平菇多糖提取工艺优化研究.docx

1、平菇多糖提取工艺优化研究平菇多糖提取工艺优化研究吴宏华 王怡 钱磊 张春椿 陈微娜【摘要】 目的优化水提法提取平菇多糖的工艺，为平菇多糖的提取提供一种简单有效的方式。方式通过单因素实验和正交实验对水提法提取平菇多糖的工艺进行了研究，考察料液比、提取时刻、提取温度三个因素对平菇多糖提取率的阻碍，并以正交实验设计优化工艺条件。结果平菇多糖的最正确提取工艺条件为料液比13五、提取时刻3h、提取温度90。在此条件下得率可达%。结论该方式简便、价廉、准确、灵敏度高，适合于平菇多糖的提取。 【关键词】 平菇多糖；正交实验；制药工艺Abstract: Objective In order to optimi

2、ze the best condition for the water extraction process of Polysaccharides from Pleurotus ostreatus. MethodsThe single factor experiments were conducted, in which, the effects of radio of liquor to solid, irradiation time, temperature were studied separately. The orthogonal experiments were conducted

3、 to find out the appropriate operating conditions. Results The appropriate operating conditions are as follows: the radio of liquor to solid is 1 irradiation time is 3h. and the temperature is 90oC. Under these conditions the average yield of Polysaccharides is %. ConclusionIt is an ideal means for

4、extracting Polysaccharides from Pleurotus ostreatus, with short time, less cost and sensitivity.Key words: Pleurotus ostreatus Polysaccharide; orthogonal test; pharmaceutical technique 平菇( Pleurotus ostreatus)又名白平菇、侧耳,属担子菌亚门,层菌纲,伞菌目,口磨科,是普遍栽培的食用菌之一1。中医研究以为平菇性味甘、温，具有追风散寒、舒筋活络的功效。经常使用于医治腰腿疼痛、手足麻木、筋络不通

5、等病症。长期食用平菇，能够降低血压、降低胆固醇含量、避免血管硬化，对更年期综合症有明显的调剂作用，并对超氧阴离子自由基、羟基自由基均具有明显的清除作用2。目前对平菇多糖的生物活性已进行了相关研究,但对平菇多糖的分离提取还无系统的研究结果。因此，本文通过单因素实验和正交实验对水提法提取平菇多糖的工艺进行了研究，探讨了水提法提取平菇多糖的最正确提取工艺条件，为平菇进一步的开发利用提供必然的参考依据。1 材料与方式 材料平菇为市售，经浙江中医药大学熊耀康教授鉴定确以为层菌纲伞菌目口磨科平菇(Pleurotus ostreatus)的子实体。葡萄糖、苯酚、硫酸、无水乙醇等均为分析纯，蒸馏水。 仪器ZJ

6、202 0A型恒温干燥箱(浙江省诸暨市实验仪器厂)；万分之一电子分析天平（德国赛多利斯）；R 201旋转蒸发仪（上海申胜生物技术）；电子恒温不锈钢水浴锅（上海中新医疗设备）；UV 2600紫外分光光度计（上海优尼科）；大容量低速离心机（上海安亭科学仪器厂）。 方式 提取方式平菇洗净烘干后适度粉碎，周密称取平菇，放入圆底烧瓶，设定料液比、提取时刻、提取温度进行回流提取，提取液真空抽滤，取滤液，浓缩。滤液浓缩后加无水乙醇至醇沉浓度为80%，静置留宿，4000r/min离心5min，去除上清液，得沉淀即为平菇多糖。 含量测定方式本实验采纳苯酚 硫酸法，以葡萄糖为标准品测定平菇多糖含量3。 对照品溶液

7、的制备准确称取干燥至恒重的葡萄糖粉末10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 供试品溶液的制备将所得的多糖沉淀加水溶解，定容至100ml容量瓶中，摇匀，周密量取1ml，定容至25ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。 最大吸收光波长的确信吸取必然量的标准葡萄糖对照品溶液，置于比色管中，加水至2ml，加1ml 5%苯酚后，当即加入5ml浓硫酸并混匀， 静止10min，摇匀，室温放置20min同时取2ml水进行上述一样操作，作为空白对照。样品溶液别离于450550nm处测吸光度，确信其最大吸收峰所对应的波长。依如实验测定，当吸收光波长为490nm时，样品溶液的吸光度最大，因此

8、本实验选取吸收光波长为490nm。 标准曲线的绘制别离周密吸取葡萄糖标准溶液、 ml于比色管中，各以水补至 ml，然后加入5苯酚 ml及浓硫酸混匀，静止10min，摇匀，室温放置20min后于490 nm测定吸光度，以 ml水按一样显色操作为空白，以多糖浓度为横坐标，测定的吸光度值为纵坐标，得标准曲线y= ，r=。 多糖得率计算多糖得率=葡萄糖浓度稀释倍数原液体积/子实体干重100 % 单因素考察 考察料液比对提取率的阻碍精准称取平菇份，料液比别离为110、11五、120、12五、130、135在提取时刻3h，提取温度90，提取2次，提取液真空抽滤，取滤液，浓缩。滤液浓缩后加无水乙醇至醇沉浓度

