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1、常用的絮凝剂有：1.人工合成高分子聚合物（.聚丙烯酰胺类 聚乙烯亚胺衍生物类 .聚丙烯酸类阴离子絮凝剂和聚苯乙烯类衍生物 .无机高分子聚合物絮凝剂：聚合铜盐，聚合铁盐）2.天然有机高分子絮凝剂（壳聚糖，葡聚糖，明胶，海藻酸钠等）3.微生物絮凝剂（主要为糖蛋白、黏多糖、纤维素及核酸等高分子物质）5. 去除其他杂质的技术方法主要有哪些？1.杂蛋白去除方法：等电点沉淀法（常需结合它法） 变性沉淀法：加热变性、大幅度改变PH、加有机溶剂、加表面活性剂等 吸附法：与高价盐形成胶态沉淀 加沉淀剂法：能与蛋白质形成复合沉淀的化学试剂 2.高价无机离子去除方法：离子交换法 沉淀法：加入阴离子盐形成不溶性盐沉淀

2、3.杂质多糖的去除方法：酶解法4.杂质DNA的去除法：核酸酶水解 超声波破碎 离子交换层析或亲和层析第三章 固液分离技术1. 常见的固液分离技术是？应用范围？常见的固液分离技术是：过滤、离心。过滤适用于较大的固体颗粒，包括丝状菌体等。离心适用于颗粒较小的物质，如细菌、酵母菌等。2. 提高过滤效率有哪些方法？过滤工艺条件的选择需注意的问题？提高过滤效率的方法：1.降低料液黏度：预处理技术（加热、去杂等）2.加助滤剂：硅藻土、珍珠岩粉、石棉粉、纸浆等。（助滤剂预涂，混滤。注意：若要回收固体物质又不允许混入其他物质，不宜使用助滤剂）选择恰当的过滤工艺条件：先恒速后恒压（即操作上为：先逐渐加压，再保持

3、恒压）3. 离心机的分类主要有哪些？1.按离心方式分：沉降式离心机、过滤式离心机 2.按操作方式分：间歇式、连续式、半连续式 3.按结构特点分：管式、转鼓式、碟式等 4.按转速分：常速离心机（低速离心机）：小于8000r/min。高速离心机：1000025000r/min，常带有冷冻系统。超速离心机：25000r/min以上，带有冷冻和真空系统，以减少空气阻力和摩擦力。4. 离心力、相对离心力的概念？离心条件的选择注意的问题？离心条件的选择：离心力 Fc= m.r.w2 相对离心力（又称离心分离因素）：RCF = Fc / Fg = 1.12x10-5.r. n2 相对离心力的单位-xg1.对

4、于不同离心机，同一转速，实际离心力可能不同，而实际离心力才是离心效果的关键；2.在说明离心条件时，低速离心常以转速表示，高速离心特别是超速离心以“相对离心力”表示。3.离心时间 w2（t2-t1）=1（lnr2-lnr1）/s 在要求一定的离心效果（沉降距离）时，即对于某一定的样品，离心时间与转速乘积为一定数，因此在离心效果上有：低转速+长时高转速+短时 4.温度和PH（保持活性）第四章 细胞破碎技术1. 各种细胞的细胞壁结构特点？1.细菌细胞壁结构：G+（肽聚糖） G-（外壁层为脂多糖和磷脂、脂蛋白；内壁层肽聚糖脂多糖需Ca离子、Mg离子才能稳定）2.酵母：由酵母纤维素组成，主要成分是葡聚糖

5、和甘露聚糖 3.霉菌：几丁质和葡聚糖 4.植物细胞：纤维素、半纤维素、果胶、木质素等 5.动物细胞：无细胞壁2. 常用的破碎方法有哪些？具体应用特点及操作要求？常用的细胞破碎方法：1.机械破碎法：实验室方法（小规模）：旋刀匀浆法（通过固体剪切力进行破碎，剧烈 能完全破坏动、植物细胞，但酵母、细菌细胞不同 注意防止升温） 研磨法（利用磨料与细胞间的剪切及碰撞作用，温和，常在研钵内进行或细胞匀浆器 增效方法：预先冷冻样液）2.大规模方法：高压匀浆法：过程：高压（可达50100Mpa）喷出碰撞释放到低压 高压造成升温2-3/10MPa，需注意冷却料液 影响因素：压力、循环次数、温度 适用于酵母和绝大

