贝克曼库尔特P ACE MDQ操作手册中文版 Operational Manual for MDQ with 32 Karat Softwarepart1Word下载.docx

1、Micellar ElectroPhoresis Capillary Chromatography（MEKC）胶束电动力学毛细管色谱在MECC中，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成一个球体我们称其为胶束。目前，以十二烷基硫酸钠（SDS）使用最为普遍。在MECC的系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相，被分离物在这两个相之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间。和区带电泳一样，缓冲液在管别壁处形成正电，使其显示强烈的向负极移动的电渗流，而SDS胶束由于其外壳带负电性具有向正极迁移的倾向。一般情况下，电渗流的速

2、度大于胶束的迁移速度。因此，迫使胶束最终以较低的速度向负极移动。我们把这个移动的胶束固定相也称之“准固定相”。在胶束电动力学色谱中，中性粒子之间的分离是根据其本身的疏水性的不同而达到的，不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力就大，保留时间就长；反之，保留时间就短。Capillary Gel Electrophoresis（CGE）毛细管凝胶电泳凝胶电泳是用凝胶物质作为支撑物进行分离的区带电泳。凝胶是一种固态分散体系，它具有多孔性，具有类似于分子筛的作用。被分离物在通过装入毛细管的凝胶时，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来，其后是较小的分子。Capilla

3、ry Isoelectric Focusing （ cIEF）毛细管等点聚焦两性电解质在分离介质中的迁移形成pH梯度，各种具有不同等电点的蛋白质按照这一梯度迁移到它们的等电点的那个位置，并在该点停下，由此产生一条非常窄的聚焦区带，并使不同的蛋白质聚焦在不同的位置上。毛细管等电聚焦的运行过程，可分为三个步骤： A进样。把样品与两性电解质混合并进样。 B聚焦。加高电压34分钟，使整个毛细管长度范围内建立一个pH梯度，以便让样品在毛细管中向各自的等电点聚焦点移动，形成一条由不同组分排列的带子。 C迁移。阴极的缓冲液换成盐类后，再加上电压，使末端引起梯度降低，让已聚焦组分一个一个通过检测器。Capil

4、lary Electrochromatography（CEC）毛细管电色谱在毛细管中装填了液色谱的各种填料；相当于固定相，应用电泳中的EOF电渗流作为动力，电解质相当于流动相。各种小分子、极性或中性化合物在两相之迁移而形成分离。毛细管电色谱尤其适应于小分子（药物）的分离。 第二章P/ACE MDQ 毛细管电泳系统组成的概述 P/ACE MDQ毛细管电泳系统的主要组成部分有: 放置样品瓶、缓冲液和其它溶液的盛盘、系统连接装置、电极和高压电源、检测器和连接光纤、温度控制装置以及自动进样装置等。各个部件的详细配置情况见图1。图1 P/ACE MDQ 仪器的主要部件图解图2 样品盘示意图图 3 图示毛

5、细管卡盒备注： 1、 内可容纳毛细管的制冷剂管道 2、 毛细管 3、 UV 和PDA检测窗口 4、 LIF 检测窗口图4 指示灯的位置 1、高压指示灯 2、UV 灯亮指示灯 3、仪器电源指示灯图 5 图示样品盘和卡盒盖板 1、样品盘盖板 2、卡盒盖板 图 6 UV检测器光纤的连接方式示意图图 7 PDA检测器光纤的连接方式示意图图 8 带LIF 检测器的P/ACE MDQ 仪器示意图图 9 LIF 检测器的光学系统图解图 10 488 nm 激光光源大背面观 第三章 启动32 Karat 软件 从Windows 工具条上开始菜单按钮选择Programs / 32 Karat / 32 Kara

6、t Software 启动32 Karat软件.图11 32 Karat软件在开始菜单的位置32 Karat软件启动后打开列出已设置的仪器的主窗口.图12 32 Karat软件的主窗口工具条 工具条在顶部出现并且,在一些情况下位于当前的窗口底部。在工具条上的活跃按钮允许以鼠标单击的方式达打开许多普通的命令。以上这些按钮可在打开的窗口中看到。菜单条菜单条包含32 Karat软件可得到的所有命令。菜单条能通过鼠标单击或按住Alt 键和带下划线的字母打开。新建并且设置一台仪器在这练习中你将：新建一台真实连接的仪器新建一个能被用于离线数据处理的虚拟仪器注意这章假设所有的硬件和接口板都已安装，如果没有安

