白酒中甜味剂的检测Word下载.docx

1、又名乙酰磺胺酸钾、AK糖，为白色结晶状粉末，极易溶于水，不吸湿，甜度为蔗糖的200倍，具有无营养、无热量，在人体内不代谢不吸收的特点，但因其对肝脏和神经系统能够造成危害，因此，对于安赛蜜，在GB 2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准中对安赛蜜在相应食品中的添加量进行了严格限制。1.3甜蜜素白色针状、片状结晶或结晶状粉末，又名环己胺磺酸钾，是由氨基磺酸与环己胺及氢氧化钠反应而制成的非营养型合成甜味剂。其甜度为蔗糖的30倍，水溶性好，酸稳定性强，成本较低，但据研究表明，食用甜蜜素和糖精的混合物可致膀胱癌。美国、英国、日本和加拿大等国已全面禁止使用此甜昧剂。我国允许在一些食品中添加，

2、GB 27602014t4中对各种食品中的限量作出了相应规定。1.4阿斯巴甜又名甜味素、蛋白糖、天冬甜母、天冬甜精、天苯糖等，是由L一苯丙氨酸先与甲醇酯化后再和氨基酸L一天冬氨酸缩合酰胺化产生的一种经甲基酯化后的二肽类化合物。甜度为蔗糖的200倍，占世界糖替代品市场份额的62。由于其高甜度、低热量、对人体无危害，适合于除苯丙酮酸尿患者的其他任何人群，被广泛用于食品中。1.5纽甜化学名是N一N一（3，3一二甲基丁基）一L一仅一天冬酰胺卜L一苯丙氨酰一L一甲酯，是一种白色结晶粉末，无能量，属二肽类强力甜味剂。甜度为蔗糖的7000-13000倍，是阿斯巴甜的40倍，甜味纯正，无苦味和金属味。因其稳定

3、性好、甜味协调、无龋齿性、适用人群广、安全性高，被广大企业应用于各种食品中。1.6三氯蔗糖三氯蔗糖，一种白色粉末状物质，极易溶于水，有较好的酸稳定性、光稳定性和热稳定性，甜度为蔗糖的600800倍，无能量，甜味纯正，零热量，不会造成龋齿，适合任何人群，被认为是当今最安全的甜味剂，已被包括中国在内的30多个国家批准可作为甜味剂使用。1.7甜菊糖苷甜菊糖苷纯品为白色结晶粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，有较好的耐热性、耐盐性和稳定性，甜度是蔗糖的200300倍，热值为蔗糖的1300，对人体无副作用，是经我国卫生部、轻工业部批准使用的最接近蔗糖口味的天然低热值甜味剂。它是继甘蔗、甜菜糖之外第3种有开发价值

4、和健康推崇的天然蔗糖替代品，被国际上誉为“世界第三蔗糖”，因此不少食品加工企业将其作为蔗糖的替代品。2白酒中甜昧剂的常用检测方法目前，对白酒中甜味剂的检测方法主要有：高效液相色谱法、离子色谱法、高效液相色谱一质谱联用技术、超高效液相色谱法一质谱联用技术、气相色谱法、薄层层析法、比色法等。薄层层析法和比色法主要应用于食品中甜蜜素的检测，因检出限比较高，操作繁琐，重现性差，现已很少用于食品中甜味剂的检测，且食品中甜蜜素的检测国家标准修订后已将此两种方法删除】，故在此不再赘述。2.1高效液相色谱法高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上引入气相色谱理论，在技术上采用高压、高效固定相和高灵敏度检测器，

5、使之发展成为高分离速度、高分辨率、高效率、高灵敏度的液相色谱法。HPLC法的优点是分离性能高、分析速度快，通过比较色谱峰与样品色谱峰的保留时间和紫外光谱图，可以基本确证是否含有与对照品一致的化学成分。目前，应用于白酒中甜味剂检测的高效液相色谱检测器主要有紫外吸收检测器、示差折光检测器、二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器。2.1.1紫外吸收检测器紫外吸收检测器是高效液相色谱最常用的检测器，灵敏度高，检出限低，线性范围宽，对流动相的速度和温度变化不敏感。根据国家标准，可用高效液相色谱仪紫外吸收检测器检测的白酒中的甜味剂有糖精钠（GB 5009.2820l6第一法）、安赛蜜（GBT 5009.140

