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1、2.2.2水溶性维生素含量 112.2.3 有机酸的色谱图 112.2.4 有机酸含量 122.2.5 脂溶性维生素的色谱图 132.2.6 脂溶性维生素含量 143 全文总结 15参考文献 17引 言阳山水蜜桃素有“果大色美、皮薄肉厚、汁多味甜、香气浓郁”的优点。果实细腻、口感好、容易消化，适合于各种年龄层的人食用，更适宜中老年人、妇女、小孩及体弱病人。水蜜桃有健美皮肤、清胃、润肺、祛痰利尿的功能；正如本草纲目所叙：“桃可作脯食，益颜色，肺之果，肺病宜食之。”水蜜桃种类较多，如大白凤、小白凤、湖景等。水蜜桃可分成早桃和晚桃。早桃成熟期在六七月份，晚桃成熟期在七八月份。另外，具体的来看，阳山水

2、蜜桃又有很多品种。比如：黄狼桃，甘甜水少，肉皮分离；白花桃，色泽青白，肉质甜美；湖景桃，为无锡水蜜桃金牌桃；朝晖桃，肉质清脆，果型较大；白凤桃，色泽鲜艳，桃香甜淡；晚朝阳，口感甘甜，皮肉联体；雪蜜桃，皮薄汁浓，味道鲜美；朝阳桃，口感甘甜，保存期长；雨花露，果型均匀，色泽光润；等等。阳山水蜜桃在国内外声名赫赫，先后获得“江苏省重点名牌产品”、“中国名牌产品”、“中国绿色食品”、“中国水蜜桃之乡”、“江苏省水果十大果品之首”、“江苏省著名商标”等许多荣誉称号。被称为中国水蜜桃之乡的阳山镇，地处江南水乡，南临美丽的太湖，北靠京杭大运河，历史悠久，人文荟萃，经济发达，环境优美，水陆交通便捷，旅游资源丰

3、富1。阳山与山东肥城、河北深州、浙江奉化并称为全国四大传统产桃区。阳山的水蜜桃属于软桃那一种，以果型大、色泽美、香气浓、皮薄肉厚、汁多味甜、风味独特而在国内外名闻遐迩。阳山水蜜桃性温，味甘酸，是消暑止渴、清热润肺的佳品，素有“肺之果”之称2。在烈日炎炎的盛夏，正是品尝水蜜桃的最佳时节。成熟的水蜜桃略呈球形，表面裹着一层短短的绒毛，青里泛白，白里透红。一个桃子一般重二百克，大的重300多克。水蜜桃皮很薄，果肉丰富，宜于生食，入口滑润不留渣滓。刚熟的桃子硬而甜，熟透的桃子则软而多汁。这样的果品，对于老年人和牙齿不大好的人来说，是难得的夏令珍品。阳山水蜜桃含有多种营养成分，曾有数据显示，每百克水蜜桃

4、可食部分含有蛋白质0.8 g，脂肪0.1 g，碳水化合物7 g，粗纤维4.1 g，钙8 mg，磷20 mg，铁1 mg胡萝卜素0.01 mg，尼克酸0.7 mg，维生素C 6 mg。营养学家在分析比较后，确定其中蛋白质的含量比苹果、葡萄高一倍，比梨多七倍；铁的含量比苹果多三倍，比梨多五倍。因此在国内外水果市场上被称为“果中皇后”。从水蜜桃目前的市场来看，其市场潜力也很大。阳山水蜜桃主要采用统一商标、统一包装、运往上海、南京、无锡等城市大超市（如麦德隆、家乐福、苏果、天惠）销售。在解决了水蜜桃贮运保鲜问题后，近年来，阳山水蜜桃已经打通出口环节，把水蜜桃销往泰国、新加坡、日本等地。据阳山镇副镇长、

5、镇桃农协会会长周九兴介绍，销往泰国的阳山水蜜桃市场价为每公斤289泰铢（折合人民币65元）。比国内市场售价高出6倍左右，最好的阳山水蜜桃目前在泰国卖到48元一只，而且供不应求3。本文选用水蜜桃的两个品种阳山红花和小湖景为样，以高效液相色谱法为主要检测手段，对水蜜桃中维生素（VB1、VB2、VC、VD、VE、烟酸）和有机酸（苹果酸、柠檬酸、琥珀酸）的含量进行测定，并对实验结果进行分析比较，使人们对阳山红花和小湖景两个品种的水蜜桃的几种营养成分含量有更准确的认识，同时也为以后人们进一步研究水蜜桃的营养价值奠定基础。1 材料与方法1.1实验原料和仪器原料：水蜜桃阳山红花（阳山水蜜桃试验基地，产于无锡

6、） 水蜜桃小湖景（阳山镇花园村俞化，产于无锡）试剂：分析纯磷酸（上海化学试剂有限公司）、色谱纯乙腈（山东禹王实业有限公司）、色谱纯甲醇（山东禹王实业有限公司）、pH2.0磷酸盐缓冲液（H3PO4-NaH2PO4）、纯净水（娃哈哈集团）、分析纯焦性没食子酸（天津市科密欧化学试剂开发中心）、分析纯氢氧化钾、分析纯石油醚（上海化学试剂有限公司）、分析纯无水乙醇（上海中试化工总公司）；流动相经0.45m滤膜过滤。标准品:烟酸（上海源聚生物科技有限公司）、抗坏血酸/Vc（天津市科密欧化学试剂开发中心）、Vitamin B1（南京创鑫生物技术有限公司）、Vitamin B2（博泰生物技术有限公司）、有机酸

