现代药物分析重点Word格式.docx

1、提纯步骤繁 琐。 【生物样品处 理方法】 1.不稳定样品 的预处理（氧化 水解） （1）易被氧化药 物： a.样品中加入 抗氧剂（VitC+EDTA、半胱氨酸、2-巯基乙醇） b.将不稳定的 药物转化为 稳定的衍生 物 （2）易水解药物 预处理： 酯酶抑制剂 2.常规方法： （1）蛋白质沉淀 法： 加入甲醇、乙腈等有机 溶剂，同时采用超 速离心机；加入中性盐 沉淀； （2）超滤法： 操作条件温 和，没有相态变 化，能量消耗小 ，破坏有效成 分可能小 需要血量少 （3）液液萃取法 ： 一次提取可 取出大量杂 质，根据不同的 有机溶剂，可具有高选 择性 （4）SPE（固相萃取技 术）特点： 基质效

2、应小 （5）直接进样技 术与柱切换 技术在线处 理和分离（样品处理柱 和样品分析 柱） （6）衍生化 可以提高稳 定性 检测特性等 问题 （7）离子交换树 脂： 具有高选择 性，但较麻烦适 用于高极性 ，可电离的物 质。 （8）其他（顶空 GC、制备 HPL C、微透析技术 ） 二、体内药物分 析评价指标 、合格标准 1.方法特异性 ： 特异性是指 样品中存在 干扰成分的 情况下，分析方法专 一的测定分 析物的能力 ，注意在待测 物出峰位置 ，空白基质应 无干扰 2.标准曲线与 线性范围： 定量范围应 查文献，结合预实验 结果确定；至少 6 个点 线性大于 0 .99 每个浓度点 和加入浓度

3、的差异，L20% 其他15% 3.方法定量限 LOQ： 满足 35 个消除半 衰期时样品 中的药物浓 度或能检测 出 Cmax 的 1/1020 时的药 物浓度 4.精密度与准 确度；三个浓度点 每个浓度点 五份样 批内批间精 密度低20%中高 15% 准确度不单 独考察 5.提取回收率 ； 中低 3 个浓 度（80%、100%、120%）的提取回收 率,其结果应当 精密和可重 现. 应考察高中 低三个浓度 的提取回收 率 = 样品处理过 程后/纯标准品 * 100% 6.介质效应（ME）； 用 LC-MS 测定样 品时，由于内源性 干扰物的存 在，待测物在离 子化过程中 发生离子增 强或离子

4、抑 制的作用.使测物响应 值不稳定在 85%-115%范围内可认 为没有介质 效应 措施： （1）选择合适样 品前处理方 法，LLE 和 S PE 介质效 应相对较少 （2）改变待测物 的色谱分离 条件，优化色谱条 件使内源性 物质与待测 物分开 （3）采用小进样 量 （4）利用液相色 谱电解质效 应，加入有机酸 或碱，促进离子化 （5）使用较低流 速，降低了待测 成分与基质 成分在离子 源的竞争 （6）改用不同的 离子源，考虑 APC I 和 APP A，ESI 对基 质的敏感性 更高 7.样品稳定性 ： 室温放置 8 h 时间、反复冻融、长期冰冻、进样器放置 89h 三、代谢物研究 的制备

5、方法 1.体外方法： 肝微粒体温 孵法、肝细胞温孵 法、基因重组酶 温孵法、肝组织切片 法、离体肝灌流 法肠道菌群 体外温孵法 （甘草皂苷） 2.体内方法： 胆汁 尿液 粪便 血液 其他（乳汁 肝匀浆等） 蛋白质组学 一、蛋白质组学 的定义和特 点 蛋白质组学是指在大 规模水平上 研究蛋白质 的特征，包括蛋白质 的表达水平 ，翻译后的修 饰，蛋白与蛋白 相互作用等 ，由此获得蛋 白质水平上 的关于疾病 发生，细胞代谢等 过程的整体 而全面的认 识。 蛋白质组学 从蛋白质的 水平上，对蛋白质进 行定量，动态、整体的研究 、阐明生物体 全部蛋白质 ，表达模式及 功能模式 【特点】 蛋白质组学 是动

