动物实验报告Word格式.docx

1、此时固定针管及心脏的位置，继续采血。采血完成后拔出针头，用干棉球按压住针头的位置。（每次采血量可达45ml）。5、处死使用颈椎脱臼法处死，左手拇指和食指按住头颈部，右手抓住豚鼠的后肢，用力向后上方拉，注意快速有力，减轻动物的痛苦。6、豚鼠解剖将豚鼠放至在解剖版板上，仰卧位放置，充分暴露颈部、胸部和腹部。用湿毛巾润湿体表。用手术剪沿腹中线将豚鼠腹部和胸部的皮肤剪开，然后用手术剪将腹腔和胸腔剪开，暴露豚鼠腹部的内脏器官，先找到豚鼠的结肠，沿着结肠带寻找盲肠。仔细观察豚鼠腹腔和胸腔的各内脏器官。内部脏器观察：胸腔1）肺：共七叶，右肺四叶，左肺三叶；2）心脏：呈圆锥状，位于近胸骨端，心尖位于第六肋间；

2、3）胸腺：在颈部皮下气管两侧，位于下颌骨角到胸腔入口中间，有2个光亮、淡黄色、细长呈椭圆形、充分分叶的腺体，附着不牢固。腹腔1）肝：紧邻隔下，呈暗红色，分四个主叶和四个小叶，可见一光亮的胆囊附着于肝下；2）胃：胃壁非常薄。分两部，贲门部和幽门部，胃容量约20-30ml；3）肠：分小肠和大肠。小肠包括回肠、空肠和十二指肠，大肠包括结肠、盲肠和直肠。盲肠特别发达，占腹腔容积的1/3，占体重的15%；4）脾：脾斜卧在胃的左侧，呈深红色，长条扁平状；5）胰：一端紧贴脾脏，一端邻近十二指肠，不规则状且呈粉红色；6）肾：为黄豆大小，右肾比左肾位置稍高 ，肾脏前方有肾上腺（米粒大小），肾上腺较大；7）卵巢和

3、子宫：在肾脏前方见肉色带有颗粒样突起的腺体为卵巢，两侧卵巢下方各连有一条输卵管，输卵管连接于下方子宫，两侧子宫结合形成“V”字形，经阴道开口于体外。（二）新西兰兔用右手把两耳轻轻地压于手心内，抓住颈背部被毛与皮肤，左手托住其臀部，将其大部分重量落左手手掌上。用兔盒将家兔的头部及四肢固定，使其头部无法向后缩即为固定成功。 2、耳缘静脉采血 用兔盒固定家兔后，先拔去耳缘静脉注射部位的被毛，用手指轻弹兔耳使静脉充盈，或者用酒精棉擦拭耳缘静脉注射区使静脉充盈后，用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持静脉取血针头在耳缘静脉末端刺破血管，待血液漏出或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取

4、血，取血完毕用棉球压迫止血。一次最多可采5-10ml。3、耳中央动脉采血兔耳中央有一条较粗、颜色较鲜红的中央动脉，左手固定兔耳，右手持注射器，在中央动脉的末端，沿着动脉平行地向心方向刺入，即可见到动脉血进入针筒，取血完毕后注意止血。此法一次抽血可达15ml。4、灌胃给药灌胃需要两个人共同完成，一人将兔及兔固定器直立，一人插管。将导尿管从兔犬齿缺失处缓慢沿上颚插入食道。回抽针管，判断导尿管确实插在食管内以后，取注射器接在导尿管上，将生理盐水推入。一般量可达5-20ml/kg。5、麻醉 即耳缘静脉注射。以耳缘静脉采血的方式在耳缘静脉处进针，回抽针管后若有回血，则可将适量麻醉剂（按10%水合氯醛4m

