细胞毒性实验方案Word文档下载推荐.docx

1、实验组为、DOX 成纤维细胞为正常人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和分别采用 , HepG2 L929空白对照组为纯细胞 细胞模型。 SiO2-SS-HA/DOX、 HepG2 人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为采用 1%（w/v） DOXSiO2-SS-HA、，空白对照组为纯细胞。 10%（v/v） 培养基中含有FBS和 、。配制不同浓度的链霉素青霉素双抗 （ / ） SiO2 -SS-HA/DOXSiO2 HA药物载、DOX 体培养基溶液。: HepG2以人肝癌细胞为肿瘤细胞模型 （1）. 12% DMEM 87% 1% 血清培养基的配置：双抗 具体操作步骤： 细胞的复活：温水中，使细胞快速溶解。

2、将悬浮的细将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入 37 无血清培养基， 5mL 胞移至离心管中，加 1000rmp,5min 离心 （每次转移时，将之前的离心管洗涤， 5mL去上清，再加 有血清培养基，转移至培养瓶中。 并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） 将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代：，每次使用一管，避的胰酶分装至小离心管中，0.25% 将 ，冻存于 2mL每个管中 -20 免反复冻融。的酒精放入超净台。将培养液倒入废液 75%将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷 缸，操作完成后， 残留培养基用吸管吸干净， 培养瓶口- 用火烧。加入 2mL 胰酶将瓶底铺满，消化 2-3min ，于显微

3、镜下观察细胞形态，呈 2mL 12% DMEM终止消化，用枪吹打，使细胞悬浮。圆形，即消化完毕，加入 离心。迅速倒掉上清，加入 10mL离心管中， 1000rmp,5min, 将细胞悬浮液移入 6mLDMEM培养基，分装至两个培养瓶中，再各加入 培养箱中培养 48h。，于 37， 5%的 CO22mLDMEM，至 5mL - 。下一次传代步骤同 ： 细胞存活率测定方法（布板，加样） 。同传代步骤 - 并用移液枪来回吸，使液体混合均匀，将所有含给每个离心管中加入定量的培养基， 有细胞的培养基转移到一个 50mL离心管中，最终使液体体积为 30mL。个复孔，每块板设一组空白调零孔，内加培养液，不含

4、96 孔板中每个浓度设计 5 细胞与药物，一组空白对照组，只加培养基和细胞，不加药物。除过空白调零孔，每孔加入， 5% （v/v） CO 2 L 含细胞的培养基。将孔板放入培养箱中，培养箱保持一定的湿度，100 22 小时。温度保持在 37，培养 微升的 0.03g 将谷胱甘肽加入到 10mL培养基，充分溶解，浓度为 0.003g/mL, 取 2 0.003g/mL 谷胱甘肽溶液加入到 10mL的培养基中，将这两个浓度含谷 胱甘肽的培养基替换部分原来的培养基， 作为对照，不需要加谷胱甘肽的孔换上 5% （v/v） CO 2，温新鲜培养基，将孔板放入培养箱中，培养箱保持一定的湿度， 小时，具体的

5、加样孔见图一。 2 度保持在 37，培养 的培养基中，分成两份，其中 3mL样品溶到 SiO2 -SS-HA/DOX 1.2mg 将的 的培养基，再将稀释后的含液样的培养基分成两份， 1.5mL 一份里加入 其中一份 SiO2-SS-HA/DOX样 新鲜培养基，依此类推，便得到一个浓度梯度的加入 1.5mL 品。 SiO2-SS-HA 样品的浓度配制方法同上。 的 0.918mg 将 SiO2-SS-HA/DOX的培养基中，剩下的步骤同样品溶到 3mL 。所示。将孔板放入培养箱孔板中的培养基，如图 96 1 将配制好的载体溶液替换原来 37，温度保持在，培养 5%（v/v） CO2中，培养箱保