6、多数细菌，不适于团状、丝状菌。处理能力可达0.1-100m3/h3.X挤压法（改进的高压匀浆法）浓缩的菌体悬浮液冷却至-30 -25 形成冰晶体，利用500MPa以上的高压冲剂 适用范围广、破碎率高、细胞碎片粉碎程度低、活性保留率高 主要用于实验室 对冷冻融解敏感的生物物质不适合 4.高速朱磨法：利用玻璃小珠与细胞悬液一起快速搅拌 提高破碎效率的方法：提高搅拌速度、增加小珠量、降低细胞浓度、降低通过珠磨机的循环速率 5.超声波破碎法：超声波振荡器，1525kHz的超声波。超声波作用机理：空化作用。破碎作用影响因素：超声波的声强、频率、处理时间、液体的温度等。优点：操作简单，液量损失少。易失活，

7、噪声，大容量时声能不易传递、不易散热。常用间歇处理，冰浴冷却。多在实验室规模用。6.物理破碎法：反复冻融法：将细胞在-15下急剧冻结、室温缓融，反复多次。机理：冷冻促进细胞膜疏水键结构破裂，增强其亲水性能；胞内水形成冰晶粒胀破细胞。溶质释放、扩散慢。渗透压破碎法（溶胀法）：低渗溶液细胞溶胀，也称渗透压冲击法。操作：一定体积的脓细胞液，加入2倍体积的水中。操作方法改进：细胞预先至于高渗介质中。特点：最温和，用于易破碎的细胞，如动物细胞、G-等。7.化学破碎法：通过化学试剂使细胞壁和细胞膜结构改变或破坏。常用有：酸碱、表面活性剂、有机溶剂等类别。（表面活性剂、碱-溶解细胞壁上的脂质或使细胞内组分渗

8、漏。酸蛋白质水解成氨基酸。有机溶剂可溶解磷脂层，使细胞结构破坏。产品释出性好、细胞外形完整、碎片少、胞内杂质释放少，便于后步分离。易引起目的物失活，可能给后续产物纯化带来困难，从而影响最终纯度。8.酶法破碎法：应用酶破坏细胞壁，可部分或完全破坏细胞壁，再结合其他方法破坏细胞壁。条件温和、反应迅速、选择性强；价格贵、通用性差、有时存在产物抑制、难适用于大规模工业操作，受影响因素多3. 什么是包含体？外源基因在细胞内高度表达蛋白，因此凝集而成的无活性固体颗粒。（包含体为致密凝聚体，密度较大，低速离心便可沉淀，与细胞碎片和可溶性产物分离）第五章 萃取技术1. 什么是萃取技术？概念：利用目标物在两种互

9、不相溶的溶剂中溶解度的不同，将目标物从一种溶剂中转移到另一种溶剂中的分离技术。2. 萃取剂的选择原则？常用的萃取剂？萃取剂的选择：1.对目标物有较大溶解度和好的选择性 2.与被萃取的液相互溶度小 3.回收再生容易，化学性质稳定 4.价廉易得 5.安全性好：闪点高、低毒生化工程常用萃取剂：乙酸乙酯，乙酸丁酯，丁醇3. 影响萃取效果的因素有哪些？具体影响及处理？1.PH：影响选择性及稳定性 2.温度：影响分配系数和稳定性，一般室温或低温 3.盐析：使目标物在水中溶解度降低而易转移至萃取剂中 4.带溶剂：能和目标物形成复合物而易溶于萃取剂中，此复合物在一定条件下又易分解。5.乳化：去乳化（1.过滤和