5、l/kg的用量）。等待几分钟后观察家兔反应。若兔全身瘫软几乎不动为麻醉成功。6、处死（空气栓塞法） 以耳缘静脉采血的方式在耳缘静脉处进针，向耳缘静脉中注入一定量的空气（5ml*2即可），使之发生空气栓塞而致死。注射完空气后立刻将兔从固定器中取出，观察其体征，包括心跳节律。呼吸频率、鼻孔煽动、口唇黏膜颜色、瞳孔大小及身体其他部位体征，记录从注射到死亡的时间。7、家兔解剖将通过空气栓塞法处死后的家兔放至在兔板上，仰卧位放置，充分暴露颈部、胸部和腹部。用水将家兔的胸腹部的被毛充分润湿。用手术剪沿腹中线将家兔腹部的皮肤剪开，然后用手术剪将腹腔打开，仔细观察家兔腹腔的各内脏器官。再打开胸腔，注意不要从正

6、中打开胸腔，以免影响后续观察。胸腔：胸腔中间有纵膈将胸腔分为左右两部，互不相通。肺被肋胸膜隔开，心脏又被心包膜隔开。共七叶，右肺四叶，左肺三叶。呈圆锥状，位于近胸骨端，由左心房、左心室、右心房、右心室组成。腹腔：紧邻隔下，呈暗红色，可见一墨绿色的胆囊附着于肝下。 单室胃，胃底特别大。分为前小弯和后大弯分小肠和大肠，其总长度为体长的10倍。盲肠非常大，长约0.5米，容积占腹腔的1/3以上，与所有家畜相比兔的盲肠比例最大。在回肠和盲肠相接处膨大呈一个后壁，呈圆形，为圆小囊。脾斜卧在胃的左侧，呈深红色，长条扁平状。一端紧贴脾脏，一端邻近十二指肠，为分布零散而不规则状且呈粉红色，与脂肪相似但颜色不同。

7、为扁豆大小，右肾比左肾位置稍高 ，肾脏前方有肾上腺（米粒大小），每肾内侧各有一根输尿管，开口于膀胱背侧。7）雌兔有两个完全分离的子宫，左右子宫部分子宫体和子宫角，子宫颈分别开口于单一的阴道。四、实验结果及注意事项1. 豚鼠性情温顺，胆小怕惊，对外界的环境刺激敏感，注意不要使动物受惊。抓时不能太粗野，更不能用力抓腰腹，否则容易造成肝破裂而引起死亡。2. 解剖时可发现，豚鼠的肠道长度为体长的10倍，盲肠特别发达，占腹腔容积的1/3。3. 心脏取血：（1）很难精确定位在3-4肋间，主要靠指尖触摸心脏搏动来确定位置，需区分心脏搏动和呼吸的起伏，前面较快且范围小，后者较慢，可根据鼻翼煽动节律来辨别；（2

8、）确定穿刺位置，针头突破胸壁后，应一边回抽一边进针，不可进一点针再回抽一次，防止两次回抽间的进针已穿透心脏，而采不到血；（3）进针时避免反复上下，避免损伤肺脏；（4）豚鼠的最大安全采血量为5ml，最小致死采血量为10ml，采血时应注意采血量，避免造成豚鼠死亡。（二）家兔1. 家兔比较驯服，不咬人，但爪尖利，不正确的抓取容易被其抓伤。抓取时不要抓其两耳，也不要托拉四肢或提握腰部。根据实验需要进行固定。2.兔的盲肠比例亦大，回肠和盲肠相接处膨大形成一个厚壁的圆囊，称为圆小囊，实质为淋巴球囊，为兔所特有。3. 给兔灌胃时要注意：（1）兔的反应，插入气管的话兔会剧烈挣扎和呼吸困难，也可以将导尿管的外端