7、装，请先参考安装和维护手册进行安装。新建一台仪器从一台单个的计算机用32 Karat 软件最多能控制4台P/ACE MDQ能创建无数的虚拟仪器用于离线编辑方法或数据分析。使用下列练习设置一台新机器。选择和你的硬件配置相对应的检测器类型。1、在右边的空白处单击鼠标右键，从下落菜单选择 New / Instrument。2、一台新仪器将建成，它的图标位于右边的空白处。在加亮的名称域输入仪器的名称（在这个例子我们将它命名为Instrument 1），这个名字将在整个32 Karat软件中使用，在仪器窗口，数据报告，和仪器记录。图13 32 Karat软件打开窗口设置新仪器 设置仪器是软件准备控制硬件

8、和采集数据的过程，包括：1、识别P/ACE MDQ 为唯一的仪器。2、识别当前的硬件部件。每台物理的仪器至少由2个图标代表其中之一将被用于控制和数据采集；在第一个正在用于采集数据时另一个被用于数据的离线处理。下面将以UV检测器为例。1、在Instrument 1图标上单击鼠标右键，从下落菜单选择Configure。2、在Instrument type下拉选框中选择Beckman P/ACE MDQ；输入名称Instrument1 标识仪器。3、单击Configure按钮，在Beckman P/ACE MDQ设置窗口可用的模块出现在窗口的左面。自动设置 32 Karat软件可自动设置所有的P/A

9、CE MDQ模块。注意要将仪器电源打开并连接到电脑上。1、单击窗口底部的Auto Configuration按钮，可听到MDQ的托盘移动的声音，这表明软件正和仪器通讯。在这一过程中会出现以下窗口。2、检测器将在已设置的模块窗口中出现。3、在新图标上单击鼠标右键并选择Open。核对仪器被正确的检测和设置。图14 P/ACE MDQ UV检测器配置窗口4、和计算机相联的每一台PACE MDQ必须有唯一的设备ID、设定的缺省植是l。如果安装有多台的MDQ，为每一台MDQ选择唯一的 ID（l， 2， 3或 4）在选择好ID后点击SET BUS ADDRESS将该信息传送给仪器。5、缓冲液托盘和样品托盘

10、的类型在开始时被检测。托盘盖子被打开并且关上后每次都会检测托盘的类型。仪器能自动检测3种类型的托盘：36位缓冲液托盘，大容量缓冲液托盘和 48位置样品托盘。 96孔样品极不能被自动检测，必须从该窗口手动设置。托盘类型可以手工地在任何时间被改变。6、当选择96孔样品板时，允许定义样品板的复选框可用，如果这个复选框被选择，用户可以定义样品板的高度和深度，因此可以使用其他的非标准样品板。如果这个复选框没被选择，仅能使用标准的Beckman Coulter96孔样品板。7、如果安装了LIF检测器，LIF校准向导可用。这个功能在安装和维护手册中有详细的描述。8、滤光片对话框用来定义UV检测器安装的特定滤

11、光片。数据必须手工输入并且和仪器实际安装的滤光片一对应。如果安装了PDA检测器，位置 8不能安装滤光片，显示值为“0”。9、压力单位可定义为psi（磅每平方英寸）或mbar（毫巴）。选择的单位将仅仅在这台仪器被使用。10、温度控制显示样品冷却装置的安装。如果安装，可从下拉框选择“可用”。11、单击 OK回到仪器配置窗口。图 15 Beckman P/ACE MDQ仪器配置窗口配置选项图16 P/ACE MDQ 配置选项对话框（分析选项）分析选项定义重新处理数据时采用的软件功能。PDA允许分析PDA检测器的多通道数据。System Suitability可自动查看结果。未选择的结果可实时更新。Q

12、ualitative Analysis允许以迁移时间，相对迁移时间或迁移率。Caesar Integration用于检测峰的开始和结束。当基线突然跃迁或信噪比较低时非常有用。如果未选择，峰的开始和结束基于斜率阀值。仪器选项图 17 P/ACE MDQ 仪器设置选项对话框（仪器选项）Standard CE峰达到检测器窗口的时间称为迁移时间。CEC/LC峰到达检测器窗口的时间称为保留时间。这一选择会在谱图和报告中反应。12、单击OK退出并且保存模块设置。13、单击OK回到开始菜单。手动设置手动设置UV检测器手动设置用于仪器关机或正在使用时。 注意在该手册中的许多练习需要设置一台虚拟的 UV检测器仪

13、器。按照以下过程建立一台虚拟的UV检测器仪器，不考虑实际的仪器配置。1、在主菜单新建一台设备，并命名为“UV for manual”。2、在这一练习中设置UV检测器。选择左边的UV检测器图标，单击图标， 新加一台UV检测器仪器。3、在新图标上单击鼠标右键并且选择Open，出现P/ACE MDQ 设备设置对话框。4、选择仪器使用的托盘。5、点击OK退出并保存模块配置。关于配置选项请参看以上内容。手动设置PDA和LIF 检测器参照UV检测器的设置，注意每台设备只能有一个检测器。 第四章 直接控制简介 直接控制屏幕相当于仪器的面板操作。可以对仪器的操作参数进行既时修改，直接控制对操作准备、维修保养和