6、2o03）、甜蜜素（GB 5009.972016第二法）、阿斯巴甜（GB 5009.26320l6）、纽甜（GB 5009.2472016）、甜菊糖苷（SNT 3854-2014t）。可见，紫外吸收检测器是应用范围最广的检测器。除国家标准外，文献中也有不少利用高效液相色谱法紫外吸收检测器检测白酒中甜味剂的报道。司冠儒等建立了一种可同时检测白酒安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜3种甜味剂的方法：选用XDBC18柱，以甲醇：0.02 M乙酸铵（vV）；25：75作为流动相，在220 am波长下检测。该方法定量限为0.05 mgm，样品回收率在90.598.3之间。吕国良采用了高效液相色谱法紫外检测器检测白酒

7、中的甜蜜素，先在酸性条件下用次氯酸钠对甜蜜素进行衍生，后用正己烷提取，再以ODSHypersil作为色谱柱，甲醇：水=80：20作为流动相，1.0 mLmin的流速，314 nm的检测波长进行检测，最终结果甜蜜素线性范围为10200gmL，回收率93.15106.67，相对标准偏差1.22.8，检出限为1.0gmL，定量限2.0 la,gmL。此方法可以避免白酒中环己醇、环己基类物质带来的干扰，比较准确。付大友等建立一种测定白酒中安赛蜜含量的方法，样品直接用超纯水稀释，进样测定。采用ZORBAX Eclipse XDBC。色谱柱，以含0.1乙酸的乙酸铵缓冲液和甲醇作为流动相，O.8 mLmin

8、的流速，230 nm的检测波长，35的柱温，最终可在2.86 min出现安赛蜜的峰。检出限为1.8 mg g，线性范围为1.050.0 ixgmL，加标回收率在98101之间。2.1.2示差折光检测器示差折光检测器是高效液相色谱中的一种通用性较强的检测器，其原理是通过连续测定参比池与样品池折射率的变化来测量样品中的目标物质含量，但灵敏度不高，对检测环境要求比较严格，对流动相的速度和温度变化非常敏感，不适用于梯度洗脱，检出限较高，不能进行痕量分析。根据国家标准GB 22255-2014t，可用高效液相色谱仪示差检测器检测的白酒中的甜味剂有三氯蔗糖。未见利用示差折光检测器进行白酒中甜味剂检测的其他

9、报道。2.1.3二极管阵列检测器二极管阵列检测器的优点是用电子学方法快速扫描而获取，扫描速度远超色谱峰的出峰速度，可以检测色谱流出物每瞬间的吸收光谱图，可为每一样品提供极为丰富的色谱和光谱信息，对分离峰进行定量分析，并协助对色谱峰的定性和纯度的鉴定。根据国家标准，可用高效液相色谱仪二极管阵列检测器检测的白酒中的甜味剂有甜蜜素（GB 5009.972016第二法）、阿斯巴甜（GB 5009.2632016t）、纽甜（GB 5009.2472016m）和甜菊糖苷（SNT 3854-2014t）。可见，二极管阵列检测器也是一种应用范围较广的检测器。程春梅等建立了一种利用高效液相色谱二极管阵列检测器检

10、测白酒中纽甜的方法，采用了80水浴下将白酒样品减压浓缩的预处理方法，提高了预处理效率及方法检出限。具体检测方法为：用Agilent Cl8色谱柱（250 mmx4.6 mm），以0.02 molL的乙酸铵一乙腈（65：35）为流动相，在218 am下检测，检出限可低至0.011 mg/g。2.1.4蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器是一种通用型检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，其原理是：恒定流速的洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过

11、放大电路、模数转换电路和计算机转换成色谱工作站的数字信号色谱图。该检测器的优点是可以检测没有紫外吸收的有机物质，不需要样品含有发色基团，灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。缺点是价格较昂贵，与高效液相色谱连接时需要信号转换模块，而且使用时需要配置高压氮气或空气且实验中易产生有害废气。根据国家标准，白酒中的三氯蔗糖可用高效液相色谱仪蒸发光散射检测器检测。武金忠等建立了一种超高效液相色谱一蒸发光散射检测器检测白酒中安赛蜜、阿斯巴甜、甜蜜素、纽甜、糖精和甜菊糖苷6种甜味剂的方法：采用T3色谱柱（50 mmx 2.1 mm，1.8 m），40的柱温，乙腈和

12、水作为流动相梯度洗脱，进样量3 L，最终可在4 min内检出所有的甜味剂，方法回收率达到89105。该方法样品前处理比较简单，能快速、准确测出6种甜味剂，同时可以避免测定结果中假阳性的干扰。2.2离子色谱法离子色谱法是液相色谱法中的一种，用于分析在水溶液中能够解离成为阴、阳离子的物质，具有选择性好、灵敏度高等优点，在文献中有不少用离色谱法检测白酒中甜味剂的方法研究。李红艳和石敏等都建立了离子色谱检测白酒中甜蜜素的方法，选用了Dionex Ionpac AS17（250 mm4 mm）分离柱，采用了KOH作为淋洗液，样品无需衍生化，直接过滤膜、小柱进样或浓缩5倍进样，均能得到比较准确的甜蜜素数据