9、插入水中，如有气泡冒出，表示插在气管内，应拔出重插。（2）要从兔的犬齿缺失处进针，以免兔将导尿管咬烂；（3）向外拔导尿管的时候注意用手指捏紧外端再拔出。4. 耳缘静脉采血是给兔采血的最常用的方法，常多次反复使用，因此要注意保护耳缘静脉，防止发生栓塞。几个人轮流练习时要注意从远端向近端逐渐推进。5. 兔的处死。用空气栓塞法将兔处死后要立刻从笼中取出，放置在地面或者水槽中，因为可能会有抽搐、尿失禁等反应，本实验中从注射至死亡约4分钟。6. 圆小囊：色较黄、壁厚，具有发达的肌肉组织，内壁呈六角形蜂窝状，囊壁内富含淋巴滤泡，其粘膜不断分泌碱性液体，可以中和盲肠中微生物分解纤维素所产生的各种有机酸，有利

10、于消化吸收功能。实验四：小鼠无菌剖腹取胎、近交系小鼠皮肤移植及小鼠卵巢和睾丸切除手术技巧操作1、小鼠的睾丸及卵巢切除是目前实验动物手术操作中最基础的技巧，要求初步掌握手术操作的基本流程、术中的细节及了解术后护理；2、了解皮肤移植实验是一种用于鉴定近交系动物组织相容性基因是否一致的简单而可靠的方法，掌握近交系小鼠检测中常用的尾-背植皮和尾-尾植皮两种操作方法，初步掌握和分析植皮的结果与现象；3、通过实际操作，了解通过剖腹取胎术得到幼鼠的基本原理、操作和用途；孕鼠、KM小鼠（雌雄各一只）；2、实验器械与试剂：鼠笼、鼠板、5ml注射器、眼科剪、弯头镊、10%水合氯醛、手术剪、干棉球、酒精棉球；三、实

11、验内容1、小鼠的睾丸切除手术 小鼠常规麻醉，采用仰卧位，置于固定台上，轻压腹腔将睾丸推回阴囊，沿白色的阴囊壁正中线做1cm的切口，在中线左侧的隐囊包膜做5mm切口，向左侧挤推睾丸，找出输精管，用眼科镊夹住，用止血钳分离周边脂肪组织，在睾丸近端1-1.5cm处，穿两根单股手术缝线，相距1-2mm分别打结，结扎输精管，并在两个结中间剪断输精管。对侧重复同样的操作。随后缝合阴囊壁切口。2、小鼠卵巢切除手术（观摩同组其他同学） 小鼠卵巢切除术多采用背部切口。小鼠常规麻醉，采用俯卧或侧卧位，置于固定台上，以肋下0.5cm，脊柱处1cm为中心剪除或拔出长毛，常规消毒，切口约0.5cm，切开皮肤，一边扩张一

12、边钝性分离，用眼科镊夹住创口看到的肌层，在离脊柱肋下剪开腰肌长约0.5cm切口，立即可见两侧包绕卵巢的脂肪组织及紧密相连的子宫角，用弯镊带环镊轻轻夹住脂肪组织将其拉出创口，在子宫角上部及下部的输卵管的部位做两个结扎，结扎后用环形镊或眼科剪切断子宫角，将卵巢摘除，检查有无出血，把脂肪组织推回腹腔内，将腹膜与肌层一起缝合，缝合皮肤。背部切口创伤小，直观，视野清楚，易操作，不需牵拉其它脏器，手术时间短。3、近交系小鼠皮肤移植实验 与同组同学合作，选择尾-尾移植的方法。麻醉动物，用75%的酒精棉球，消毒动物的尾部以及手术者的双手，随后用左手食指与中指夹住小鼠尾根，拇指与无名指夹紧鼠尾的尖部。右手用手术

