0之间

3、才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液11/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。21/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO42H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）

4、。3按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO45.892.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.780.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.743.556.58.894.75.349.650.48.195.84.26.

5、955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法0.15Mol/L Na2HPO4（ml）0.15Mol/L NaH2PO4（ml）26.573.549.051.061.039.07.481.019.0Na2HPO42H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。NaH2PO4H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23

6、.4g/L。（四）0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法0.2 Mol/L Na2HPO4（ml）0.2Mol/L NaH2PO4（ml）12.387.718.581.50.2Mol/L Na2HPO42 H2O溶液35.61g/L12 H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4H2O溶液含27.60g/L2 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85的NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L

7、PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为Na2HPO412H2O，则为2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）1硼酸（3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。2硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法0.05Mol/L硼

8、砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）1.09.03.51.54.55.58.74.0（七）巴比妥缓冲液1pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水） 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。 加1.17 N HCl 55ml。 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。2pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠 10.30g加蒸馏水至 1 000.00ml3pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥

9、 1.66g巴比妥钠 12.76g加蒸馏水 1 000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液 见表附表5附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）23379.108.95258.067.9027.58.928.767.967.8230.08.758.6010.57.877.7332.58.628.4812.57.777.6335.08.508.3715.57.667.528.408.2717.57.547.4040.08.328.1820.07.367.2242.5（九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（TrisHCl缓冲液）不同pH，

10、0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加ml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6 TrisHCl缓冲液配制法0.1NHCl（ml）8.968.058.788.7415.08.238.1022.57.207.0545.08.148.0025.0三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。不用时塞紧

11、瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸缓冲液1配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可29份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光试验。（十二）Hanks液1贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00g12 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4酚红液 50.00ml双馏水加至 100.00ml115高压灭菌15min，冰冻保存。2工作液贮存液 1份双馏水 9份115高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6NaHCO3液

12、调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。（十三）萘（钠）氏试剂（Nesslers reagent）配方1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20NaOH 30ml加蒸馏水至 100ml配方2：碘化汞 11.5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml（完全溶解后）过滤，加20NaOH 50ml。检测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsevers）液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.80g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4保存。（十五）青、链霉素混合液（简称SP液或双抗液）青霉素（40万U） 5支链霉素（200万g） 1支分别溶于100

13、ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10-20冰箱保存备用（1万单位g/ml）。临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。（十六）洗液（清洁液）重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。浓硫酸 50%蒸馏水 50%重铬酸钾 5%此为中等强度洗液。配方3：重铬酸钾 100g蒸馏水 1 000ml加热溶解，冷却后缓慢加入工业硫酸 100ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。