病毒进入细胞的几种感染形式Word文件下载.docx

1、一般为有尾噬菌体的侵入方式.通过尾部收缩将衣壳内的DNA基因组注入宿主细胞内.细胞内吞：植物病毒的罕见侵入方式.经细胞膜内陷形成吞噬泡，使病毒粒子进入细胞质中.膜融合：有包膜病毒侵入过程中病毒包膜与细胞膜融合.直接侵入：年夜致可分为三种类型部份病毒粒子直接侵入宿主细胞，其机理不明.病毒与细胞膜概况受体结合后，由细胞概况的酶类帮手病毒粒体释放核酸进入细胞质中，病毒衣壳仍然留在细胞膜外，将病毒侵入和脱壳融为一体.其他特殊方式.植物病毒通过存在于植物细胞壁上的小伤口或天然的外壁孔侵入，或植物细胞之间的胞间连丝侵入细胞，也可通过介体的口器、吸器等侵入细胞.病毒的侵入噬菌体1952年证明DNA是遗传物质

2、的一个有利的证据就是赫尔希（Hershey）等用同位素磷-32标识表记标帜T噬菌体的核酸，用硫-35标识表记标帜它的卵白质，用这种被标识表记标帜的病毒来感染不带任何同位素的年夜肠杆菌.结果证明含硫-35的卵白完全留在细菌的外面，磷-32标识表记标帜的核酸被注入细菌体内了.当T4尾部像肌肉那样收缩时，外壳里面的DNA就被挤进细胞体内.它的DNA分子相当长，约50，000 纳米，粗2.4纳米，而尾鞘中心的管子直径不外2.5-3.0纳米.这样长的DNA要通过这样细的管子完全完全细菌体内看起来也不是件容易的事，可是T4却能在1分钟内就完成任务.早期人们相信进入体内的只是DNA，不含任何卵白质，但最近工

3、作证明，有些壳内最里层的卵白质也随着DNA一起进入细菌，这少量卵白可能在以后的复制过程中起重要作用.植物病毒进入寄主细胞就采用另外更简便的方法了.当某种外来颗粒与植物细胞接触时，细胞的一种自然反应是把颗粒包进去，发生吞噬现象.某些植物病毒恰恰利用了这种细胞的天性进入细胞.植物细胞与植物细胞的显然分歧点之一在于植物细胞有一个由纤维素组成的外壁，可以阻止很多工具进入细胞.假若细胞有了轻微的伤口，则病毒可以从伤口进入.植物的细胞壁也其实不是无缝可入，在坚硬的纤维素结构中分散有微小的管状突起，叫做外壁连丝，直接与外界沟通.有人认为植物病毒是经外壁连丝入侵的.在自然界，植物病毒的更重要的入侵方式是媒介昆

4、虫在植物上取食时，把病毒直接注入植物体内.把植物细胞的外壁用果胶酶，纤维素酶处置后只剩细胞质膜，叫做原生质球.如用TMV来侵染烟的原生质球，发现细胞也是利用吞噬把病毒包进细胞内的.有外膜的病毒进入寄主细胞内的方式就更为复杂了.人们发现有些病毒如麻疹病毒，在侵染寄主细胞体外培养时，病毒能使细胞发生融合，形成所谓的多核的合胞体.又如当人的和老鼠的组织培养细胞在有仙台病毒存在时也会发生细胞融合现象，形成既含有人细胞核，也含有老鼠细胞核的多核细胞.原来这些病毒的外膜能够与寄主细胞的细胞质膜融合，从而引起细胞的融合.在细胞融合的同时也就把病毒颗粒中的核卵白芯即核衣壳释放到寄主细胞内.综观病毒进入寄主细胞

5、的方式不难看出，只将核酸注入细胞内的方式不外是某些噬菌体所特有的方式.对植物或植物病毒说来更普遍的方式是整个病毒粒子被细胞吞噬.显然整个粒子被吞噬是有好处的，因为病毒的遗传物质核酸，在细胞内找到合适的复制场所前，可以被外壳卵白质呵护而不被高等生物内多种多样的核酸酶所降解破坏-细胞对病毒的内吞作用细胞膜作为细胞的限制性膜，其作用在于摄入营养物质和排出代谢废物，并维持一个相对恒定的内环境.细胞膜是一种半透性膜，水、气体和小的疏水性分子例如乙醇能自由穿过脂质双层，但年夜大都代谢物，包括葡萄糖、 ATP 、核苷酸、氨基酸和卵白质，以及某些离子（例如 Ca2+ 、 H+ 、 K+ 、 Na+ ）都不能穿

