高效液相色谱法在手性药物对映异构体拆分中的应用Word文档格式.docx

1、手性药物对映体拆分的方法主要有非色谱法和色谱法。非色谱法（主要包括结晶法、微生物消化法等）耗时长，过程繁琐不能制备高纯度对映体，色谱法是基于把对映体的混合物转换成非对映异构体，然后利用它们在化学或物理性质上的差异进行分离。主要包括气相色谱（GC）、超临界流体色谱（SFC）、毛细管电泳（CE）和毛细管电色谱（CEC）等。表1罗列了色谱手性拆分的发展史。其中高效液相色谱（HPLC）因其独特的优势成为手性分析领域最常用的一种技术。表1色谱手性拆分发展史年份里程碑1939年Henderson和Rule在乳糖上色谱分离外消旋樟脑衍生物1952年Dalgliesh：提出氨基酸在纸色谱上光学分离的三点作用假

2、设1966年Gil-Au等：用GC直接分离对映体1971年Davankov和Rogozhin：引入手性配体交换色谱1972年Wulff和Sarhan：制备出手性LC的酶模拟聚合物1973年Hesse和Hagel：制备出手性拆分的纤维素三乙酸酯Stewart和Dherty：把琼酯糖键合的牛血清清蛋白（BSA）用于手性拆分1974年Blaschke：由光学活性单体合成出用手性LC的手性聚合物1975年Gram等：用手性冠醚发展出主-客体色谱1979年Dirkle和House：合成出第一个硅胶键合手性固定相，并应用于手性LC分离Okamoto等：合成出手性LC的螺旋形聚合物1982年Allenmar

3、k等：把琼酯键合的BSA用于手性LC1983年Hermansson：把硅胶键合的a1-酸糖蛋白用于手性拆分1984年Armstrong和DeMond：制备出硅胶键合环糊精固定相二、HPLC手性拆分方法手性药物拆分法通常分为直接法和间接法两大类。间接法和直接法的共同特点是均以现代技术为基础并引人不对称中心或光活性分子；不同的是间接法是将其引入分子溶质内，而直接法则是引人分子间。引人手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异是手性进行光学异构体拆分的基础。1、间接法药物对映体在分离前，先与具有高光学纯度的手性衍生剂反应，在药物对映体中引入第二个手性中心，形成非对映异构体，溶质分子与流动相和固定相之间

4、的作用力不同，发生差速迁移以常规或手性固定相进行分离称为间接法，也称手性衍生化试剂法（CDR）。图2 CDR原理图示常用的手性衍生试剂表2常用手性衍生剂手性衍生试剂简述异硫氰酸酯（ITC）、异氰酸酯（IC）类与大多数醇类和胺类化合物反应，形成相应的氨基甲酸酯或脲的非对映体。如麻黄碱类、肾上腺素类、肾上腺素抗结剂、儿茶胺类萘衍生物类其结构特征有利于提高立体选择性，同时此类化合物具有很强的紫外吸收，用UV检测器可大大提高检测灵敏度，在CDR应用十分广泛。羧酸衍生物类主要包括酰氯与磺酰氯类、酸酐类和率甲酸酯类。它们的手性碳位于羧基的位，可与胺、氨基酸及醇类药物反应生成非对应异构体。胺类主要用于衍生化

5、羧酸类、N-保护氨基酸、醇类药物2、直接法直接法是在HPLC系统中引入“手性识别器”或手性环境，以形成暂时的非对映体异构体复合物，根据其形成复合物的稳定系数不同而获得分离。直接法分为手性流动相法（CMP）和手性固定相法（CSP）。（1）手性流动相法（CMP）在流动相加入手性添加剂（CMPA），与对映体生成一对非对映络合物，在普通色谱柱上进行分离。手性添加剂与溶质生成的络合物虽然不及衍生化法形成的衍生物牢固，但所依据的手性识别作用络合物的非对映异构体性质却基本相同。图3 CMP原理图示常用的手性添加剂表3常用手性添加剂手性添加剂配体交换型手性添加剂在众多手性添加剂中以该类添加剂的基础理论研究较成