14、故障排除非常有用。 在直接控制界面通过用鼠标点击相应的区域来控制仪器。并且可以看到仪器的现时状态。Direct Control Window直接控制窗口 点击 Control下拉菜单选择 Direct Control View，打开直接控制窗口。 图18直接控制窗口中的特殊区域1、毛细管温度2、托盘上/下3、标签对话框4、托盘上/下5、灯开关6、检测器对话框7、调零8、托盘回到原始位置9、托盘到装载位置10、进样对话框11、停止当前步骤12、样品存储温度13、电压对话框14、电流对话框15、功率对话框16、压力对话框17、瓶位置对话框。以上是UV检测器的直接控制。PDA和LIF检测器大致与此相

15、同。表1 直接控制的功能直接控制中的功能温度毛细管温度热点击打开对话框设定制冷液温度样品温度打开对话框设定样品存储温度托盘上/下将托盘上下移动瓶位置打开对话框将选择的瓶子移到毛细管末端装载按钮将托盘移到装载位置回到原始位置将托盘移到原始位置光学系统检测器控制打开检测器的对话框灯/激光状态打开对话框可将灯/激光打开或关闭调零将检测器输出调零动力控制电压打开对话框设定电压分离参数电流打开对话框设定电流分离参数功率打开对话框设定功率分离参数压力打开对话框设定压力分离参数其它控制进样打开对话框设定进样参数停止停止仪器操作毛细管信息打开对话框输入毛细管和卡盘的信息表2 状态显示在直接控制中显示的状态状态

16、文字显示当前仪器的功能和状态剩余时间文字/示意图显示当前仪器操作的剩余时间托盘位置显示毛细管末端的位置卡盘状态示意图显示是否安装卡盘盖子状态显示盖子关闭或打开卡盘温度文字/示意图热点击显示当前制冷液的温度样品存储温度显示当前样品存储的温度样品存储状态显示是否安装样品温度控制装置示意图/热点击显示灯/激光灯打开或关闭文字/示意图/按钮显示当前、设置和最大电压显示当前、设置和最大电流显示当前、设置和最大功率显示当前、设置和最大压力类型/示意图显示压力或真空、和毛细管抹端的位置极性显示电极的+和- 极性检测器信号文字/热点击检测器的实时信号显示毛细管信息练习：处理新的石英毛细管。 该过程不能用于涂布

17、毛细管。所需物品： l、已安装好的卡盘，（ 75um ID60cm总长，到检测器长度为 50cm的石英毛细管。） 2、甲醇（ HPLC级） 3、0.1molL盐酸水溶液 4、毛细管再生液A（lmolL氢氧化钠水溶液） 5、运行缓冲液A（PN 338426） 6、重蒸水 7、2mL缓冲液小瓶 8、36位缓冲液托盘 按下表所示按倾序放置各种溶液，注意照安装维护手册进行。表3 瓶子放置的位置溶液左边缓冲液托盘（Inlet）右边缓冲液托盘（Outlet）甲醇B10.1 mol/L 盐酸C1再生液A （P/N 338424）D1重蒸水E1运行缓冲液AA1空瓶 检查卡盘和样品托盘正确安装。关好托盘盖，注意

18、直接控制图象屏幕上是否显示卡盘和托盘该已安装好。此时应能听到制冷剂开始循环的声音。 在直接控制屏幕上点击压力区域，出现图19的对话框。图19 压力对话框该对话框用于设置冲洗和压力分离的参数。 Pressure：输入所需压力，正向压力范围为： 0.1-100 psi； 真空范围：0.1-5 psi。 Duration：持续时间，单位分钟。 Direction：方向，正向（从毛细管进口到出口）或反向（从出口到进口） Pressure Type：压力类型，使用压力或真空 （但一般使用压力）. Tray Positions：指明毛细管冲洗瓶位置。点击Trays按钮，打开瓶选择对话框，见图20。可以直接

19、点去相应的位置，例如分别选择左边的B1和右边的B1即选择甲醇和空瓶，点击OK后回到压力设置对话框。瓶位置示意图应显示Inlet：BI：B1和Outlet：BO：B1。 在 Pressure框中输入 20，在 Duration框中输入 1.0，Direction为正向，Pressure Type为压力。对话框上如同像图19。 点击OK。瓶子移到指定的位置，开始冲洗。按照表4的步骤进行其它步骤的冲洗。图20 选择瓶位置对话框表4 冲洗步骤InletOutletPressureTime2510.50.1 mol/L盐酸202再生液A当冲洗完成后，新毛细管已处理好。毛细管中充满运行缓冲液，下一步将进行