13、刀在尾皮上割一块长约0.75cm长的尾皮，刀口深度应露出白色的健，但又不割坏血管。这样即提供了一块供体植皮，又得到一处受体植床。取下皮片后，将皮片手术刀从右手方向转到左手方向，这样皮片也就旋转了180度，使皮片上的毛与尾部的毛长向相反，然后用眼科镊将植皮镶嵌到异体的尾部植床上，用滤纸轻轻地来回按几下皮片，使其尽可能紧贴在上面，本次实验由于时间限制，不进行结果观察。4、孕鼠剖腹取胎实验1）以颈椎脱臼法将孕鼠处死后，迅速以仰卧位固定小鼠于动物固定板上，暴露腹部手术部位进行酒精消毒；（注意处死动作要快，勿用力按压腹部，防止胎儿受损。）2）用剪刀沿腹中线剪开腹部皮肤、腹肌和腹膜，打开腹腔可以看见串珠状

14、子宫，用止血钳分别夹住子宫颈部和两侧卵巢韧带，剪断后取出子宫。剪开子宫，打开羊膜，剥除胎盘。3）用棉球擦拭幼鼠，将新生鼠放在手心快速震动促使新生鼠开始呼吸，待新生鼠呼吸，血循环正常后，以止血钳扎断脐带。4）本组孕鼠经剖腹产手术得到14只小鼠。由于孕周未到，均未存活。1、近交系小鼠常用的皮肤移植试验皮肤移植实验是用于鉴定近交系动物组织相容性基因是否一致的简单而可靠的方法。（1）尾-背移植：将小鼠尾部皮肤移植到同品系的异体小鼠的背部，通过观察移植皮片和背部其他区域的毛发稀疏和皮肤光泽异同来鉴定二者的组织相容性。如果组织相容性好，植皮色泽与周围一致，没有充血或炎症，移植皮片毛少而光泽。若组织相容性基

15、因不纯合，尾皮在术后13周内被排斥，植皮脱落，背部留下一块伤痕。另外，供体皮片应略大于受体创面以充分吻合，以免因皮片边缘缺血坏死而导致愈合后创面周边皮肤不连续。（2）尾-尾移植：在一组近交系内，将小鼠尾部的皮肤轮换移植到另一个小鼠的尾部。此方法既可以同时做几只，省时间；且有自体移植，还可以用于鉴定植皮的脱落是排斥反应还是手术失败造成的。（3）自体尾-尾移植：可以鉴定植皮的脱落是否是手术失败而造成。移植时应将皮片旋转180，以利于术后通过毛发生长的方向观察植皮是否存活。2. 皮肤移植结果的观察及判断（1）皮片在1-3周内苍白、干瘪、脱落，则为手术失败。对照自体移植，手术失败率不得大于10%；（2

16、）皮片在2-3周内发炎、水肿、坏死、结痂直直脱落，则为急性排斥。遗传污染通常引起急性排斥。（3）皮片在3-9周内逆毛逐渐脱落，直至无毛；或者因排斥留下凹陷瘢痕，都为慢性排斥。遗传突变通常引起慢性排斥。皮肤移植实验是一种验证所培育的群体是否达到近交系，为进一步研究分析动物间的血缘关系和遗传距离提供可靠的依据。3. 小鼠卵巢切除术的切口在背部，原因在于其解剖特点。背部切口创伤小、直观视野清楚、易操作，不需牵拉其他脏器，手术时间短。4. 小鼠无菌剖腹产的实验原理：由于胎盘屏障的作用，在一般情况下，因体内的正常微生物菌群及大多数病原微生物不能通过胎盘感染胎仔，因此胎仔不论体表还是体内都处于无菌状态，通

17、过无菌剖腹获取胎鼠由无菌母鼠代乳，并维持仔鼠于无菌隔离器中，这是获得无菌动物的唯一途径。但由于条件所限，本实验仅用于熟悉操作，对无菌操作无严格要求，实验在实验台上完成即可。5. 小鼠无菌剖腹取胎的成功率取决于时机（即将临场为宜）及操作的技术，要注意速度快。实验五 大鼠阴道涂片、肺水肿模型及其它示教实验1. 通过实际操作，掌握大鼠阴道涂片的制作方法及性周期的观察；2. 强化实验动物疾病模型的基本概念，掌握诱发性急性肺水肿动物模型的建立方法，观察肺脏的病理变化；3. 通过试教初步了解裸鼠肿瘤接种的流程及操作技巧，C57BL/6小鼠、比格犬的年龄判断、前肢背桡外侧静脉和后肢侧皮下小静脉的采血操作。1

