培养基制备Word格式.docx

1、有酵母自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色至浅棕色。酵母膏当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种混合物，它当中含有丰富的B族维生素和各种氨基酸。鱼 蛋 白 胨（Peptone Fish）本品是采用新鲜带鱼经过脱脂后再经消化、过滤、浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色的干燥粉末。本产品当中含有丰富的氨基酸，是一种提供细菌生长氮源的营养物质。在当中它起的主要作用是提供细菌生长的氮源和细菌生长的生长因子及各种氨基酸。玉米粉是在玉米破碎进行深加工的过程中，将做膨化食品的原料黄壳角质部分的玉米糁筛选后剩余的胚芽、面粉等高营养的物质，因玉米85%的脂肪存于胚芽中，所以玉米粉

2、的脂肪和蛋白都高于玉米，在饲料中可以代替部分玉米使用；玉米粉的优点： 1、脂肪高；2、蛋白高；3、颜色好；4、灰分低；常用细菌培养基的制备添加日期：2009-3-27 10:47:17常用细菌培养基的制备（1）（一）液体培养基1肉汤培养基（1）原料 牛肉浸出液 100ml 氯化钠 0.5g 蛋白胨 1g（2）制法 将牛肉除去筋膜和脂肪切成小块，放绞肉机中绞碎，称重，每500g牛肉加水1000ml，搅拌后，放置普通冰箱内浸泡一夜。次日取出，煮沸半小时，并用玻棒不断搅拌，不使沉于锅底；注意以蒸馏水补充其蒸发的水分。用洗净的白棉布过滤，将滤液再经过脱脂棉滤入适当容量的烧瓶内。在滤液中加1蛋白胨、0.

3、5氯化钠，并加热溶解之。用N/10氢氧化钠校正滤液的PH值至7.67.8后，再加热10min。用滤纸过滤，使培养基澄清。分装于试管或三角瓶中，若无棉花塞，经15磅30min灭菌，取出经无菌检验合格后备用。如没有牛肉时，可用牛肉膏代替。用途：基础培养基，可做其它固体、鉴别及特殊培养基的原料。2.马丁肉汤培养基（1）原料 猪胃消化液 1份 普通肉汤 1份（2）制法将上述成分混合后煮沸10min，矫正PH值至7.67.8。分装，10磅30min灭菌备用。用途：供检验细菌及制作菌苗之用。3马丁氏蛋白胨液 猪胃数个 纯盐酸15ml 过滤水 150ml（2）制法将猪胃去掉筋膜、脂肪，用绞肉机绞碎，每300

4、g猪胃加纯盐酸15ml，过滤水150ml，于50度下，消化24h，取出后加热至80度，使其停止消化，并用碱中和，然后用棉花过滤，分装于瓶内灭菌，15磅压力下灭菌15min，然后放在冰箱中备用。用途：供一些营养要求较高的细菌用。4.四硫磺酸钠增菌培养 类蛋白胨 5g 硫代硫酸钠 30g 胆盐1g 蒸馏水 1000ml 碳酸钙 10g将以上成分混合，加热溶解，每管装10ml。在分装时，应经常振摇，不使碳酸钙沉淀。经10磅10min高压灭菌。临用时加碘溶液0.2ml于每支试管中。碘溶液的配制：碘片6g、碘化钾5g、蒸馏水20ml。用途：沙门氏菌增菌培养用。 备用：本培养基不必校正。常用细菌培养基（2

5、）5.煌绿增菌培养基 含0.5氯化钠和1蛋白胨液（PH为7.0灭菌待用），1：10000煌绿水溶液（先配成1水溶液，灭菌待用，应用时可取出0.1ml加入9.9ml灭菌蒸馏水中）。 取灭菌试管三支，以灭菌吸管吸取1蛋白胨液加入各管中，每管10ml，再分别加入不同量（0.25ml、0.4ml、0.7ml）的1：10000煌绿水溶液。（3）用途：分离肠道中的沙门氏菌。（对大肠杆菌有抑制作用）6亚硒酸盐增菌液 磷酸二氢钠 5.5g 磷酸氢二钠 4.5g 乳糖 4g 亚硒酸钠 将亚硒酸钠溶于200ml水中（不可加热）。再将其它成分混合于800ml水中加热溶解。然后将上述两液混合，充分摇匀，校正PH至7.