6、熟，应用也较广。手性配体多为光活性氨基酸或其衍生物。它们和二价金属离子螯合，以适当的浓度分布于流动相中遇药物消旋体，共同形成配位络合物对，然后在反相或正相柱上完成拆分。环糊精添加剂环糊精是由吡喃葡萄糖通过-（1,4）-连接构成的环状低聚糖其分子呈截头圆锥状，边缘排列有许多羟基，内部则是相对疏水的空腔。如果待分析化合物的分子大小与空腔相符合，则可形成环糊精包合物，具有对溶剂分子基团体积直径的选择性及其手性识别作用，颇有应用前景。手性离子对添加剂荷电药物能与手性离子对缔合成电中性络合物，即离子对分布于固定相上，其保留特征可采用手性离子对浓度及其种类调节外，还可由外加的手性络合剂控制。（2）手性固定

7、相法（CSP）手性固定相法是基于样品与固定相表面的手性选择剂形成暂时的非对映体配合物的能量差异或稳定性不同而达到手性分离。是不经过转变成非对映体的直接拆分的方法。图4 CSP原理图示（a）CSP种类表4 CSP种类类型Pirkle型通过含末端羧基或异氰酸酯基手性前体与氨基键合硅胶进行缩合反应，分别形成含酰胺或脲型结构。应用于氨基酸、乙内酰脲、内酰脲、胺类、醇类及硫醇类药物对映体。环糊精环糊精的手性识别主要来自环内控对芳烃或脂肪烃类侧链的包容作用，以及环外壳上的羧基与药物对映体分子发生氢键作用。-环糊精适用于大多数药物，-环糊精适用于较大相对分子质量的药物，-环糊精-适用于相对分子质量小于200

8、的药物。多糖类主要来自氨基甲酸酯或酯的部位与被拆分物之间形成氢键或偶极偶极作用，或通过被拆分物分子进入纤维索网状腔，导致腔内立体环境的改变而实现。主要用于分离巴比妥类药物、麻醉药和抗抑郁药等。蛋白质类可识别药物对映体在蛋白质的结合位点而达到手性分离。可直接分离许多药物，如硫喷妥因，心得怡及阻滞剂等3.三种手性拆分方法的比较表5三种手性拆分方法比较方法优点局限性CDR可以使用已有的非手性固定相，花费少，通过选用具有强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂，可提高检测灵敏度，而且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生化速率及平衡常数应一致，要求衍生化反应迅速、

9、彻底。步骤较繁琐、衍生化试剂毒性较大，很难实现分析方法的自动化。CMP不必做柱前衍生化，对固定相无特殊要求，样品的非对映异构化络合具有可逆性且利于制备应用范围有限，某些添加剂不够稳定而且会干扰检测CSP能够广泛适用于各类化合物，适用于常规及生物样品的分析测定，制备分离方便，定量分析的可靠性高。有些样品需要做柱前衍生化，对样品结构有一定的限制。其适用性尚不及高效液相色谱仪固定相那样广泛。4.结语高效液相色谱法具有快速、分离效果好、检测灵敏度高及可配备选择性强、灵敏度高的不同检测器、检测自动化等特点。对于定量分析和制备分离都是应用最为广泛的一种技术。未来高效液相色谱法在手性分析领域的发展有望集中在深入研究手性识别机制，为快速筛选出合适的分析或制备方法提供明确的理论依据；寻找新材料应用于手性选择剂和色谱柱填料中;同时也是色谱学研究重要的分支。在手性色谱学中，无论是间接法还是直接法都有各自的优点和局限性，它们在药物科学中的应用也是互相补充、各具特色。我们应根据被测药物的结构和性质，选择适当的方法对其进行有效的拆分，为手性药物研发和质量控制提供可靠保障，不断促进手性药物的发展。