10、离心：乳化不严重时，碰撞聚沉。2.加热：黏度降低乳化层破坏。3.稀释：乳化剂浓度降低而减轻乳化。4.加电解质：对于离子型乳化剂，中和其电性。5.吸附：除去其中微量水。6.去乳化剂：阳离子表面活性剂，阴离子表面活性剂。7.原料预处理4. 什么是超临界流体？其主要性质？超临界流体是指处于超过物资本身的临界温度和临界压力状态时的流体。处于即非气体也非液体的超临界状态，气体和液体界面消失。超临界流体的性质：1.超临界流体的密度接近其液体故其溶解度接近液体 2.超临界流体的黏度接近其气体，扩散性好，渗透性佳故溶解速度接近气体 3.在临界点附近温度或压力的微小变化，会引起密度和溶解度很大变化，从而引起溶解

11、能力较大变化。5. 超临界流体的选择原则？1.操作与临界温度接近，在目的物稳定温度内 2.超临界流体对目的物有较大溶解度和较好选择性 3.超临界流体化学性质稳定、无毒、无腐蚀、不易燃易爆 4.超临界流体价廉、易得6. 超临界CO2的选择理由？1.萃取操作温度为常温：31.4 2.临界压力7.4MPa 3.化学性质稳定，不易燃易爆、无腐蚀 4.无色、无臭、无毒、无污染 5.具防氧化和防好氧微生物活动作用，防腐 6.价廉易得7. 超临界萃取的典型工艺流程？1.等温法（T1=T2，P1P2 2.等压法（T1T2,P1=P2） 3.吸附法（T1=T2,P1=P2）8. 影响超临界萃取效果的因素及控制？

12、1.温度：影响密度和黏度，控制在临界点附近 2.压力：影响密度和黏度，控制在临界点附近或较高压力 3.原料颗粒度：影响流体渗透和溶解速度，控制在2080日 4.萃取时间：影响萃取率，稍长些好，太长耗时 5.流速：太高-浪费，太低-萃取效率低 6.携带剂：影响极性，进而影响溶解度，5%左右第六章 浓缩技术1. 蒸发浓缩的分类？多效蒸发基本概念？1.常压蒸发浓缩 2.真空浓缩 3.单效蒸发 4.多效蒸发 5.间歇蒸发 6.连续蒸发多效蒸发概念：将二次蒸汽引入下一级作蒸发热源 2. 蒸发浓缩设备的分类及主要的蒸发器？蒸发浓缩设备：膜式、非膜式主要的蒸发器：1.非膜式蒸发器（也称再循环式蒸发器）中央循

13、环管式蒸发器 悬筐式蒸发器 外加热式蒸发器 列文式蒸发器 强制循环蒸发器 2.膜式：升膜式蒸发器 降膜式蒸发器 升降膜式蒸发器 刮板蒸发器3. 膜式蒸发设备及主要工作原理、特点？膜式蒸发设备：1 升膜式蒸发器：加热至沸点的原料液被高速上升的二次蒸汽所带动，沿壁面变呈膜状流动，边进行蒸发。2 降膜蒸发器：加热室顶部加入，经液体分布器均匀分布，在溶液自身重力和下降蒸汽作用下，溶液沿管内壁呈膜状下流，并进行蒸发。第七章 沉淀技术1. 沉淀技术主要有哪些？分类：1.盐析法 2.有机溶剂沉淀法 3.等电点沉淀法 4.成盐沉淀法等2. 盐析的原理是什么？原理：1.盐离子的水合作用降低了自由水的浓度，摧毁了

14、蛋白质的水化层，疏水区露出使生物分子相互聚集而沉淀。2.盐离子中和了蛋白质表面的电荷。3. 常用的盐析剂是什么？具体使用规则？常用盐析剂：硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠等硫酸铵使用规则：加入方式：1.直接加入固体粉末 2.加入硫酸铵饱和溶液使用硫酸铵应注意的问题：1.加50mmol/;；磷酸缓冲溶液，防止变酸。2.进行硫酸铵盐析要预先进行分级试验，逐级沉淀分离。3.温度升高蛋白质溶解度降低（高盐），一般控制在4左右。4.PH一般控制在等电点。5.盐析沉淀产品最后要脱盐。4. 有机溶剂法的原理？有机溶剂法机理：1.亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数，溶质分子的水化度降低，溶质分子间静电