9、为80%，静置留宿，4000r/min离心5min，去除上清液。将多糖沉淀加水溶解，配成供试品溶液，用苯酚 硫酸法测定平菇多糖含量。 考察提取时刻对提取率的阻碍精准称取平菇份，提取时刻别离设定为、，在料液比为130，提取温度90，提取2次，提取液真空抽滤，取滤液，浓缩。其余步骤同“。 考察提取温度对提取率的阻碍精准称取平菇份，提取温度别离设定为60、70、80、90、100，在料液比130，提取时刻3h，提取2次，提取液真空抽滤，取滤液，浓缩。其余步骤同“。表1 正交实验因素和水平（路） 提取条件优化依照单因素实验结果,选取料液比、提取时刻、提取温度3项作为考察因素,在各因素最正确值周围别离取

10、3个水平进行正交实验，以多糖得率为正交实验的检测指标，优化提取条件。 工艺验证采纳优化挑选后的工艺技术线路重复实验3次，计算多糖提取率，考察工艺技术线路的稳固性。2 结果与分析 料液比对提取率的阻碍料液比是阻碍多糖提取率的关键因素之一。假设其他提取条件相同,不同加水量对多糖得率的实验结果如图1。由图1可知平菇多糖提取率随料液比的增大而提高，多糖提取率在料液比120至130明显提高，料液比在130至135之间又有所下降。因此在正交实验中，料液比选取12五、130、135三个水平。 提取时刻对提取率的阻碍提取时刻对多糖提取率的阻碍较大。假设其他提取条件相同,不同提取时刻对多糖得率的实验结果如图2。

11、由图2可知，平菇多糖提取率随提取时刻加大刚开始上升较大，至提取时趋于稳固。因此在正交实验中，提取时刻选取、三个水平。 提取温度对提取率的阻碍提取温度也是阻碍多糖提取率的直接因素之一。假设其他提取条件相同,不同提取时刻对多糖得率的实验结果如图3。由图3可知，多糖提取率在为60至70时有明显提高，抵达70后增加缓慢，90抵达最高点，100又略微有所下降。因此在正交实验中，提取温度选取80、90、100三个水平。 提取平菇多糖最正确条件的选择 通过以料液比、提取时刻、提取温度作为考察因素,按L9 (34) 正交设计,以粗多糖得率为考察指标,进行正交实验,结果见表二、表3。表2 水提平菇多糖正交实验结

12、果（略）表3 正交方差分析表（略） 直观分析从表2 能够看出,3个因素中以料液比极差最大,它对多糖得率阻碍最大,随着料液比的增加而提高。提取温度对多糖得率阻碍也较大。提取时刻对多糖得率的阻碍最小,随着时刻的延长,多糖得率12h 提高较快,23h 提高较缓。依照极差的大小初步判定,阻碍平菇多糖得率因素的大小别离是: 料水比>提取温度>提取时刻。通过实验结果直观分析能够得出,提取红平菇子实体多糖的最优工艺组合为料水比1:35,提取温度90,提取时刻3h，提取次数2次。 方差分析通过方差分析能够得出,料液比在3个因素中达到了显著水平,在进行提取时应当高度重视。而提取时刻和提取温度远远小于

13、显著水平,在提取时能够适当缩短提取时刻,提高效率,从而节约能源增加效益。 工艺验证采纳优化挑选后的工艺技术线路重复实验3次，计算多糖提取率，结果如表4。表4 最正确工艺的验证明验（略）3 讨论 水提法是平菇多糖提取方式中研究和应用最多的一种方式，该方式简便、价廉、成效较好。本文通过对料液比、提取时刻、提取温度的考察，探讨了水提法提取平菇多糖最正确提取工艺条件。其最正确工艺条件为:料水比135 ,提取温度90 ,提取时刻3h,提取次数2次。提取多糖的工艺流程为:平菇子实体烘干粉碎加水调配热水浸提过滤浓缩乙醇沉淀离心干燥粗多糖。 目前多糖的含量测定方式有苯酚 硫酸法、3,5 二硝基水杨酸比色法、蒽

14、酮 硫酸法等。经郝强4研究以苯酚 硫酸法为测定菌类多糖最理想的方式，此法简单、快速、灵敏。本研究对苯酚 硫酸法通过方式学的考察，证明该法测定平菇多糖周密度高、稳固性和重复性好，适用于平菇多糖的测定。 料液比对多糖得率阻碍最大,随着料液比的增加而提高。因为料液比增大, 提取进程中两相浓度差相应增大，传质速度加速，多糖在溶剂中的量不断增加。当料液比增加到必然程度后，尽管两相中有效成份的浓度差仍然存在，但传质动力增加不大，因此多糖提取率增幅不明显。提取温度对多糖得率阻碍也较大，随着温度的升高而增大，温度高于100后得率又有所下降。因为温度太低,溶剂的渗透能力和溶解能力降低,多糖不能有效溶出；温度太高,致使多糖裂解,从而使多糖得率大幅度下降5。【参考文献】 1王立泽.食用菌栽培M.合肥:安徽科学技术出版社,1993:82 97.2程超,李伟.平菇多糖的提取条件及其沉淀特性研究J.研究与探讨, 2005,(8):92 94.3张惟杰.糖复合物生化研究技术M.杭州:浙江大学出版社,1999:11 12.4郝强.酸提香菇多糖的提取分离、结构鉴定及抗氧化活性研究D.华中农业大学,2020.5王卫国,赵永亮,韩山宝.香菇多糖分离纯化技术研究J.中国食用菌，2002,21(2):30 32.