20、电压设置。电击电压区域打开下面的对话框。图21 电压设置对话框 该对话框用于设置电压分离参数。参数如下：Voltage：分高电压0.1-30千伏Duration：运行电压的时间0.1-999.9分钟Ramp Time：达到目的电压所需的时间 0.1-999.9 分钟。Voltage Max：系统允许达到的最高限定电压，应高于或等于分离电压。Current Max：系统允许达到的最大限定电流。Tray Positions：运行时瓶子的位置，与压力冲洗时瓶子位置的设置万法相问。With Pressure：允许在使用电压运行的同时使用压力；如果选中，还需设定压力值和方向。压力最大值为100psi，压

21、力可加在进口（正向），出口（反向）或两端同时加压。With vacuum：允许在使用电压运行的同时使用真空，如果选中；还需设定真空值和方向。真空最大值为spsi，压力可加在进。端（正向），或者出口端（反向）但不能两端同时加真空。External Adapter：如果使用外部设备必须选中该项。详情请参看安装维护手册。Polarity：选择电极极性，注意看示意图。在这一练习中选择运行电压的瓶子为运行缓冲液A系统，即Inlet：Al和Outlet：A1。其它参数如下：30kV2 minutesRamp time：0.5 minutes点击OK，瓶子移到指定的位置开始加电压。请注意电压、电流和功率的变

22、化。电压为30KV时电流一般在2733微安。2分钟后电压回到零，仪器回到空闲状态。至此已完成直接控制练习，在进行下一练习前请先熟悉直接控制中的各个功能。 第五章 方法编辑新建一个方法在直接控制练习中，再生毛细管的每一个步骤都需要单独输入参数，方法可将每一个步骤合并成合理的连续过程，仪器能按此程序完成一系列的步骤。本章将描述建立采集数据方法的最基本步骤。还有其它的功能如数据分析、报告打印也是和方法整合在一起的，这将在以后的章节中作详细描述。建立或编辑方法必须进入仪器窗口，先进入32 Karat主窗口，用鼠标右键单击所建立的仪器，选择Open Offline。几秒钟后会打开仪器离机窗口，同时打开仪

23、器向导。可以从向导中选择Create or Modify a Method打开方法编辑对话框。现在点击OK关闭向导。下面将新建一个方法运行测试标样。从文件菜单选择File Method New仪器菜单标题栏上的方法名变为“untitled.met”在方法菜单选择 Method Instrument Setup进入方法的仪器控制和数据采集模块。随着不同检测器将会出现有34个选项卡的窗口。选择其中一个为“Initial Condition”（初始条件）的选项卡，进入初始条件对话框。在这个对话框中可输入用于仪器开始方法运行时的参数。Initial Condition Tab初始条件表在先前的一节，直

24、接控制，需要练习者分步输入每一步动作。在本节中把每一步结合成一个系统逻辑操作过程，此称为一个方法的。在这个方法中的各步骤是通过仪器自动进行的。本节描述的仅是建立一个为了仪器能采集数据的基本方法。有关更多的功能，诸如：数据分析、形成报告等均可编入一个方法，其中部分将在以后章节中说明。对于更多的说明可参考附录3。在本练习中需要编写一个用于运行标准试验样品的新方法。从菜单选择File Method New。要想进入方法的仪器控制核数据采集部分，从某单选择Method Instrument Setup。出现一个随着不同检测器将会出现有3 4个选项卡的窗口。选择“Initial Conditions”出

25、现如同图22的对话框。在这一框中设定方法开始运行时的仪器初始参数。图22 仪器设定对话框初始条件表Auxiliary data channels 辅助数据通道在32 Karat软件中可以选择采集多个仪器参数：电压、电流、功率和压力。在你想选择的参数前打勾。Max kV和max uA框中输入最大允许的电压和电流值。只要其中一个参数达到限制值；系统将自动进行保护。Mobility channels 迁移率通道这一选项将在后面详细说明。Temperature温度设置卡盘温度初始和样品温度（如果安装样品冷却装置后），该参数可以在时间程序中加以改变。Peak detect narametcrs峰检测参数这一参数用于触发其他事件，例如馏分收集。并不用于峰的积分和数据分析。Trigger settings触发设置PACE MDQ可等待仪器参数与设定参数一致时才开始运行。如果选择“wait for external trigger”则MDQ须等待外部设备的信号，其余两个Wait for tem