氯化钠细菌内毒素检查方法验证报告文档格式.docx

1、质量部方案起草、组织实施、过程监控、书写报告方案、报告起草，验证实施及操作结果的复核进行验证操作过程监控验证委员会方案、报告审核、批准、验证合格证发放方案、报告审核方案、报告批准；验证合格证发放3. 验证实施时间：2015.10.204. 验证内容根据公司验证管理规程C05-0001的有关规定，对氯化钠细菌内毒素检查方法进行验证。验证内容包涵鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验以及凝胶限度试验，以确认所建立的氯化钠细菌内毒素检查方法可行性、准确性。5. 验证依据5.1. 验证的法规依据药品生产质量管理规范（2010年修订）药品GMP指南质量控制实验室与物料系统中华人民共和国药典2015年版四部6.

2、验证前完成工作检查6.1. 文件资料的检查确认项目认可标准确认方法确认结果是否符合是否验证方案已起草，并经过审核、批准对验证方案进行检查验证方案已完成起草，并按照规定结果验证委员会成员审核，验证委员会组长批准。参与人员已经过验证方案培训检查人员培训签到表已对验证参与人员进行了验证方案的培训，培训签到表作为验证方案附件保存。执行标准符合中华人民共和国药典2015年版四部细菌内毒素检查法检查验证方案是否符合中华人民共和国药典2015年版四部细菌内毒素检查法的要求检查验证方案符合中华人民共和国药典2015年版四部细菌内毒素检查法的要求结 论验证方案已起草，并经审核、批准，并对相关人员进行了培训，且符

3、合相关法规规定要求。检查人： 日期： 复核人：Q A ：6.2. 工作标准品、鲎试剂及细菌内毒检查用水的检查工作标准品应由有资质的单位提供且在有效期内检查工作标准品瓶身由中国食品药品检定研究所提供，且在定值后有效期内。鲎试剂检查鲎试剂瓶身的信息鲎试剂由湛江安度斯生物有限公司提供，有效期至2017年04月。细菌内毒检查用水检查细菌内毒素瓶身的信息细菌内毒素检查用水由湛江安度斯生物有限公司提供，有效期至2018年06月。根据氯化钠细菌内毒素检查方法验证方案D01-5302中既定项目进行确认，所有确认结果均符合规定要求。6.3. 干燥箱的检查干燥箱已进行过检定，且在有效期内检查干燥箱检定合格证由仙桃

4、市检定计量测试所进行检定，检定有效期至2016年03月10日。7. 方法验证7.1. 鲎试剂灵敏度复核试验7.1.1. 试验用鲎试剂、标准品、仪器等信息生产单位：湛江安度斯生物有限公司批号：1505151灵敏度：0.125EU/ml生产日期： 2015.05.15规格：0.1ml/支/细菌内毒素工作标准品中国食品药品检定研究所150601-201580效 价：80EU/支细菌内毒素检查用水/BET水15041307.1.2. 内毒素标准溶液的制备：80EU/ml 10EU/ml 1EU/ml 0.5EU/ml 0.25EU/ml0.5EU/ml 0.25EU/ml 0.125EU/ml 0.0

5、6 EU/ml 0.03EU/ml（4） （2） （） （0.5） （0.25）7.1.3. 验证项目、认可标准及验证方法验证项目验证方法灵敏度复核0.5c2检验操作：将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）。4 支（管）4 列每列每支分别加入0.1ml 的2、0.5、和0.25的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。加样结束后，将试管中溶液轻轻振动混匀，封闭管口，避免产生气泡，垂直放入371的恒温器中，保温602 分钟。观察并记录结果：将试管架从恒温器中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180观察，若管内形成凝胶，并且

6、凝胶不变形，不从管壁滑脱者记录为阳性（+）；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者记录为阴性（）。实验结果判断与计算：当最大浓度2 4管均为阳性，最低浓度0.25 4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验方为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的复核结果（c）。计算公式：c = lg-1 （X/4）式中：x为反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点浓度是系列递减内毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果浓度。7.1.4. 验证结果仪器名称：试管恒温仪仪器型号：TAL-40D设备编号：03-ZL-189恒温时间： 09:11 10:11 恒温温度：37.0验证结果内毒素浓度平行管