6、过细胞膜.这些物质通过特定的转运方式进入细胞.离子、糖类和氨基酸一般通过整合膜卵白的转运进入细胞，而卵白质和年夜颗粒（例如一些病毒和细菌）则通过胞吞作用进入细胞.细胞外液中的某些分子（配体）可以通过受体介导的胞吞作用被选择性摄入细胞.在受体介导的胞吞过程中，配体首先与集中于有被小窝中的受体结合；或先与分散在细胞膜概况上的受体结合，再以受体配体复合体形式迅速向有被小窝内集中.有被小窝内概况含有包容素，其总面积可达细胞概况积的 2% 以上.随着受体配体复合体的积累，有被小窝逐渐内陷，最后脱离胞膜，形成有被小泡；随后有被小泡脱去包容素.包容素回到细胞膜，进行重复利用；而脱去包容素的囊泡与早期内吞泡（

7、 endosome ）融合.早期内吞泡膜中的质子泵将质子转运到内吞泡的内部，因而早期内吞泡呈酸性.在内吞泡的酸性条件下，配体与其受体解离，受体通过内吞泡以出芽的方式形成的转运囊泡向细胞膜扩散，与细胞膜融合后进行重新利用，此即受体循环.早期内吞泡的内容物随即被转运到核附近，形成晚期内吞泡.晚期内吞泡与溶酶体融合，其中的配体被酶降解或被释放而在细胞内发挥作用.有时整个配体受体复合体都达到溶酶体而被降解.对通过受体介导的胞吞作用这种方式侵入宿主细胞的病毒而言，尽管具体细节有所分歧，但年夜致与一般的受体介导的胞吞过程类似.分歧病毒侵入细胞的具体机制将在下文予以讨论.为了维持细胞的完整性以及细胞内的分歧

8、功能分区，其它膜性结构与细胞膜的融合必需受到严密的调控，这一般由某些特定的卵白通过特异性的机制介导.首先，进行融合的膜性结构与细胞膜必需非常接近.这个过程由两者的整合卵白的相互作用介导，其中膜性结构上的整合卵白称为靶卵白，而细胞膜上的整合卵白则称为锚定卵白.随后，膜性结构需要与细胞膜变得更近，两者之间的距离应当在 1.5 nm 之内.为了达到这么短的距离，必需先除去膜概况的水分子，这是一个耗能过程.在哺乳植物细胞中，由一种包括多个亚单元组成的复合体为该耗能过程提供能量，这种复合体被称为融合卵白机器，其单个亚单元缺乏融合活性.靶卵白和锚定卵白形成复合体后，募集其它一些能招致膜融合的卵白，从而完成

9、膜性结构与细胞膜的融合.在哺乳植物细胞中，这些卵白被称为 N-ethylmaleimide 敏感性融合卵白（ N-ethylmaleimide sensitive fusion protein ， NSF ）和可溶性 NSF 附着卵白（ Snaps ）.因而，靶卵白和锚定卵白又被称为 Snap 受体或 Snares .融合完成后，复合体发生解离，直到下一次需要时又重新进行装配.细胞就是通过融合卵白机器的装配和解离而对细胞膜的融合进行所调节.有包膜病毒的包膜与细胞膜的融合是病毒核酸进入宿主细胞的第一步，这种融合过程可以发生在细胞膜，也可以发生在内吞泡膜.在膜的融合过程中，融合卵白的作用是形成一个

10、称为融合孔的开口.在病毒感染的细胞中能发生年夜量病毒，病毒融合卵白不需被回收，而细胞融合卵白的量则少很多，必需被回收利用.年夜大都情况下，单个病毒融合卵白就足以介导膜融合反应，这比细胞的融合卵白介导的融合反应要简单一些.病毒上的配体与细胞受体结合后，病毒包膜和细胞膜达到密切接触.随后，病毒融合卵白催化并在一起的病毒包膜和细胞膜进行融合.病毒介导的膜融合必需受到密切调节，防止病毒颗粒聚集并确保膜融合发生在正确的细胞功能区.例如，有的病毒融合卵白只有在与另一些整合膜卵白相互作用后，才华具备融合能力；有的病毒融合卵白需要在酸性环境下才华发生构象改变，从而流露出融合区.另外，对某些病毒融合卵白而言，则

11、是通过调节对其前体的剪切来调控其活性.在这种情况下，病毒在达到合适的细胞部位之前，其融合能力将受到抑制；这是由于如果融合卵白在此之前就被完全剪切的话，那么转运通路中存在的弱酸性条件将可能诱导发生异常的融合反应.有时，还可以通过剪切发生亚稳态的病毒糖卵白，在条件合适时即能进行融合活性所需的构象改变.酸催化病毒与细胞膜的融合些有包膜的病毒通过受体介导的内吞作用来完成病毒包膜与细胞膜的融合，其中研究得最透彻的例子就是流感病毒.病毒首先通过 HA 糖卵白与含唾液酸的受体结合，随后病毒受体复合体通过包容素（ clathrin ）依赖的受体介导的胞吞通路而内化.在晚期内吞泡（ pH 值约为 0.5 ）中，