15、引力增加，易聚集形成沉淀。2.亲水性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。5. 常用的有机溶剂沉淀剂？使用原则？常用的有机溶剂沉淀剂：乙醇、丙酮 使用原则：1.低温、少量多次加入，加入时缓慢搅拌（有机溶剂加入水中发热，控制温度）2.等电点沉淀（控制适宜PH值，注意使同种溶液中的目的物与主要杂质带同种电荷）3.少量盐存在能保护蛋白质（助沉剂：低浓度的单价盐，如醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等Zn离子、Ca离子等）6. 等电点法沉淀原理？两性电解质，在溶液PH处于等电点（PI）时分子表面净电荷为零，导致赖以稳定的双电层及水化膜的消

16、弱或破坏，分子间引力增加，溶解度降低。调节溶解的PH值，使两性溶质溶解度下降。析出沉淀的操作。第八章 结晶技术1. 什么是过饱和溶液？过饱和溶液：溶液的浓度大于溶质的溶解度（c） 过饱和度（S）=过饱和溶液（C）/饱和溶液（C*）2. 结晶的前提条件？结晶的基本过程？结晶的前提条件：溶液达到过饱和 结晶的三个过程：形成过饱和溶液晶核形成晶体生长3. 什么是过饱和曲线？理解稳定区、不稳定区及介稳区的特点。过饱和曲线：开始有晶核形成的过饱和浓度与温度的关系曲线 4. 如何形成过饱和溶液？过饱和溶液的形成：1.将热饱和溶液冷却 2.将部分溶剂蒸发 3.化学反应结晶 4.盐析结晶5. 影响晶体质量的具

17、体因素有哪些？具体控制方法？晶体质量是指：晶体大小、形状（均匀度）、纯度1. 晶体的大小：取决于晶核形成速度和晶体生长速度之间的对比关系。主要影响因素包括：过饱和度、温度、搅拌速度和杂质。过饱和度：增加，晶体细小 温度：快速冷却得到细小晶体 搅拌：搅拌越快晶体越细小 晶种：加入大小均匀的晶种可得到均匀的成品晶体 2.晶体的形状：结晶方法、溶剂、杂质、过饱和度、温度、搅拌都影响晶体形状 3.晶体的纯度：夹带母液、灰尘、气泡，通过洗涤、重结晶等方法减轻 4.晶体的结块、重结晶：粒度不齐的晶体易发生结块，温度、湿度也有影响。重结晶：晶体用适当的溶剂溶解后再次结晶，提高纯度。第九章 干燥技术1. 常用

18、的干燥方法分类？常用的干燥方法：1.按热源分：加热干燥 辐射干燥（微波干燥、远红外干燥）2.按水分除去方式分：液态水分气化干燥 固态冰升华干燥（真空冷冻干燥）3.按干燥过程压力情况分：常压干燥 真空干燥2. 干燥过程分几个阶段及其特点？干燥包括恒速干燥和降速干燥两个阶段。1.恒速干燥阶段：物料恒温，主要去除游离水分 2.降速干燥阶段：温度逐渐升高，主要去除结合水分3. 喷雾干燥的原理？及其分类？喷雾干燥的原理：通过压力、空气或离心等不同喷雾器作用将物料喷成雾状，与干燥室热空气接触而除去水分，干燥物料通过旋风分离器收集。气流式（双流式）、离心式、压力式第一十章 膜分离技术1. 生物分离中常用的膜

19、分离技术主要有哪几种分类？主要分离原理及分离范围、特点？膜分离：微滤、超滤、纳滤、反渗透 分离原理：1.筛分 2.溶解分子扩散（膜的极性与分子极性） 分离物资的范围：1.微滤（0.0210m） 2.超滤（10003000000Da当于120nm孔径 3.纳滤（1nm左右，相当于40010000Da） 4.反渗透（400Da以下） 膜分离的特点：1.优点（操作在常温或低温下进行 是物理过程，不发生化学反应 多数不发生相变能耗低 选择性较高 可连续化操作） 2.缺点（易产生浓差极化，导致分离性能降低 膜易污染 膜寿命有限 仍是初步纯化的方法）2. 什么是纳滤？具体的分离特点？纳滤的特点：1.具有纳