7、数2（0.25）EU/ml（0.125）EU/ml0.5（0.06）EU/ml0.25（0.03）EU/ml阴性对照反应终点浓度（EU/ml）C鲎试剂灵敏度复核1+-0.125234结论根据氯化钠细菌内毒素检查方法验证方案D01-5302中既定项目进行确认，所有测试结果均符合规定要求。7.2. 干扰试验7.2.1. 试验用样品、鲎试剂、标准品等信息氯化钠生产厂家：中盐宏博集团云梦云虹制药有限公司20150807进厂编号：1212Y00025A015001灵 敏 度：7.2.2. 内毒素标准溶液的制备：7.2.3. 供试品溶液的制备： 取本品0.0468g，加细菌内毒素检查用水5 ml溶解，制成

8、样品溶液。样品 3 ml样品 2 倍稀释液 / ml样品 / 倍供试品溶液 3 mlBET水 / mlBET水7.2.4. 鲎试剂标示灵敏度的对照系列：0.5EU/ml 0.25EU/ml 0.125EU/ml 0.06EU/ml 0.03EU/ml7.2.5. 干扰试验系列：2.5EU/ml 0.25EU/ml 0.125EU/ml 0.06EU/ml 0.03EU/ml （2） （） （0.5） （0.25）7.2.6. 验证项目、认可标准及验证方法干扰试验0.5Es20.5Et2将准备好的鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。其中的4支4列每列每

9、支分别加入0.1ml的2.0、1.0、0.5、0.25的内毒素标准溶液，另一列2支（管）加入0.1ml检查用水作为阴性对照。将另外18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的含2、1、0.5、0.25的内毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入0.1ml供试品溶液作为样品阴性对照。2分钟（保温和拿取试管过程中应避免受到振动）。结果计算：只有当两组最大浓度2均为阳性，最低浓度0.25均为阴性，阴性对照,管均为阴性时，试验方为有效。按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（Es）和用供试品溶液或稀释液制

10、成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（Et）.Es= lg-1 （Xs/4）、Et= lg-1 （Xt/4）Xs、Xt分别为用检查用水和供试品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。7.2.7. 验证结果 11:19 12:19 7.3. 凝胶限度试验7.3.1. 试验用鲎试剂、标准品等信息7.3.2. 内毒素标准溶液的制备：7.3.3. 供试品溶液的制备： 取本品0.0512g，加细菌内毒素检查用水5 ml溶解，制成样品溶液。 1 ml 1 mlBET水供试品阳性对照液的制备： 0.5 EU/ml 0.5 ml 0.25 EU/ml0.5ml样品（ / 倍稀释液）7.3.4.

11、 验证项目、认可标准及验证方法凝胶限度试验27.7EU/g在细菌内毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。操作方法：供试品溶液的制备（稀释倍数不得超过MVD）；阳性对照溶液的制备：用检查用水将内毒素标准品稀释制成2浓度的内毒素标准溶液；供试品阳性对照溶液的制备：用待检测的供试品溶液将内毒素标准品制成2浓度的内毒素溶液（方法同供试品阳性对照溶液的制备）；阴性对照液用细菌内毒素检查用水。取8支（管）溶解好的鲎试剂，其中2支加入0.1ml供试品溶液（其稀释倍数不得超过MVD）作为供试品管，2支加入0.1ml阳性对照溶液作为阳性对照管

12、，2支加入0.1ml检查用水作为阴性对照管，2支加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管。2分钟。备注：凝胶限度试验需取样品3批进行三次试验，若样品不满足3批次，可选择同一批次进行3次独立试验。7.3.5. 验证结果 14:24 15:24 项目样品批号供试品阳性对照阳性对照样1样2样38. 验证总结论8.1. 整个验证过程进展顺利，未发生任何偏差；8.2. 按氯化钠细菌内毒素检查方法验证方案D01-5302对氯化钠细菌内毒素检查方法进行验证，所有验证项目的验证结果均符合要求。证明了按照中国药典2015年版四部细菌内毒素检查法项下的有关规定检验，所采用的检验方法能够始终如一地获得符合客观实际的数据或结果，确保检验结果的准确性。9. 评价及建议氯化钠细菌内毒素检查方法在未变更的情况下，应进行周期性再验证，再验证周期为三年。若检验方法发生变更时应对变更后的检验方法进行验证。四、 附件无五、 变更历史变更前版本号变更后版本号变更原因变更批准日期-