18、. 实验动物：SD大鼠，裸鼠，C57BL/6小鼠，比格犬；2. 实验材料：毛细滴管、载玻片、酒精灯、生理盐水、吉姆萨染色液、846合剂、手术剪、手术镊、2ml注射器、5ml注射器、干棉球、酒精棉球、绷带、橡皮绑带、显微镜。1. 大鼠阴道涂片及性周期观察2. 大鼠急性肺水肿模型的建立3. 裸鼠肿瘤接种的试教实验4. 比格犬年龄判断5. 比格犬前肢背桡外侧静脉、后肢侧皮下小静脉采血6. C57小鼠的观察四、实验方法与步骤哺乳类动物在性成熟后出现动情周期变化，其中啮齿类动物在动情周期不同阶段引导粘膜发生比较典型的变化。因此可将阴道分泌物涂片染色，根据图片的细胞学改变来鉴别性周期的不同阶段。左手抓住大

19、鼠，食指和中指卡紧大鼠颈部，无名指与小拇指握住胸部，小指压住腹部，右手拉住尾巴稍用力向后拉，以充分暴露雌鼠阴道。用滴管吸生理盐水1ml，然后插入大鼠阴道深部反复冲洗4-5次，吸出洗液滴一滴涂于载玻片上，用酒精灯将片子烘干。用吉姆萨染液染色30min，流水冲洗，在显微镜下观察。实验中观察到聚集的有核细胞，无核细胞均有，且细胞量少，估计该大鼠处于发情间期。称取大鼠重量为177g。左手抓住大鼠，食指和中指卡紧大鼠颈部，无名指与小拇指握住胸部，小指压住腹部，右手拉住尾巴稍用力向后拉，腹腔注射2mL 8%氯化铵溶液，观察大鼠一般情况与呼吸状况，存活时间。实验中见6分钟后大鼠出现轻微抽搐，15分钟后全身僵

20、直，伴有较为剧烈的抽搐，持续1-2分钟后抽搐停止，保持全身僵直的状态，但未死亡。大鼠死亡后进行解剖，打开胸腔，找到两侧肺组织，剪断气管，取出双肺。实验中观察到双肺肿胀但程度不是非常明显，颜色变深，布满暗红色纹理，严重红细胞浸润。称重为1.4g，肺重量系数为0.8。 采用细胞悬液接种法。注射器吸取适量细胞悬液注射与裸鼠皮下，部位看实验要求而定，一般在腋下或背部皮肤，每个接种部位注射0.1-0.2mL。将培养的细胞收集跳刀适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，直接注射即可。裸小鼠较脆弱，注意操作温柔，切勿用力，避免裸鼠死亡。4. 比格犬年龄判断及前、后肢采血实验判断狗的年龄，主要依靠狗牙齿的磨

21、损和脱落情况。狗出生后十几天即生出乳齿，两个月后开始由门齿、犬齿、臼齿逐渐换为恒齿，六个月门齿长齐，8-10个月恒齿换齐，但需要1岁半以后牙齿才能生长坚实，年龄越大，牙齿磨损更严重，且颜色变深。实验所用比格犬四颗门齿基本长齐，犬牙较尖较细，估计年龄为接近六月龄。一人抓比格犬颈部皮肤固定头部，另一人吸取狗麻醉剂846合剂，注射在其臀部。待狗较为萎靡时，用纱布固定其嘴部，纱布将比格犬嘴部紧密缠绕两圈后系于而后头部，以免被咬伤，因为注射了麻醉剂，为防止比格犬窒息，绑嘴部时与平时所用方法不同，纱布要经过口内，拉出舌头。比格犬性情温顺，若对比较狂躁、性情不温顺的犬必须固定嘴部。前肢背桡外侧静脉位于前脚爪