20、米级孔径 2.操作压力低，又称低压反渗透 3.对离子具有选择透过性 4.较好的耐压密性和较强的抗污染能力 5.水通量高3. 膜分离的优点和缺点？膜分离特点：1优点（操作在常温或低温下进行 是物理反应，不发生化学反应 多数不发生相变能耗低 选择性较高 可连续化操作）2.缺点（易产生浓差极化，导致分离性能降低 膜易污染 膜寿命有限 仍是初步纯化的方法）4. 表征膜性能的参数主要有哪些？膜的截留相对分子量的的概念及含义？表征分离膜性能的参数有孔的特征、水通量、截留相对分子质量、拖延率、抗压能力、PH使用范围、温度使用范围、对溶剂的稳定性等。5. 膜按结构有哪些分类？按膜结构分：对称膜和不对称膜6.

21、膜组件有哪几种分类？其特性及具体应用特点？1.平板式膜组件 2.管式膜组件（内压型管式和外压型管式） 3.卷式膜组件 4.中空纤维式膜组件7. 什么是浓差极化？其危害及减轻措施？当溶剂透过膜时，溶质由于透过较慢或不能透过而滞留在膜上时，膜表面溶质浓度增大，高于主体溶液中溶质浓度，从而引起溶质从膜表面向主体溶液的扩散，这种现象称为浓差极化。 危害：1.溶质透过量增加 2.溶剂通过量减少 3.膜污染加剧 4.可能会析出沉淀 减轻措施：1.错流过滤 2.改善操作条件8. 什么是膜的污染？膜的清洗有哪些方法？对于蛋白质、有机物、无机盐等杂质可以采用哪些清洗剂清洗？膜污染：膜污染是指被处理物料中的微粒、

22、胶体粒子或溶质大分子由于与膜存在物理、化学相互作用或机械作用而引起的在膜表面或膜孔内吸附、沉积或堵塞，使膜透过性等分离特性发生不可逆变化的现象。 膜污染的清洗：1.酸、碱 2.表面活性剂 3.氧化剂 4.酶 5.有机溶剂9. 膜分离工艺条件的选择有哪些方面？1.操作压力：以不形成凝胶层为限 2.料液流速：保证足够压力，减轻浓差极化，防止蛋白质变性失活 3.料液浓度：减轻浓差极化 4.操作温度：减少黏度减轻浓差极化，但防止目的物变性 5.PH：影响膜和目的物的荷电性 6.离子强度：影响目的物形态，影响膜污染第一十一章 层析技术1. 层析的基本概念：体积、层析柱的分离度、柱效层析技术又称色谱技术层

23、离技术等，是一组相关技术的总称。基本原理：当含有被分离物质的料液流过层析柱时，由于层析剂对各组分的阻滞力不同而使各组分分离开来（不同组分在流动相和固定相分配不同）1 总柱床体积（Vt ）：层析剂经溶胀、装柱、沉降，体积稳定后所占据层柱内的总体积。2 外水体积（Vo）：柱中层析剂颗粒间隙的液相体积的总和。3 内水体积（Vi）：溶胀后的层析剂颗粒网孔中的液相体积的总和。4 基质体积（Vg）：干胶体积，是层析剂基质颗粒骨架所占据的体积。5 洗脱体积（Ve）：从洗脱开始，某一成分从柱顶部到底部的洗脱液中出现浓度达到最大值（洗脱峰最高点）时的流动相体积。6 死体积（Vm）：指不被层析柱层析剂滞留的惰性组

24、分，从开始洗脱到柱出口出现浓度最大值时流出的流动相体积。其值等于外水体积加内水体积。Vt = Vo十ViVg层析的分离度：分离度（R）又称分辨率，是相邻两个洗脱峰保留时间之差的2倍与色谱峰峰基宽之和的比值，表示式为：R=2（te2te1）/（W1+W2）te2和te1洗脱峰2和峰1的保留时间W1和W2洗脱峰1和峰2的峰宽 1.R1时，两峰部分重叠；2.R=1时，两峰有98%的分离；.=.时，两峰分离程度可达.因此，一般用=.作为两种组分完全分离的标志柱效：柱效是表达层析柱性能的重要参数，可用理论塔板数和理论塔板高度来衡量。N=5.54 （te/W1/2）2=/理论塔板数越大或理论塔高度越小，说