6、持一定的湿度， 24小时。 5 mg/mL 配制的 溶液，将孔板中的培养更换成 MTTMTT溶液，将孔板放- 入培养箱中，培养箱保持一定的湿度， 5% （v/v） CO 2，温度保持在 37 。培养 4 小时后， 将孔板中的培养基取出， 用 PBS溶液清洗 3 次，然后向每孔加入 100 L 的 DMSO，溶解孔中的甲瓒，采用酶标仪测定，波长设定为 490nm 图 1 药物载体布板示意图 . 以 L929 成纤维细胞为正常细胞模型 :实验组为 SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、 DOX，空白对照组为纯细胞。实验目的为测定药物载体溶液对正常细胞的细胞毒性。培养基的配置：双抗 1

7、% 血清 12% DMEM 87% 将悬浮的细 37将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入 离心胞移至离心管中，加 5mL 无血清培养基， 1000rmp,5min （每次转移时，将之前的离心管洗涤，去上清，再加 5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。 ） ，每次使用一管，避 2mL，冻存于 -20 将 0.25%的胰酶分装至小离心管中， 每个管中 免反复冻融。将培养液倒入废液将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷 75% 培养瓶口缸， 残留培养基用吸管吸干净， 操作完成后， 用火烧。，于显微镜下观察细胞形态，呈圆形，即 2-3min 2mL 加入胰酶将瓶底铺满，消化 终止消化，用枪吹打，使细胞悬浮。

8、消化完毕，加入 2mL 12% DMEM 迅速倒掉上清，加入将细胞悬浮液移入 10mL离心管中， 1000rmp,5min, 培养基，分装至两个培养瓶中，再各加入6mLDMEM 。 48h CO2 5% 37 5mL2mLDMEM，至，于，的培养箱中培养 下一次传代步骤同 - 。 细胞存活率测定方法（布板，加样） ： 同传代步骤 - 。 离心管中，最终使液体体积为 50mL 12mL。有细胞的培养基转移到一个 个复孔，每块板设一组空白调零孔，内加培养液，不含孔板中每个浓度设计 5 96 除过空白调零孔，每孔加入，100 5% （v/v） CO 2 L 含细胞的培养基。将孔板放入培养箱中，培养箱

9、保持一定的湿度， 温度保持在 37 22 ，培养小时。将所有加样的孔换成新鲜培养基， 作为与癌细胞的对照。 将孔板放入培养箱中，培养箱保持一定的湿度， 5%（v/v） CO2，温度保持在 37，培养 2 小时。将 0.4mg 的 SiO2 -SS-HA/DOX样品溶到 1mL的培养基中，分成两份，其中一份里加入 0.5mL 的培养基，再将稀释后的含液样的培养基分成两份， 其中一份加入 0.5mL 新鲜培养基，依此类推，便得到一个浓度梯度的 SiO2-SS-HA/DOX样品。 1mL的培养基中，剩下的步骤同 0.306mg 的 SiO2-SS-HA/DOX样品溶到将 将孔板放入培养箱将配制好的载

10、体溶液替换原来 96 孔板中的培养基，如图 2 ，温度保持在 37，培养中，培养箱保持一定的湿度， 5%（v/v） CO2 小时。24 溶液，将孔板放入培养箱中， MTT配制 5 mg/mL 的溶液，将孔板中的培养更换成 MTT小时后，将孔板中的培培养箱保持一定的湿度， 5% （v/v） CO 2，温度保持在 37 。培养 4 ，溶解孔中的甲瓒，采 DMSOL 的 3 养基取出， 用 PBS溶液清洗次，然后向每孔加入 100 490nm 用酶标仪测定，波长设定为 =（ODtreated -ODblank /OD control -: 细胞存活率细胞存活率采用百分比表示 ODblank ） 为不含药物载体 100%。 ODblank 是只有培养液，没有细胞的培养孔的吸光值， 0Dcontrol 为含药物载体培养孔所测吸光值。含细胞和空白培养基的培养孔中所测吸光值， ODtreated 细胞相对存活率根据吸光值计算。 2 图正常细胞组的药物载体布板示意图专业资料可修改可编辑范文范例 可行性研究报告指导范文