6、1，分装试管，每管约10ml。最后用流通蒸气100度，灭菌1520min，备用。用于粪便沙门氏菌的增菌培养。 注：本培养基不宜用高压灭菌，温度过高，会有大量红色沉淀物形成，影响增菌效果；PH必须为7.1，否则会产生棕色沉淀，若PH不符合，可用盐酸和磷酸氢二钠调整，不可使用氢氧化钠；亚硒酸钠或亚硒酸氢钠同样可用；在增菌培养时，粪便按1：10来加，或将棉球、棉棒标本放入增菌液内，充分混匀，于37度温箱中培养，在24h内即接种选择培养基如S.S平板；此培养基贮存时间不宜超过两周。7亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC） 亚硒酸氢钠 4g 磷酸二氢钾 4.5g L胱氨酸0.01g 称取L胱氨酸0.1g（或DL胱

7、氨酸0.2g）加4氢氧化钠1.5ml，使其溶解，再加入蒸馏水8.5ml即成1L胱氨酸氢氧化钠溶液。将除亚硒酸钠和L胱氨酸以外的各成分溶解于900ml蒸馏水中，加热煮沸，待冷却后，以无菌操作与上液混合，最后加入1L胱氨酸氢氧化钠溶液1ml，分装于灭菌瓶中，每瓶100ml，PH应为7.00.1。用于沙门氏菌增菌培养。8.氯化镁孔雀绿增菌液（MM） 甲液 胰蛋白胨5g，氯化钠8g，磷酸二氢钾1.6g，蒸馏水 1000ml 乙液 氯化镁40g，蒸馏水 100ml 丙液 0.4孔雀绿水溶液 分别按上述成分配好后，15磅压力下灭菌20min，备用。用时以无菌操作取甲液100ml，乙液20ml和丙液3ml混

8、合后分装试管，每管5ml。沙门氏菌增菌用。9缓冲蛋白胨水（BP） 蛋白胨10g 磷酸氢二钠（Na2HPO4。12H2O） 9g 将上述成分混合，加热溶解，校正PH为7.2，15磅压力下灭菌20min，临用时以无菌操作分装试管和瓶中。供沙门氏菌前增菌用。10乳酸胆盐发酵管 蛋白胨20g，乳糖10g，猪胆盐5g，0.04溴甲酚紫水溶液25ml，蒸馏水1000ml。（2）制法 将蛋白胨液、乳糖和胆盐加入蒸馏水中，加热溶解，校正PH为7.4，加入溴四酚紫水溶液，分装试管，每管10ml，放入一个小倒管，10磅压力下灭菌15min。大肠菌群乳糖发酵试验用。11糖发酵管培养基 蛋白胨水（PH7.6） 所需的

9、糖类 1.6溴甲酚紫酒精溶液 0.1ml （或0.2溴麝香草酚蓝酒精溶液0.51ml）将所需之糖1g加入100ml蛋白胨液中，加热溶解。再加入1.6溴甲酚紫酒精溶液0.1ml（或0.2溴麝香草酚蓝酒精溶液0.51ml），摇匀。分装于已装有小发酵管的试管内，并对不同的糖类，在其试管壁上粘贴不同颜色的纸条以作标记，如葡萄糖（红色）、乳糖（黄色）、麦芽糖（蓝色）、甘露醇（白色）、蔗糖（黑色）等。高压10磅灭菌20min备用。用途：鉴别肠道细菌用；供细菌发酵试验用。12.血清肉汤 灭菌营养肉汤 无菌血清（马、牛或羊）10ml 取已制备好的营养肉汤，待冷却后，以无菌操作，加入灭菌血清，混匀后，分装于试管

10、。用于营养要求较高的细菌培养。13.厌氧肉肝汤 牛肉 0.5 牛（羊、猪）肝 葡萄糖 0.2 水 4份 小肝块 1/10 1 液体石蜡 适量取除去脂肪及筋膜的牛肉，用绞肉机绞碎，混入切成100g左右的肝块等量，加蒸馏水4份，充分搅拌后，冷浸2024h。煮沸3060min，补足失去的水分，用白布过滤，弃去肉渣，取出肝块。滤液加入蛋白胨液1和氯化钠0.5，加热溶化，以2N氢氧化钠溶液校正PH为7.68.0，加热煮沸。以滤纸或纱布过滤，按量加入葡萄0.2，搅拌，使其溶化。将煮过的肝块洗净，切成小方块，用蒸馏水充分冲洗后，分装于试管中，其量约为分装肉肝汤量的1/10。将滤液分装于含有肝块之试管中，然后

