常用培养基配方文档格式.docx

1、36 缓冲蛋白胨水（BP）37 氯化镁孔雀绿增菌液（MM） 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB） 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法） 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）41 GN增菌液42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂（BS）44 DHL琼脂45 HE琼脂46 SS琼脂47 WS琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂（EMB） 50三糖铁琼脂（TSI） 51 三糖铁琼脂（换用方法） 52 克氏双糖铁琼脂（KI） 53 克氏双糖铁琼脂（换用方法） 54 葡萄糖半固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE培养基57 Honda氏产毒肉汤58 Elek氏培养基（毒素测定用）59 氯化镁孔雀

2、绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液（小肠结肠炎耶尔森氏菌专用） 69 CIN-1培养基70 嗜盐性试验培养基 01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O） 2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121高压灭菌15min.

3、2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管. 注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于361培养,一般观察23d.迟缓反应需观察1430d.邻硝基酚-D-半乳糖昔（ONPG） 60mg（O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside）0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5） 10mL1%蛋白胨水（PH7.5） 30mL将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,

4、分装于10mm75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于361培养13h和24h观察结果.如果-半乳糖苷酶产生,则于13h变黄色,如无此酶则24h不变色.03 西蒙氏柠檬酸盐培养基氯化钠 5g 硫酸镁（MgSO47H2O） 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g柠檬酸钠 5g琼脂 20g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌15min.放成斜面.挑取少量琼脂培养物接种,于361培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 0

5、4 缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5gpH7.0溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121高压灭菌15min.甲基红（MR）试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于361培养25d,哈夫尼亚菌则应在2225培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于361培养24d.哈夫尼亚菌则应在2225培养.加入6%-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于

6、数分钟内出现红色,如为阴性,应放在361下培养4h再进行观察.柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g加热溶解,分装试管,121高压灭菌15min.放成斜面.用琼脂培养物接种整个斜面,在361培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06 丙二酸钠培养基酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121高压灭菌15min. 用新鲜的琼脂培养物接种,于36

7、1培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07 葡葡糖铵培养基葡萄糖 2g先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌15min,放成斜面.用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于361培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做

8、成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.蛋白胨 2g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10gpH7.2将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121高压灭菌15min,直立凝固备用.从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于361培养.马尿酸钠 1g肉浸液 100mL将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌12120min.试剂:三氯化铁（FeCl36H2O）12g,

9、溶于2%盐酸溶液100mL中即成.用纯培养物接种,于42培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经1015min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120gpH6.87.0加热溶解,校正至pH7.47.6,分装小管,121高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.87.0.用琼脂培养物穿刺接种,放在2225培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果. 酵母浸膏 3gDI-苯

10、丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g） 2g磷酸氢二钠 1g琼脂 12g加热溶解后分装试管,121高压灭菌15min,使成斜面.自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在361培养4h或1824h.滴加10%三氯化铁溶液23滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.葡萄糖 1g1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mLL-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mL除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上

11、面滴加一层液体石蜡,115高压灭菌10min.从琼脂斜面上挑取培养物接种,于361培养1824h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色. 蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.挑取小量培养物接种,在361培养12d,必要时可培养45d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层

12、呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. 硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g加热溶解,校正pH,分装试管,115高压灭菌15min,取出直立候其凝固.挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于361培养12d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基. 蛋白胨 1g磷酸二氢钾 2g0.4%酚红溶液 3mL20%尿素溶液 100mLpH7.20.1将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶

13、.121高压灭菌15min.冷至5055,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.20.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.挑取琼脂培养物接种,在361培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.磷酸二氢钾 0.225g磷酸氢二钠 5.64g0.5%氰化钾溶液 20mLpH7.6将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1:10000）,分装于12mm100mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不

14、加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.1%-萘酚-乙醇溶液.取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.硝酸钾 0.2g蛋白 5g溶解,校正pH,分装试管,每管约5mL,121高压灭菌15min.硝酸盐还原试剂:甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.接种后在36

15、1培养14d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色. 本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.取37（或低于37）培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各23滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.于2min内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结

16、果.3%过氧化氢溶液:临用时配制.挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2mL,观察结果.于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.2%儿茶酚溶液.3%过氧化氢溶液.挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL.静置于室温（20）中3060min,观察结果.阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色.过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.储存液磷酸二氢钾 34g1mol/L氢氧化钠溶液 175mL蒸馏水 825mLpH7.2 先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀

17、释至1000mL.稀释液:取储存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL.分装每瓶100mL或每管10mL,121高压灭菌15min.明胶 2g磷酸氢二钠 4gpH6.2加热溶解,校正pH,121高压灭菌15min.苯酚 10g乳酸（比重1.21） 10g甘油 20g蒸馏水 10mL将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:检验真菌形态时用.绞碎牛肉 500g磷酸氢二钾 2g将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7

18、.47.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121高压灭菌30min.肉浸液肉汤（PH7.4） 1000mL琼脂 1720g加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121高压灭菌30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.绞碎牛肉（或牛心） 1000g15%氢氧化钠溶液 27mL胰蛋白酶 40mL三氯甲烷 1mL氯化钠 10g蒸馏水 2000mL1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80,维持15min.2 加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40.3 加胰蛋白酶,氯仿,在361放置45h,每小时摇动一二次.4 4h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之.若呈红色,

19、则不须再消化,可由温箱取出.5 加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性.6 煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.7 次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸.8 校正pH7.47.6（加15%氢氧化钠溶液约10mL）,加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121高压灭菌20min.此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用.绞碎猪胃 100g绞碎猪血块 100g浓盐酸 10mL1 洗

20、涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.2 用绞肉机将猪血块绞碎.3 将蒸馏水加热至55,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55水浴中24h,时常加以摇动.4 从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜.5 吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.27.4.6 用滤纸过滤,分装烧瓶,121高压灭菌20min.牛心消化汤（PH7.47.6） 1000mL黄豆粉浸液 50mL将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121高压灭菌15min.豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化

21、钠10g,加入蒸馏水100mL.置100水浴内加热1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.pH7.47.6豆粉琼脂 100mL脱纤维羊血（或兔血） 510mL加热溶化琼脂,冷至50,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.牛肉膏 3g 琼脂 1520g将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.27.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121高压灭菌15min.此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为

22、2%.蛋白陈 10g按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121高压灭菌15min.蛋白胨 20g猪胆盐（或牛,羊胆盐） 5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌15min.双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌15min.双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检

23、验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.胰蛋白胨 20g3号胆盐（或混合胆盐） 1.5g乳糖 5g磷酸氢二钾 4g磷酸二氢钾 1.5g将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121高压灭菌15min,最终pH为6.90.2.12H2O） 9g按上述成分配好后以大烧瓶装,121高压灭菌15min.临用时无菌分装每瓶225mL.本培养基供沙门氏菌前增菌用.37 氯化镁孔雀绿增菌液（MM）甲液胰蛋白胨 5g氯化钠 8g磷酸二氢钾 1.6g乙液氯化镁（化学纯） 40g蒸馏水 100mL4.13.3 丙液0.4%孔雀绿水溶液.分别按上述成分配好后,121高压灭菌15min备用.临用时取甲液9

24、0mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可.本培养基亦称Rappaport 10（R10）增菌液.38 四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）基础培养基多胨或眎胨 5g胆盐 1g碳酸钙 10g硫代硫酸钠 30g碘溶液碘 6g碘化钾 5g蒸馏水 20mL将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.121高压灭菌15min备用.临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL.39 四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）基础液:碳酸钙 45g将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70溶解,校正pH至7.00.1,121高压灭菌20min.硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠（Na2S2O35H2O） 5