12、 HA 在酸性条件的催化下发生构象重排并流露出融合肽，随后病毒和内吞泡膜融合，并将病毒核卵白 （vRNP ）释放入胞质.流感病毒颗粒概况的 HA 是一个由三个亚单元组成的同三聚体，每个亚单元都包括两个由双硫键连接在一起的多肽 HA1 和 HA2 .这两种多肽是在 HA 的前体 HA0 被转运到细胞膜上时，通过卵白水解作用发生的. HA 三聚体可分为杆状的基底部和球状的头部两部份，基底部由 3 个 HA2 肽链螺旋环绕纠缠而成；头部较膨年夜，主要由 HA1 肽链组成.流感病毒的受体结合部位呈浅口袋状，位于 HA 三聚体的头部.融合肽位于 HA2 的氨基末端，埋藏在三聚体杆状结构的交界处，其序列为

13、 N-Gly-Leu-Phe-Gly-Ala-Ile-Ala-Gly-Phe-Ile-Glu- Gly-Gly- .对流感病毒天然状态的 HA 的和酸性条件下的 HA 的晶体结构的比力研究标明，低 pH 值能诱导 HA 发生明显的构象改变.在天然 HA 中， HA2 的第 76 126 位氨基酸形成一个较年夜的 a - 螺旋，第 56 75 位氨基酸形成半环状结构，而第 33-55 位氨基酸则形成另外一个较小的 a - 螺旋.当 pH 值降至 5.0 6.0 时， HA2 的空间构型发生改变，第 40 105 位氨基酸形成一个年夜的 a - 螺旋，并向前推进约 100 .这就使得原来藏在 HA

14、 卵白三维结构内部的融合肽流露，并靠近细胞膜.移位后的融合肽可拔出细胞膜内，进而介导病毒包膜与内吞泡的融合.HA0 水解为 HA1 和 HA2 两条多肽链是低 pH 值诱导 HA 卵白构象发生改变，从而流露出融合肽进行融合的先决条件. HA0 虽然能识别宿主细胞概况的受体，但不能与宿主细胞膜发生融合，故而不具有感染性. 将流感病毒的 HA 与 HIV-1 和 Moloney 鼠白血病病毒等逆转录病毒的 Env 卵白进行比力时可以发现，尽管这些病毒与细胞膜的融合机制存在着不同，但它们的结构却具有明显的相似性.在这几种病毒中，融合肽都位于三个肽链环绕纠缠而成的螺旋的末端.根据这些病毒的研究结果，可

15、以年夜致得出病毒包膜中具有融合功能的卵白的一些普遍特征：（ 1 ）含有一个年夜的 a - 螺旋，（ 2 ）含有七个疏水性的氨基酸重复序列，（ 3 ）具有经过特征性环绕纠缠而成的肽链螺旋，且该螺旋与氨基真个融合肽相邻接.无包膜病毒侵入宿主细胞的过程（一）通过破坏内吞泡膜腺病毒感染宿主细胞时，首先通过纤维卵白羧基真个结构域与其受体结合，继而，五邻体卵白基座区中的 RGD 基团与另一种受体整合素 a v b 3 和 a v b 5 相互作用.对年夜大都腺病毒血清型而言，这种作用是随后病毒通过受体介导的内吞作用完成内化所需的.病毒借助整合素进行细胞内吞的过程需要激活磷脂酰肌醇 -3-OH 激酶 （ph

16、osphatidylinositol-3-OH kinase, PI3K） ， PI3K 再通过激活 Ras 和 Rho 信号转导系统，使细胞骨架发生改变来完成病毒的内化.在腺病毒通过内吞泡的形式从细胞概况向核膜转运的过程中，它经过一系列步伐来完成去包被.在这个过程中，结构卵白（如纤维卵白、卵白 IIIa 和 VIII 等）从衣壳中依次解离出来.卵白 VI 在酸性的内吞泡中被降解，这可能是由病毒卵白酶 L3/p23 完成的.该卵白酶位于病毒颗粒的核心，在胞外的氧化性环境中没有活性.在进入内吞泡的还原性环境后，该卵白酶被激活.而且，五邻体基座区与整合素受体的相互作用能招致五邻体卵白构象的改变，流

