杞菊地黄丸定性检查及含量测定Word格式文档下载.docx

1、 1.2对照品的制备 另取毛蕊花糖苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 1.3对照药材的制备 称取熟地黄浸膏粉0.5 g，按照供试品溶液制备方法，制得熟地黄药材的对照液。 1.4阴性对照液的制备 按处方比例，取除去熟地黄以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g,山茱萸1g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，

2、蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。 1.5薄层色谱法 1.5.1照薄层色谱法中国药典（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙醋冰醋酸（24 : 8 : 1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。 1.5.2薄层色谱照薄层色谱法中国药典（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇（6332）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清

3、晰，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。2.山药（周开放）【性味与归经】味甘，性平。归脾、肺、肾经。【功能与主治】补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。 实验材料：回流装置、冷凝装置、水浴锅、坩埚、烧杯、微量移液管、硅胶G薄层板、吹风机。乙酸乙酯、甲醇、浓氨试液、无水乙醇、10磷钼酸。试验方法2.1供试品溶液的制备 取本品（杞菊地黄丸）粉末5g，加二氯甲烷30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。2.2对照品的制备 另取山药对照药材5g，同法制成对照药材溶液。对照药材加二氯甲烷同法制成对照药材溶液。2.3阴性对照液的制备 按处方比例，取除去山

4、药以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。 1.称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度； 2.取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 3.合并以上两种浓缩液;加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。2.5薄层色谱法试验 照薄层色谱法中国药典（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层

5、板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（9：1：0.5）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10磷钼酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。 3.茯苓（刘保松） 实验器材：50ml圆底烧瓶，冷凝管，蒸发皿，水浴锅，过滤装置，硅胶G薄层板，紫外检测仪，吹风机茯苓对照药材、杞菊地黄丸实验试剂：乙醚，甲醇，甲苯，乙酸乙酯，甲酸，2%香草醛硫酸溶液，乙醇。 3.1供试品溶液制备 取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙醚50ml（量筒），超声处理10分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液蒸干（蒸发皿，水浴锅），残渣加甲醇

6、1ml使溶解（移液管），作为供试品溶液。 3.2对照品药材制备 取茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 3.3阴性对照溶液制备 按处方比例，取除去茯苓以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺茯苓阴性对照液。3.4薄层色谱法试验 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（20 ：5 ：0.5）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液一乙醇（4：1）混合溶液，在105加热至斑点显色清晰（吹风机）。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。或者照薄层色谱法（中国药典20015年版中国

7、药典）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸（24 : 1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 4.泽泻（王金龙）氧化铝柱，水浴锅，蒸发皿，过滤装置，硅胶H薄层板，紫外检测仪，吹风机泽泻对照药材、杞菊地黄丸乙酸乙酯，23-乙酰泽泻醇B对照品，环己烷，乙酸乙酯，5%硅钨酸乙醇。 4.1供试品溶液制备 取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙酸乙酯20 m1（量筒），超声处理30分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液加于氧化铝柱（200-300目，5g

8、，内径为l cm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱（移液管），收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯l ml（移液管）使溶解，作为供试品溶液。 4.2对照品药材制备 取泽泻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 4.3对照品溶液制备 另取23-乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。 4.4阴性对照溶液制备 按处方比例，取除去泽泻以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺泽泻阴性对照液。称取泽泻0.75g、熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1

9、个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 4.5薄层色谱法试验 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯（1 : 1）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以5%硅钨酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰（吹风机）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 5.丹皮（雷铭宇） 仪器：加热回流装置、薄层板、紫外光灯材料：乙酸乙酯、蒸馏水、甲醇、牡丹皮对照药材、乙醚、丙酮、丹皮酚对照品、环己烷、盐酸、三氯化铁、乙醇定性鉴别（TLC法） 5.1 供试品溶液的制备 取本品15g（天平），研碎，加水100ml，加热回流3 0分

10、钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯50ml（50ml量筒）振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干（水浴锅），残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。 5.2对照药材溶液提取 取牡丹皮对照药材1g（天平），研碎，加乙醚40ml，加热回流1 小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮lml（量筒）使溶解，作为供试品溶液。 5.3对照品溶液的制备 取丹皮酚对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。 5.4阴性对照溶液的制备 取处方中除丹皮外的其余药味，称取泽泻0.75g、茯苓0.75g、熟地黄2g和山茱萸1g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度（水浴锅）；取枸杞子0.5g