6、态的，表现出多样 性。 1）从 mRNA 表达水平并 不能预测蛋 白质表达 2）蛋白质动态 修饰和加工 并非必须来 自同一基因 序列 3）蛋白质组动 态反映生物 系统所处的 状态 4）蛋白质组学 较之前的基 因组学对于 生命现象的 解释更直接 、更准确。 二、蛋白质组学 的定量方法 1.利用荧光染 料进行定量 的蛋白质组 分析技术。 适用于检测 蛋自质的荧 光染料有两 类: 1）用于蛋白质 荧光染色，如 Sypr o Ruby 和 RuBS 2） 用于蛋白质 的荧光标记 ，如 Cy2,Cy3 和 C y5,可进行荧光 双向差示凝 胶电泳。 2 运用质谱 进行定量的 蛋白质组分 析技术： a 稳

7、定同位 素代谢标记 技术 b 同位素亲 和标签技术 主要是使用 一种称为 I CAT 的化 学试剂。 其结构由三 部分组成： 第一 亲和标签（生物素），用来分离经 标记后的多 肽；第二 连接子，用来整合稳 定的同位素 ；第三 活性基团，用来特异结 合巯基。 三、二维电泳 第一相等电 聚焦电泳分 离 第二相按质 量分离 固相 PH 梯 度等电聚焦 优点： 克服了载体 两性电解质 阳极漂移，可精确设定 PH 准备步骤： 样品准备第一维 固相 PH 梯 度第二维 SD S-PAGE染色考马斯 亮蓝图像分析，自动扫描 优点： 可分离 10 100 kD 范围内蛋白 质；高灵敏度和 高分辨率；便于计算机

8、 进行图像分 析处理；与质谱分析 匹配 缺点： 极酸、极碱性蛋白 质，疏水性蛋白 质，极大蛋白质 、极小蛋白质 及低丰度蛋 白质用此种 技术难于有 效分离。 胶内酶解过 程费时、费力，难于与质谱 联用实现自 动化 创新药物研 发中的难点 一、杂质分析 杂质分类： 无机杂质（试剂、配位体、催化剂、重金属、其他金属、无机盐、活性炭）、有机杂质（起始原料、副产物、中间体、降解产物、试剂、配位体、催化剂、几何异构立 体异构） 残留杂质 已鉴定杂质 ： 已确证了结 构特征的杂 质 特定杂质： 在质量标准 中规定杂质 并有自己限 度标准的杂 质已鉴定或 未鉴定 潜在杂质： 按照理论推 测在生产或 储藏过程

9、中 可能产生的 杂质，实际生产中 不一定存在 杂质谱： 存在于药品 中的杂质组 成或模式 杂质谱分析 的基本途径 ： 挥发性杂质 残留溶剂HS-GC 其他 GC-MS 有机 RP-HPLC不同检测器 /梯度洗脱 互补方法HPEC or HPTLC or HPGPC 无机杂质 ICP-MS or 离子色 谱 二、手型 （一）不同构型的 立体异构体 生物活性不 同 1.药物的生物 活性完全或 主要由其中 的一个对应 体产生 s-萘普生 2.两个对应体 具有完全相 反的生物活 性 哌西那朵 3.一个对映体 有严重的毒 副作用 四咪唑 4.两个对应体 的生物活性 不同，但合并用药 有利 奈必洛尔 5.