11、再加入适量的液体石蜡覆盖液面，116度高压灭菌3040min。经37度培养2448h，应无菌生长。用途：供一般厌氧菌培养及检验用。细菌培养基的制作（3）（二）固体培养基1营养琼脂培养基 肉水1000ml 琼脂 2030g 取肉水1000ml，加入蛋白胨、氯化钠和琼脂，混合加热，使其完全溶化，校正PH为7.47.6，再加热约30min。使用保温漏斗过滤或待沉淀凝固后，除去底部沉渣。分装于试管或三角瓶中，15磅压力下，灭菌30min。一般的细菌培养，保存菌种均可用。2半固体培养基 肉汤培养基100ml 0.3g 将琼脂加入肉汤培养基中，加热溶化，校正PH为7.6，加热1020min，沉淀。用保温漏

12、斗过滤或待沉淀凝固后，除去底部沉渣。分装深层或U形管，15磅压力下，灭菌30min。菌种保存，观察细菌运动力。3血液琼脂培养基 普通琼脂培养基 脱纤维血液 510ml以无菌操作采取绵羊、牛、马或兔血置于灭菌并盛有玻璃珠的三角瓶内，边加血边不停地摇动玻璃珠直至血纤维分离为止。普通琼脂培养基加热溶解后，待冷至约5560度时，以无菌操作按量加入血液，轻轻摇动均匀，不使产生泡沫，随即分装于灭菌的平皿或试管中，制成血液琼脂平板或血液琼脂斜面。供某些病原菌的分离培养用；观察细菌的溶血现象，作鉴别用；常规移植继代和保存菌种。4沙门氏菌、志贺氏菌属等肠道菌培养基（S.S琼脂） 释类蛋白胨 牛肉膏 5g 10g

13、 15g 胆盐10g 0.5中性红水溶液 4.5ml 柠檬酸钠 1014g 0.1煌绿溶液 0.33ml 8.5g 枸橼酸铁 0.5g除中性红及煌绿溶液外，将各种成分混合，煮沸溶解。校正至PH7.07.2。加入中性红与煌绿溶液，充分混合。再经煮沸，然后冷至55度左右，即可制作平皿培养基。分离培养沙门氏菌及志贺氏菌属等肠道致病菌。备注：煌绿溶液配好后，在10d内用完；此种平皿最多在暗处保存23天，否则会影响检验结果；本培养基不可高压灭菌，或过久地加热；柠橼酸钠、硫代硫酸钠对大肠杆菌有抑制作用。沙门氏菌属细菌，因不发酵乳糖，故所形成的菌落无色泽表现，同时也较透明。如有大肠杆菌属细菌生长，则菌落呈红

14、色，或显红色之中心；除肠道中各种革兰氏阴性杆菌能在此种培养基上生长外，其它细菌均被抑制。5.远滕氏培养基 无糖肉汤（或蛋白胨水）琼脂培养基 100ml 1.0g 5碱性复红酒精溶液 1.0ml 5无水亚硫酸钠溶液 2.55.0ml取无糖肉汤（或蛋白胨水）琼脂培养基，加入1g乳糖。10磅10min高压灭菌，或隔水溶解琼脂后继续煮沸1520min。灭菌后趁热加入5碱性复红酒精溶液1ml，摇动、混合均匀。预先将亚硫酸钠配制成5水溶液，置试管内煮沸、溶解，立即按量加入至上述琼脂培养基内，摇动均匀，直培养基呈淡红色为止。鉴别大肠杆菌与沙门氏菌。6.麦康凯培养基 1.52g 2g 1中性红溶液 0.5ml

15、蒸馏水 纯乳糖将琼脂加于50ml蒸馏水中，加热溶解作为甲液。另将蛋白胨、乳糖、氯化钠、胆盐置于50ml蒸馏水中，在水浴中加热溶解，作为乙液。将甲、乙两液混合矫正PH至7.4，然后用脱脂棉过滤。分装于三角瓶中，每瓶100ml，高压蒸气灭菌15min。待冷至65度时每100ml甲、乙液中加入1中性红溶液0.5ml。摇匀后即可将其倾入无菌平皿内，制成平板待用。分离沙门氏菌及志贺氏菌属细菌时用。此培养基可利用乳糖的发酵来鉴别肠道致病性革兰氏阴性细菌，此原理同S.S琼脂平板，但其对大肠杆菌的抑制作用没有S.S琼脂培养基强。7.三糖铁琼脂 3g 硫酸亚铁 0.2g 酵母浸膏 15g 蛋白释 12g 4酚红