11、和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 5.5.1薄层条件 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10ul分别点于同一硅胶G 薄层板上，使成条状，以环己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂（层析缸），展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5 %三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。 5.5.2薄层板 硅胶薄层板20200.4,105 ,活化30备用;展开剂:-环乙烷-乙酸已酯-冰醋酸（1010.1）;斑点观察:置紫外灯下（=254）检识定位5.6丹皮酚的含量测定 5.6.1材料与方法 紫外

12、分光光度计、 型电热恒温鼓风干燥箱 、紫外分析仪剂均为99.9%无水乙醇、水为二次蒸馏水 5.6.1.2材料 牡丹皮、丹皮酚对照品 5.6.1.3对照品标准溶液的制备 精确称取丹皮酚对照品0.005g置于 50ml烧杯中，以无水乙醇溶解 转至 100ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，得到 50ug/ml 的丹皮酚对照品溶液 5.6.1.4结果与分析5.6.1.4.1测定波长的选择 以无水乙醇为对照品，在274nm出测的最大波长 5.6.1.4.2线性关系考察 分别吸取对照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml，4ml，置于25ml容量瓶中!，用

13、无水乙醇稀释至刻度摇匀 。以无水乙醇为空白溶液在 274nm 波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标样品浓度为横坐标绘制标准曲线。 5.6.1.4.3丹皮酚含量测定 准确称取牡丹皮粉末 3.000g（分析天平），置于50ml锥形瓶中，加入25ml无水乙醇，60度恒温水浴2h，趁热过滤，置于25ml容量瓶中用无水乙醇溶液定容，作为供试品溶液。量取5份0.1ml牡丹皮供试品溶液分别置于25ml容量瓶中。用无水乙醇定容至刻度，摇匀，以无水乙醇为空白对照，于274nm波长处测定吸光度，测量三次，取平均值。丹皮酚含量测定结果如下表。吸光度检出量ug/ml平均检出量ug/ml丹皮酚含量 6.菊花（邬学良）实验

14、器材：水浴锅，超声提取仪，过滤装置，硅胶H薄层板,聚酰胺薄膜，紫外检测仪、锥形瓶、分析天平、回流装置、蒸发皿、5ml量瓶、25ml棕色量瓶菊花，绿原酸供试品、杞菊地黄丸稀盐酸，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，正丁醇，甲酸，冰醋酸、氯仿实验方法 6.1供试品溶液制备方法 6.1.1取本品杞菊地黄丸（浓缩丸），研细（过一号筛）取约1g，精密称定（分析天平）,置锥形瓶中,精密加人50甲醇50ml,称定重量,加热回流2小时,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取（10ml移液管）续滤液10ml,蒸干残渣加氯仿5ml,浸渍3分钟,弃去氯仿液,残渣挥去氯仿（水浴，蒸发皿）,加水适量使溶解,并转

15、移5ml棕色量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。 6.2对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50甲醇制成每1 ml含绿原酸35g的溶液，即得（10以下保存）。 6.3对照药材溶液制备 另取菊花对照药材粉末1g，同供试品溶液制法制成对照药材溶液。 6.4阴性对照溶液的制备 取处方中除菊花外的其余药味，按上述供试品溶液制备阴性对照溶液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和山茱萸1g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 6.5照薄层色谱法 6.5.1

16、薄层板 薄层板：硅胶板H 乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1：15：2）的上层溶液，乙酸乙酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层溶液，乙酸乙脂:甲酸:水:乙醇（1:1:0.2）上层液，乙酸乙酯-正丁醇-水（4:5:1）的上层溶液 6.5.2薄层板 聚酰胺薄膜板展开剂：36%乙酸吸取上述四种溶液各0.51l，分别点于同一硅胶板上，用展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。7.山茱萸（陈明璐）加热回流装置、高效液相色谱仪、渗漏装置、吹风机、十八烷基硅烷键合硅胶杞菊地黄丸、蒸馏水、乙酸乙酯、甲醇、山茱萸药材、熊

17、果酸对照品、甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸、磷酸、莫诺苷、马钱苷 7.1.供试品溶液的制备 取本品15g ，研碎，加水100ml ，加热回流 30 分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯 50ml 振摇提取，分取乙酸乙酯液， 蒸干，残渣加甲醇 lml 使溶解，作为供试品溶液。 7.2对照药材溶液的制备 取山茱萸对照药材1g，加乙醚 40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯 lml 使溶解，作为对照药材溶液。 7.3样品溶液的制备 另取熊果酸对照品 ，加乙酸乙酯制成每lml 含 lmg的溶液，作为对照品溶液 7.4阴性对照品溶液的制备 按处方比例和制法制备不含山茱萸的阴性样品，制成阴性样