13、，线性范围较好，加标回收率较高20-21。钟红霞、王勇等建立的白酒中甜蜜素的检测方法，选用了Metrosep A Supp 5（250 mm4 mm）作为阴离子分离柱，NaHCO，一Na CO，作为淋洗液，样品沸水浴蒸干后超纯水定容，经0.45 Ixm滤膜过滤后直接上机检测，最终甜蜜素的线性范围为0.0010.20 mgmL，检出限为l0 gL。2.3高效液相色谱一串联质谱（HPLCMS）法HPLCMS法同时结合了HPLC技术的高分离能力与MS较高的灵敏度与较强的定性能力等优点，能够在一次运行中对检测目标同时完成筛选和确证，进行准确地定性、定量。针对气相色谱法不适用于白酒检测的现状，国家标准G

14、B 5009.972016中添加了液相色谱一质谱质谱法，并专门指出该方法适用于白酒中环己基氨基磺酸钠的测定。早在2007年，王骏口就建立了一种HPLCMS测定白酒中微量甜蜜素、糖精钠和安赛蜜的方法。孙棣等建立了白酒中安赛蜜、甜蜜素、糖精钠和三氯蔗糖4种甜味剂的高效液相色谱一串联质谱的检测方法：采用Agilent ECC18色谱柱，以甲醇一乙酸铵溶液为流动相，柱温35，流速0.8 mLmin梯度洗脱进行检测。4种甜味剂在5100 ngmL范围内呈良好线性关系，检出限为0.001n0.02 mgkg，回收率在82.70117.62之间，相对标准偏差（RSD）为1.094.64。吴宏萍等口建立了一种

15、同时测定白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素和阿斯巴甜4种甜味剂的LCMSMS分析方法：采用P0一roshel 120 ECC18柱，以含0.1甲酸的水一甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速0.4 mLmin，在电喷雾电离（ESI）负离子模式下，采用多重反应监测模式进行检测，线性范围均在5100 pgL，加标回收率89l02，相对标准偏差不大于2.5，检出限均为l gL。余磊等建立了LCMSMS同时检测酱香型白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜及三氯蔗糖6种人工合成甜味剂的方法：样品直接稀释过0.45 txm滤膜上机分析，以C.柱分离，0.1甲酸水溶液一甲醇为流动相，梯度洗脱，在电喷雾电离（ESI）

16、负离子模式下，采用多重反应监测模式进行检测，最终6种甜味剂在10200 ngmL范围内相关系数为0.99150.9943，20500 ngmL范围内相关系数为O.9961O.9983，检出限均为10gkg，相对标准偏差为2.17.9。该方法样品前处理比较简单，可以快速、高效、准确地同时测定出白酒中6种甜味剂。2.4超高效液相色谱法一质谱联用仪（UPLCMSMS）法UPLC技术是近年来发展起来的分离技术，它采用1.7 Ixm颗粒度的色谱柱填料，柱效更高更稳定，流动相流速快、分析时间短、分析通量高，与质谱联用后为复杂体系的分离分析提供了良好的平台，是白酒中甜味剂检测的有力工具。2010年，郭莹莹等

17、口建立了一种白酒及调香剂中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和阿斯巴甜4种甜味剂的高效液相色谱一串联质谱检测法：采用Waters C色谱柱（50 mm2.1 mm，1.7 m）分离，以乙腈一0.01 g100 mL氨水为流动相，梯度洗脱，经电喷雾离子源负离子化后，用三重四级杆串联质谱仪的多反应监测方式进行定量分析。4种甜味剂在l01000 g几范围内线性关系良好，检出限为0.030.35 L，平均加标回收率在75.2115.3之间，相对标准偏差在8以内。吴世嘉等建立了一种检测白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜和纽甜6种甜味剂的UPLCMSMS方法：先用旋转蒸发去除白酒中的醇类等易挥发组分，通

18、过BEH C18柱分离，以甲醇一0.02 molL乙酸铵水溶液作流动相梯度洗脱，在ESI负离子模式下检测，一次进样分析仅需10 min，线性关系和回收率均比较好，得出的安赛蜜检出限为0.05 mgL，糖精钠、甜蜜素、纽甜的检出限为0.01 mgL，三氯蔗糖、阿斯巴甜检出限为0.1 mgL。该方法准确可靠，简便快捷，可同时检测6种甜味剂。仇红萍建立了一种UPLCMSMS法检测白酒中的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素和三氯蔗糖的方法：使用色谱柱Agilem ZORBAXSBC,8（50 mm 2.1 mm，1.8 m），用0.1甲酸水溶液一甲醇流动相梯度洗脱，在电喷雾离子源ESI负离子模式下多重反应监测（M