16、溶液 6ml 蔗糖加热溶解，校正PH至7.3，分装试管，高压灭菌12磅1520min；使凝成底层较深的斜面。鉴别大肠杆菌与沙门氏菌，即测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。8.肝汤琼脂 肝浸汁 1000ml 甘油 20ml 20g肝浸汁的制备 取新鲜牛肉肝除去筋膜和脂肪，绞碎，称取500g，加自来水1000ml，于2530度浸泡3h，或于冰箱内过夜。取出摇匀，并间接加温2h（水浴或放高压灭菌器内），纱布过滤，加水补足原量。加入上述各成分加热溶解，校正PH6.97.0，过滤，分装，高压灭菌15磅15min。适用于布氏杆菌的分离培养。初次分离布氏杆菌时，为抑制杂菌生长，可于每

17、1000ml培养基中加0.5ml1灭菌的结晶紫水溶液（使含有二十万分之一的结晶紫）。结晶紫可抑制大多数革兰氏阳性菌的生长，但对布氏杆菌无影响。9巧克力琼脂培养基 普通琼脂培养基100ml，无菌脱纤绵羊血液10ml取已制备好的普通琼脂，加热溶化，待冷至55度左右，以无菌操作加入脱纤血液，混匀后，逐渐加温至85度，使红血球破坏，培养基变成巧克力色，制成斜面或平板，凝固后，放置37度温箱中，经无菌检查后，放入冰箱中，保存备用。此培养基中含有X和V因子，用于嗜血杆菌属细菌的培养。10血清肝汤琼脂 灭菌肝汤琼脂100ml 无菌血清 10ml将灭菌肝汤琼脂加热溶化，加入无菌血清混匀制成平板或斜面。若制作血

18、液肝汤琼脂，可用无菌脱纤血代替血清。培养李氏杆菌用。11马丁氏琼脂 马丁氏蛋白胨液100ml 琼脂2g将上述成分混合，加热溶解，校正PH为7.6，再加热片刻，如有沉渣，必须沉淀好，再用纱布棉花过滤，分装于试管或三角瓶中，15磅压力下灭菌20min，备用。供营养要求高的细菌培养用。12.鸡肉汤琼脂培养基 50鸡肉汤浸液 大豆蛋白胨 牛肉蛋白胨 1g 11.5g 无菌健康鸡血清 5ml 1DPN溶液 1ml除血清、DPN溶液外，将上述成分混合，加热溶解后，调整PH为6.66.8，15磅压力下，灭菌20min。待冷却至50度左右时，以无菌操作加入灭菌的健康鸡血清5ml和灭菌的1DPN（辅酶）溶液1m

19、l，混匀后，倾注平板，等凝固后，放入37度温箱中经无菌检查后，放入冰箱中保存备用。用于嗜血杆菌属细菌的培养。50鸡肉汤浸出液的制备：取610个月龄的健康母鸡肉，除去脂肪、肌膜和结缔组织后，切成小块，每500g鸡肉加蒸馏水1000ml，混合后置冰箱浸泡一夜，次日取出煮沸1h，补足失去的水分，待冷至5055度，用棉花过滤，调整PH为6.66.8，分装于瓶中，在15磅压力下灭菌2030min，保存于冰箱中备用。13.伊红美蓝琼脂 营养琼脂（PH7.4） 2伊红水溶液 2ml 0.5美蓝水溶液先将琼脂和乳糖混合，加热溶解，待冷至60度左右，加入伊红和美蓝溶液，混匀后，倾注平板，凝固后备用。分离肠道致病菌。注：伊红和美蓝在培养基中起指示剂的作用，如大肠杆菌分解乳糖产酸使PH降低，致使伊红和美蓝结合成紫黑色或紫红色，且有金属光。在碱性环境中，伊红和美蓝不能结合，故不分解乳糖的细菌菌落为无色。伊红和美蓝溶液须在10磅压力下灭菌15min后备用。14高盐察氏培养基 硝酸钠 硫酸镁 氯化钾 0.01g 60g 30g 20g将上述成分混合，加热溶解，分装后，115度高压灭菌30min，必要时，可酌量增加琼脂。分离霉菌用。15沙氏培