25、明层析柱分离效率越高。2. 什么是吸附层析技术？以吸附剂为固定相，根据待分离组分与吸附剂之间的物理或化学吸附力差别而达到分离目的的层析技术。3. 常见的吸附层析剂有哪些？具体应用特点？吸附剂：.无机吸附剂：硅胶、氧化铝、羟基磷灰石.有机吸附剂：活性炭.大网格聚合物吸附剂（大孔树脂）1 硅胶特点：.作吸附层析剂，还可作为其他层析剂的基质.在碱性水溶液中不稳定，应用的常规为.活性硅胶为多乳的，吸附作用与本身含水量有关.硅胶的活化、再生.可分离氨基酸衍生物、甾体激素、皂苷类、类脂及色素等2 氧化铝特点：.常用的亲水性吸附剂，较高吸附容量，分离效果好，尤其适用于亲脂性成分的分离.吸附活性与含水量相关3

26、 羟基磷灰石特点：吸附容量高，稳定性好，可制备及纯化蛋白质、酶、核酸、病毒等4 活性炭特点：.非极性吸附剂.吸附时（从极性溶剂中吸附非极性溶质）.洗脱时（用非极性溶剂洗脱）.应用范围（脱色、去有机杂质、热源等）.再生：（水洗洗酸洗中和水洗加热干燥）5 大网格聚合物吸附剂特点：孔隙大小、骨架结构、极性可按需要选取优点：选择性好、机械强度高、可反复使用范围：使用范围广，特别适合有机物分离4. 凝胶层析技术的基本原理是什么？凝胶层析的基本原理：根据分子大小进行分离纯化的方法（不同大小的分子流过多孔凝胶分子大的组分先流出，分子小的组分后流出各组分便按分子从大道小的顺序依次流出）5. 常用的凝胶层析有哪

27、些种类？Sephadex G系列型号与吸水量关系？常用凝胶层析剂：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶，以及各凝胶的改性物凝胶型号与吸水量的关系：吸水量与数字关系：如，表示吸水量为干胶吸水.6. 凝胶层析操作流程？层析操作条件选择的具体要求？.层析剂选择和预处理.装柱.平衡.上样.洗脱.检测.收集.层析剂再生和保存1. 凝胶选择：根据样品确定分离范围，从而选择合适型号的凝胶应将大分子完全排阻而小分子完全渗透适当的颗粒度：颗粒小，分辨率高，但相对流速慢，有时会造成扩散现象严重颗粒大，流速快，分辨率较低但条件得当也可以得到满意的结果2. 凝胶的处理：估计用量：首先要根据选择的层析柱估计算出凝胶的

28、用量。溶胀：在倍以上的水中（或洗脱液）充分溶胀倾泻法去悬浮物小颗粒减压排气3. 层析柱的选择：层析柱的直径和长度比一般在:之间4. 装柱：将柱子洗涤干净安装柱并调垂直关闭层析柱出水口，并加入少量洗脱液检漏及排气泡将处理好的填料缓慢装入柱中，同时打开出水口，控制适当流速使填料等均匀沉降，并不断加入填料溶液使柱中填料表面平坦并在表面上留有高的缓冲液，同时关闭出水口5. 平衡：柱子装好后，要用所需洗脱液（有一定的和离子强度）平衡柱子。用恒流泵在恒定压力下走柱子（平衡与洗脱时的压力尽可能保持相同）。平衡液体积一般为倍柱床体积，以保证平衡后柱床体积稳定及基质充分平衡。如果需要，可用兰色葡聚糖在恒压下走柱，如色带均匀下降，则说明柱子是均匀的。6. 加样：.加样体积应低于的床体积。.加样时应缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲剂基质，以保持基质表面