18、品溶液。取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 7.5定性检测 照薄层色谱法（通则0502 ）试验，吸取鉴别（5 ）项下的供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶液各 5l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯 - 冰醋酸（24 : 1） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在 105C 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上， 显相同的紫红色斑点。 7.5山茱萸的含量测定 照高效液相色谱法（通则0512） 测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为

19、填充剂； 以乙腈为流动相A，以0. 3 % 磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；莫诺苷和马钱苷检测波长为240nm，柱温为40C 。理论板数按莫诺苷、马钱苷峰计算均应不低于4000 。时间（分钟）流动相A（）流动相B（）0-55895925-2089220-35820928035-452060804045-556040 7.5.1.对照品溶液的制备 取莫诺苷对照品、马钱苷对照品对照品适量，精密称定，加7 0 % 甲 醇制成每lml中含莫诺苷与马钱苷各20 l的混合溶液，即得。 7.5.2.供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，取约0 .3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加

20、入7 0 % 甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷， 再称定重量， 用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 7.5.3含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定， 即得。 8.枸杞（李帅）水浴锅，离心机，回流装置（圆底烧瓶，冷凝管），抽滤装置（或漏斗），毛细管，层析缸，硅胶G薄层板，紫外检测仪，高相液相色谱仪实验试剂与材料：乙酸乙酯，冰醋酸，氯仿，甲苯，甲醇，甲酸，硫酸乙醇溶液，熊果酸对照品，杞菊地黄丸，枸杞子，山茱萸 薄层层析 8.1.供试品溶液的制备 8.1.1取本品15g ，研碎，加水100ml ，加热回流 30 分钟，放冷

21、，离心，取上清液，用乙酸乙酯 50ml 振摇提取，分取乙酸乙酯液， 蒸干，残渣加甲醇 lml 使溶解，作为供试品溶液。 8.1.2取本品粉末3.5g，加水煮沸，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为供试品溶液。 8.2对照药材溶液的制备 另取枸杞子对照药材 0.5g ，加水50ml，加热回流30 分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯 30ml 振摇提取，分取乙酸乙酯液， 蒸干，残渣加甲醇 lml 使溶解，作为对照药材溶液。 8.3阴性样品溶液的制备 按处方比例和制法制备不含枸杞子的阴性样品，制成阴性样品溶液。取山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回

22、流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 8.4定性检测 8.4.1照薄层色谱法 （通则0502） 试验，吸取上述三种溶液各10l ，分别点于同一硅胶G 薄层板上， 以甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲酸（15 : 2 : 1 ）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。8.4.2吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸（3：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。参考文献：1.2015年中国药典第一部2.中国民族民间医药 2015 年8 月第24 卷第16 期

23、Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2015，Vol. 24，No. 163.第41 卷第12 期2013 年6 月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol. 41 No. 12June. 20134.1邓如伟,冉兰,李颖,张榕. 杞菊地黄颗粒中六味药材的薄层色谱鉴别J. 华西药学杂志,2005,03:264-266.5.李永霞，靳湘，杜霞.高效液相色谱法测定杞菊地黄丸中绿原酸的含量J.中国医院药学杂志.1549-1550.1.杞菊地黄丸中山药的测定 2.杞菊地黄丸中茯苓的测定3.杞菊地黄丸中泽泻的测

24、定4.杞菊地黄丸中菊花的测定5.杞菊地黄丸中枸杞的测定6.杞菊地黄丸中丹皮的测定杞菊地黄丸中山茱萸的测定 读书的好处1、行万里路，读万卷书。2、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。3、读书破万卷，下笔如有神。4、我所学到的任何有价值的知识都是由自学中得来的。达尔文5、少壮不努力，老大徒悲伤。6、黑发不知勤学早，白首方悔读书迟。颜真卿7、宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来。8、读书要三到：心到、眼到、口到9、玉不琢、不成器，人不学、不知义。10、一日无书，百事荒废。陈寿11、书是人类进步的阶梯。12、一日不读口生，一日不写手生。13、我扑在书上，就像饥饿的人扑在面包上。高尔基14、书到用时方恨少、事非经过不知难。陆游15、读一本好书，就如同和一个高尚的人在交谈歌德16、读一切好书，就是和许多高尚的人谈话。笛卡儿17、学习永远不晚。18、少而好学，如日出之阳；壮而好学，如日中之光；志而好学，如炳烛之光。刘向19、学而不思则惘，思而不学则殆。孔子20、读书给人以快乐、给人以光彩、给人以才干。培根