22、的上方外侧正前位，用橡皮绑带绑在比格犬前置上部，找到内侧皮下静脉，右手用6号或7号针头迅速刺穿静脉，左手放松将针固定，以适当速度抽血，以无气泡为宜，抽血失败时从远心端向近心端扎针。后肢外侧小静脉位于后肢胫部下三分之一的外侧浅表皮下，由前侧方向后行走，将胶皮带绑在狗股部，将抽血部位毛剪去，酒精消毒皮肤，找到静脉采血即可。一只狗一般采10-20ml血并不困难。6. C57BL/6小鼠的观察1 大鼠性周期观察（1）大鼠性周期为45天，由于大鼠有昼伏夜行的习性，一般在下午不能看到大鼠的发情期。本大鼠处于发情间期：显微镜下看到大鼠发情间期的部分改变：有核细胞和少量上皮细胞，也看到少量白细胞。（2） 大鼠

23、的阴栓一般在24小时后脱落。所以观察期间笼具必须保持整洁，不能放置刨木花。看到阴栓说明交配成功，受孕率为7080%。（3）大鼠性周期阴道脱落细胞变化情况如下表所示（1）2ml 0.8%的氯化铵剂量腹腔注射后，实验中见6分钟后大鼠出现轻微抽搐，15分钟后全身僵直，伴有较为剧烈的抽搐，持续1-2分钟后抽搐停止，保持全身僵直的状态，但未死亡，可能原因：称重欠准确；药品浓度未达到标准浓度；个体对药物的反应有差异。但并未追加NH4Cl，颈椎脱臼处死后取出肺脏。（2）大鼠死亡后进行解剖，打开胸腔，找到两侧肺组织，剪断气管，取出双肺。称重为1.4g，肺重量系数为0.8，造模不成功。总结几点经验：（1）本组大

24、鼠出现呼吸改变反应的时间相对长，可能是药物量不足的原因；（2）颈椎脱臼处死时过于用力挤压大鼠的胸腔，挤出很多带泡沫的血红色液体，可能因此影响了肺脏称重；（3）解剖时，在肺门处结扎，分别取下两侧肺脏，没有包含气管的重量，可能因此造成重量较小。3. 氯化铵导致大鼠急性肺水肿的机制可能为（1）氯化铵进入体内破坏了体液平衡，使得肺泡比毛细血管通透性增加，致肺泡壁气-血、气-液屏障破坏，大量浆液渗向肺间质及肺泡；（2）氨是神经毒性物质，高浓度的氨与三羧酸循环中间产物结合，导致其无法正常运转，ATP生成收到严重阻碍，脑功能受损，从而引起大脑皮层功能抑制，皮层中枢兴奋性增高，引起机体抽搐，同时心肌收缩力加强

25、、心率加快、心肌耗氧量增加，使得皮肤、黏膜及内脏小血管收缩，导致体循环血管和肺血管剧烈收缩使得心脏后负荷明显增加，打破Starling定律平衡引起动力性水肿。4.本次用作示教的两种小鼠（1）C57BL/6：标准简称为B6, 是一种常见的近交品系实验鼠。在遗传学试验中广泛用作转基因鼠（knock-in,knock-out）以模拟人类的基因缺陷类疾病。因其可用作同类系、易于繁殖和体格健壮等特性，是使用范围最广、销量最好的一支鼠株品种。低发乳腺癌，对放射性耐受强，对逃避侵袭反应性不敏感。乳腺癌少发，难以致癌。（2）裸鼠：本次使用的小鼠无毛，T细胞缺失，B细胞部分缺失，是平时使用的最低水平的免疫抑制小鼠，用于肿瘤诱导的造模。颈后背、肩胛处皮肤松弛，可以做肿瘤细胞接种。