19、RM）定性、定量检测。4种甜味剂在10500 gL浓度范围内线性良好，检出限为0.52.4 IxgL，加标回收率在89.4104.6之间，RSD4。整个分析过程可在2.5 min内完成，检测效率较高。刘国英等利用UPLCMSMS建立一种白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素和阿斯巴甜4种微量甜味剂的检测方法：以BEH C18色谱柱为分离柱，0.1（vv）乙酸一1 mmolL乙酸铵溶液：乙腈为流动相进行梯度洗脱，经UPLC分离，采用电喷雾串联四级杆进行多反应监测模式（MRM）进行监测。4种甜味剂在50250 ngmL范围内线性良好，3个加标水平样品平均回收率为97.1111-3，RSD均控制在5以内。2.

20、5气相色谱法气相色谱法是国家标准GB 5009.9720l6中检测食品中甜蜜素的第一个方法，其原理是在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱氢火焰离子化检测器进行分离及分析，保留时间定性，外标法定量。但是由于白酒中含有的环己醇及含环己基的物质，用此方法检测可能会导致实验的假阳性，因此该标准明确指出气相色谱法不适用于白酒中甜蜜素的检测。但有学者对国家标准中的预处理方法进行了改进，从而避免假阳性结果出现。陈玉波等建立了一种气相色谱毛细管柱内标法测定白酒中甜蜜素含量的方法，以乙酸丁酯为内标，选用DB一1毛细管柱，FID检测器，进样量lO L，最终结果线性范围为0.1

21、2.0 mgmL，加标回收率在99.8102.6之间。这种方法改变了国家标准的前处理方法，并证明了环己醇的存在不会影响白酒中甜蜜素的测定，预处理过程中加热法环己醇可以完全挥发，从而避免了白酒中甜蜜素检测的假阳性，能够比较准确地检测出白酒中甜蜜素含量。3白酒中甜昧剂的来源分析目前，对白酒中甜味剂的来源主要存在两种情况：一是很多企业在生产勾调过程中，因使用含有甜蜜素等甜味剂的陈香剂、除苦剂、糟香剂、窖香剂或复合调酒剂等酒用香精香料，造成白酒产品中甜蜜素违规；二是部分企业因使用含有甜味剂的外购原酒，而导致被动违规。陈仁远等围绕白酒生产加工环节的产品因素、人为因素和环境因素，对企业生产工艺情况进行调查

22、研究，同时设计科学的采样方案进行取样检测，探索识别白酒中甜味剂的本底值及可能来源的路径。通过分析验证，所有正常生产过程的酒及成品酒中的甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖的含量均低于检出限。进一步的研究证明，排除非法添加的前提下，白酒中甜味剂的主要来源为外购基酒和外购调味酒，建议白酒生产企业加强对外购基酒和调味酒的进货验证。对大量白酒样品中的甜味剂进行了检测，对白酒生产过程中的甜味剂产生的可能原因进行了分析。他们对企业自身生产的成品酒、轮次酒及外购的调味酒、高温大曲、中温大曲、糖化酶香料物质等进行了安赛蜜、甜蜜素、糖精钠和三氯蔗糖的测定。检测结果显示，外购的调味酒和糖化酶中均检出了甜味剂，并解释说

23、糖化酶检出的甜味剂可能是由于在自身发酵过程中产生了干扰物质导致了成品酒中甜味剂本底值的产生，建议企业为了保证白酒生产的质量安全应采取有效手段控制外购酒样的质量。4结论综上所述，高效液相色谱法（紫外检测器）是白酒中甜味剂检测的最普遍最通用也是应用范围较广的检测方法，但检测时间比较长，不同的甜味剂可能需要不同的前处理方法和最优检测波长。随着检测技术的进步和检测仪器的快速发展，高效液相色谱一串联质谱法和超高效液相色谱法一质谱联用仪法逐渐成为白酒中甜味剂检测的常用方法，且由于其检出限低、预处理方法简单、检测时间短，并可同时检测多种甜味剂，提高了检测效率，在未来有进一步的开发和推广应用价值。白酒中甜味剂的来源排除厂家主动添加的因素外，引入的主要渠道有外购的原酒、调味酒和酒用香精香料，建议广大白酒厂家增强本身的进货验证能力，购买原酒、调味酒和香料时注意其甜味剂的检测。同时建议相关部门加大对白酒原酒、调味酒和酒用香精香料的监督抽查，从源头上控制白酒中甜味剂的出现。