10、两个对应体 具有完全相 同的生物活 性 普罗帕酮 （二） 手性药物研 究 1.原料药制备 工艺研究 结构确证 2.选择制剂的 剂型、处方与工艺 3.质量研究 4.制订质量标 准 5.稳定性研究 （三）绝对构型（或通过衍生 物的构型）确证方法 1.比旋度测定 4.旋光色散（ORD） 2.手性柱色谱 （Chira l HPLC/GC） 5.圆二色谱（CD） 3.核磁共振 6.单晶 X-衍射（XRSD） 三、限度 报告限度： 超出此限度 的杂质均应 在检测报告 中报告，并应报告具 体的检测数 据。 鉴定限度： 超出此限度 的杂质均应 进行定性分 析，确定其化学 结构 质控限度： 质量标准中 一般允许

11、的 杂质限度，如制订限度 高于此限度 ，则应有充分 的依据。 原材料的杂 质限度 最大日计量 报告限度 鉴定浓度 质控浓度 2g 0.05% 0.1%或 1.0mg（取最小值） 0.15%或 1.0mg 2g 0.03% 0.05% 0.05% 报告限度 最大日剂量 小于等于 1 g 大于 1g 限度 0.1% 0.05% 鉴定限度 最大日剂量 小于 1mg 110mg 大于 10m g2g 大于 2g 限度 1.0%或 5ug（取最小值） 0.5%或 20ug （取最小值） 0.2%或 2mg（取最小值） 0.10% 质控限度 最大日剂量 小于 10m 10100mg 大于 100 mg2g

12、 大于等于 2 g限度 1.0%或 50ug （取最小值） 0.5% 或 200u g（取最小值） 0.2%或 3mg（取最小值） 0.15% 计算药物分 析 析 模式识别： 识别出某个 样本与哪一 类供模仿用 的样本相同 或相似。 即对表征事 物或现象的 各种形式的 信息（数值的，文字的，逻辑关系的 ）进行处理与 分析，以对其进行 描述、辨认、分类和解释 ，是信息科学 和人工智能 的重要组成 部分。 借助数学的 方法和计算 机技术揭示 事物或现象 的隐含性质 和内部规律 。 基本功能是 对样本分类 或辨别 聚类： 是研究物以类聚的一种统计 方法，是数据挖掘 、信息分析中 的一个活跃 研究领域

13、。 聚类分析的 目的在于辨 别在某些特 性上相似的 事物，并按这些特 性将样本划 分成若干类 （群）。 同一类内的 事物具有高 度的同质性 ，而不同类的 事物则有高 度的异质性 。 聚类分析可 归属为无监 督的模式识 别方法。 系统聚类法 ： 先将 n 个样 本各自看成 一类，然后规定样 本之间的距 离和类与类 之间的距离 ，开始各样本 自成一类，这时类之间 的距离与样 本之间的距 离相同，然后选择距 离最小的两 类合并成新 类，并计算该新 类与其他类 之间的距离 ，接着再将距 离最近的两 类合并，重复此过程 ，直至所有的 样本都聚成 一类为止。 类与类之间 的距离也有 多种的定义 方法，不同

14、的定义 方法就产生 了不同的系 统聚类方法 ；如最短距离 法、最长距离法 、中间距离法 、重心类、平均法、利差平方和 法、可变类平均 法、可交法等；步骤基本上 是一样的，不同是类与 类之间的距 离有不同的 定义方法。 主成分分析 ： 通过数学交 换处理，从原始测量 数据中抽提 出能够反映 其内在数据 结构和规律 的新的综合 变量，用以简化数 据复杂性，描述样本，建立简化数 学模型，以便对原始 数据的进一 步分析。 映射技术： 是将高维空 间中的点集 在最优的意 义下变换成 为低维空间 中点集的一 种数学方法 ，即将较多数 变量（高维）变换为少数 几个变量（低维），而这些较少 的新变量能 够最大

15、限度 地表征原多 个变量的信 息。 人工神经网 络： 一种模仿生 物神经系统 （BNN）信息处理方 式的技术。 人脑中存在 着由巨量神 经细胞结合 而成的神经 网络，它构成了大 脑信息处理 的物质基础 。 生物神经系 统信息处理 的特点： 高度并行性 ； 信息的处理 和存储合二 为一 并行处理： 多进程同时 处理（以空间复杂 性降低时间 复杂性） 串行处理： 单进程顺序 处理 名解： 数学分离、聚类、特征、空间、主成分、降维方法、特征提取、类距离、类间距离 论述题： 解释、比较、综合几个方 法 距离公式（基本公式） MP 神经元输入 计算公式（基本公式） 药物基因组 学 一、列举 6 类代 表