17、露出卵白 VI 上的 L3/p23 水解位点.在内吞泡酸化后，酸性环境促使五邻体卵白基座区及卵白 IX 也释放出来.五邻体卵白基座区能介导内吞泡膜的溶解，并将残余的病毒释放入胞质.除病毒 DNA 、核心卵白和少量的六邻体卵白外，已失去年夜部份成份的衣壳被锚定在核孔复合体上.随后核卵白被释放入核，病毒开始转录（图 3-4 ）.腺病毒进入细胞的整个过程，即从开始胞吞到 DNA 释放入核，在 370C 时约需 30 分钟.在此期间，病毒进行了一系列必需的改变.在这些改变中，一些由内吞泡的酸性环境诱导，一些由病毒卵白酶的作用引起，而另外一些改变例如纤维卵白的释放则可能是由于衣壳与受体的相互作用所致.腺

18、病毒通过利用五邻体卵白基座区这种酸激活的膜水解卵白破坏内吞泡膜的方式来通过细胞膜.（ 二 ） 通过在细胞膜上形成孔小RNA 病毒利用与腺病毒分歧的机制来通过细胞膜.脊髓灰质炎病毒与其免疫球卵白样受体 PVR 的相互作用使该病毒颗粒失去位于病毒内部的衣壳卵白 VP4 ，并使衣壳卵白 VP1 中通常位于病毒内部的的氨基末端外在化.改变后的脊髓灰质炎病毒颗粒具有疏水性，而且与细胞膜的亲和力增加. VP1 的亲脂性氨基末端流露后拔出细胞膜，形成一个孔，将病毒 RNA 释放到胞质中.目前尚不清楚脊髓灰质炎病毒 RNA 的释放发生在细胞膜还是在内吞泡中. Bafilomycin A1 可以抑制质子转运到囊

19、泡中，因而能阻断内吞泡的酸化.然而，这种药物对脊髓灰质炎病毒的感染没有影响.相反，这种药物能完全抑制穿透酸化的内吞泡膜而释放到胞质中的病毒对细胞的感染，例如流感病毒、西门利克森林病毒和水疱性口炎病毒等.另外，脊髓灰质炎病毒与其抗体形成的复合体能与表达 Fc 受体的细胞结合，但不能感染这些细胞. Fc 受体能被胞吞，因此脊髓灰质炎病毒与 PVR 的相互作用是诱导招致病毒去包被的构象改变所需的.（ 三 ） 通过溶酶体的作用年夜大都通过受体介导的胞吞作用进入细胞的病毒在囊泡达到溶酶体之前就已经释放到胞质中了.这种现象其实不奇怪，因为溶酶体中含有可降解病毒颗粒的卵白酶和核酸酶.然而，呼肠病毒科家族成员

20、却能够达到溶酶体并利用这些卵白酶和核酸酶来脱去其衣壳.呼肠病毒是一种二十面对称的双链 RNA 病毒，其基因组分为 10 个节段.病毒衣壳是一种双层结构，由 8 种分歧结构卵白组成.呼肠病毒通过卵白 s 1 与受体结合，并通过胞吞作用被内化入宿主细胞.呼肠病毒对 Bafilomycin A1 敏感，标明这些病毒需要内吞泡的酸化来进入细胞.酸性环境能激活溶酶体中的某些卵白酶，作用于病毒卵白.例如，病毒卵白被糜卵白酶消化，丧失外壳卵白 s 3 ，且 m IC 在内卵白的作用下裂解，形成具有感染性的亚病毒颗粒.这些亚病毒颗粒能穿透溶酶体膜并进入胞质，随后释放出病毒核心，启动病毒 mRNA 的合成.亚病

21、毒颗粒的感染性对 Bafilomycin A1 不敏感，说明亚病毒颗粒进入胞质的过程其实不依赖于 pH 值的下降.（ 四 ） 通过 caveolae年夜大都猴病毒 40（simian virus 40,SV40 ）颗粒在与其受体结合后，成为无包被的小囊泡，其中约 1/3 进入内质网.这类小囊泡可能就是 caveolae . caveolae 是由细胞膜收缩形成，移至内质网并与其融合的膜性囊泡. caveolae 含有一种标识表记标帜卵白，称为 caveolin .根据这种假说， SV40 可能通过一种从细胞概况至内质网的新通路来侵入细胞.如果 SV40 通过内质网进入细胞能发生有效的感染，那么病毒颗粒如何达到其复制位点细胞核呢？病毒颗粒位于内质网中，不成能与胞质输入卵白作用或达到核孔复合体的胞质侧.因此， SV40 可能通过一种特异性机制穿过内质网膜进入胞质，并通过核输入机制来进入细胞核.也有人认为，病毒可能通过核内膜直接进入核基质，但这种观点还未能获得证实.