16、性基因多 态性检测技 术 1.基于实时荧 光定量 PC R 的 SNP 检测技术（荧光标记） 2.基于核酸入 侵反应的 S NP 检测技 术 3.基于生物质 谱的 SNP 检测技术（MALDI -TOF-MS） 4.基于基因芯 片的 SNP 检测技术 5.基于生物发 光焦测序的 SNP 检测 6.新一代大规 模测序技术 二、简述焦测序 技术原理及 其应用 四个酶 DNA Polym erase 、ATP sulfu rylas e、Lucif erase 、Apyra se 1.目标 DNA 单链与链霉 素亲和素相 结合（此链霉亲和 素包裹在磁 纳米之外） 2.借助各种分 离技术（如磁场）经多

17、步操作 将干扰物分 离，使溶液中仅 剩 DNA 单 链 3.利用聚合酶 在引物后进 行合成，加入四种原 料的其中一 种（ATGC）若可以发生 互补配对，则聚合酶作 用时释放焦 磷酸 4.焦磷酸在硫 酸化酶的作 用下形成产 物，再经荧光素 酶产生荧光 1 个当量 P P 对应一个 当量荧光，如此循环 2 .3 直到 整个测序完 毕 5.若 NTP 与 DNA 不反 应，则会被降解 酶降解以排 除干扰 应用： 1.通过人工方 式将一个或 多个基因引 入基因组转基因技术 2.序列标签、定量性能 3.诊断 21 三 体综合症、唐氏综合症 4.诊断大肠癌 ，粪便中脱落 细胞 5.单细胞检测 芯片 PCR

18、 ： 芯片表面将 单细胞捕获 三、概述抗凝药 物氯吡格雷 的个体化给 药注意事项 FDA 对氯 吡咯雷用药 的黑框警告 ： 1.使用氯吡咯 雷前需检查 病人 CYP 2C19 基 因多态性，主要检测 C YP2C1 9*2 和*3 位点 2.CYP2C 19*2 和*3 基因人群 为慢代谢人 群，氯吡咯雷前 体药物转化 速率慢，应增加用药 剂量，从 300m g/d 增加到 6 oomg/d 3.在使用氯吡 咯雷是需要 避免使用 C YP2C1 9 抑制性药 物，如奥美拉唑 代谢组学 1.代谢组： 生物体内参 与物质传递 、能量代谢和 信息传导等 代谢调控的 全体小分子 物质。 2.代谢组学：

19、 通过组群指 标分析，定量研究生 物体在内、外因素的遗 传变异、疾病侵袭、药物干预、环境变化等 作用下，所含的内源 性小分子代 谢物种类。 数量变化的 动态规律及 与生理、病理变化的 关联。 3.生物样品选 取与采集（血样、尿样） | 生物样品预 处理与制备 （提取待测物 、去除干扰物 质） （LLE、SPE、SPME、冷冻干燥、加速溶剂萃 取、超声波萃取 ） | 数据采集（目标性数据 ，非目标性数 据）NMR GC/MS LC/MS | 数据处理与 分析： 1.预处理： 原始谱图数据矩阵 2.模式识别与 模型评价： 对高维数据 进行简化和 降维借助现 代化数学模 型在低维空 间从整体上 对样品分组 情况进行归 纳、总结。 3.生物标志物 筛选与鉴定 4.代谢通路分 析与组学间 数据整合 4.代谢组学应 用 A.个体化药物 治疗 B.整体指导下 的中药现代 化研究 C.药物毒性评 价与安全预 警 D.药物创新与 作用机制研 究