7、（中国药品生物制品检定所）、Vitamin D（中国药品生物制品检定所）、Vitamin E（中国药品生物制品检定所）。仪器：微孔滤膜/混合纤维膜（上海市新亚净化器件厂） 注射器（金玻璃注射器200mL） 打浆机（多功能878-B，金坛市富华仪器有限公司） 离心机（型号3K15，博励行仪器有限公司） 高效液相色谱仪（Agilent1100型，二级管阵列检测器） 超声波清洗器（型号UP3200H，熊猫集团南京电子计量有限公司） 水浴锅（HH-2，常州国华电器有限公司） 旋转蒸发仪（RE-52AA，上海亚蒸生化仪器厂）1.2 实验方法1.2.1样品前处理1.2.1.1水溶性维生素和有机酸测定的样品

8、前处理水蜜桃，洗净，取样200g打浆转移至离心管中，转速3000r/min，室温下离心15min吸取上层清液定容至200mL取5mL以0.45m滤膜过滤置于冰箱保藏，待测4。1.2.1.2 脂溶性维生素测定的样品前处理适量样品，加入40mL的16g/L焦性没食子酸和20mL 50%的氢氧化钾，于80水浴30min（避光）；取出后加入等体积的石油醚萃取3次（可先离心），合并上层石油醚相，转移至旋转蒸发仪（135）蒸干后，用10mL甲醇分三次溶解，再以0.45m滤膜过滤，于冰箱保藏，待测。1.2.2 标准溶液及标准曲线的制备1.2.2.1水溶性维生素和有机酸标准曲线的制备准确称取各标准品适量（精确

9、至0.1 mg），用超纯水超声波溶解并定容至100mL容量瓶中，作为各标准样母液；临用时稀释为7个浓度梯度溶液；其中，有机酸母液浓度为2.5mg/mL，稀释后梯度浓度为1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.01，单位为mg/mL；VB1、VC和烟酸的母液浓度为1mg/mL，VB2的母液浓度则为0.2mg/mL。1.2.2.2 脂溶性维生素标准曲线的制备准确称取各标准品适量（精确至0.1 mg），用超纯水超声波溶解并定容至100mL容量瓶中，作为各标准样母液（2.5mg/mL）；临用时稀释为5个浓度梯度溶液，为1、0.5、0.025、0.01、0.005，单位为mg/mL。1.

10、2.3 色谱条件1.2.3.1水溶性维生素和有机酸的色谱条件色谱柱：美国Agilent公司生产的ZORBAXSB-C18column RT 250mmX4.6mm，填料直径为5m；柱温为28。梯度洗脱：VB1、VB2、VC和烟酸采用梯度洗脱，流动相5为：（50mmol/L）见表1。有机酸流动相6为甲醇：H3PO4-NaH2PO4缓冲液（0.01mol/L，pH=2.0 ） （2:98），使用前均用0.45表1 维生素测定所用的流动相及比例磷酸乙腈0min100%0%6min60%40%流速均为：1mL/min；进样量20l。检测波长：VB1检测波长为270nm，有机酸检测波长为210nm，其余

11、为254nm。1.2.3.2脂溶性维生素的色谱条件色谱柱7：美国Agilent公司生产的ZORBAXSB-C18 column RT 250mmX4.6mm，填料直径为5流动相：流动相为甲醇。流速：流速均为1mL/min；VD检测波长为265nm、VE检测波长为290nm。1.2.4 实验操作步骤1.2.4.1水溶性维生素和有机酸测定的操作步骤前处理：取两个品种的水蜜桃样品阳山红花和小湖景各适量，编号，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当大小的块状，充分混匀后，按四分法取样200g，分别放入组织捣碎机中打成匀浆；转移至离心管中，转速3000r/min，室温下离心15min；吸取上层清液定容至20

12、0mL，取其中5mL以0.45m滤膜过滤，置于冰箱保藏，待测。检测：高效液相色谱仪检测。1.2.4.2脂溶性维生素测定的操作步骤取水蜜桃样品两个品种阳山红花和小湖景适量，编号，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当大小的块状，充分混匀后，按四分法取样100至200g，各加入40mL的16g/L焦性没食子酸和20mL 50%的氢氧化钾，于80水浴30min（避光）；取出后各加入等体积的石油醚萃取3次（可先离心），合并上层石油醚相，分别转移至旋转蒸发仪（135）蒸干后，用10mL甲醇分三次溶解，再以0.452结果与分析2.1 标准曲线2.1.1 水溶性维生素标准曲线水溶性维生素标准曲线见表2和图1。V

13、B1 y=40234x+98.916 R2 =0.9993 0.50.0025mg/mLVB2 y=40723x+154.15 R2 =0.9968 0.20.0005mg/mLVc y=39719x+69.631 R2 =0.9999 0.50.0025mg/mL尼克酸 y=28254x+31.70 R2 =0.9998 0.50.0025mg/mL表2 水溶性维生素标准曲线浓度记录浓度mg/mLVcVB1VB2尼克酸10.519873.119995.314080.2 0.2510059.910567.87215.40.28157.20.14141.94216.74457.72968.70.

14、052136.02119.11418.70.021224.80.0251056.01075.6737.20.01421.0435.4627.3274.60.005208.0210.1323.1130.90.002128.70.002596.592.057.30.00166.60.000532.6图1 水溶性维生素标准曲线2.1.2 有机酸标准曲线有机酸标准曲线见表3、表4和图2。表3 有机酸标准曲线方程方 程相关系数线性范围琥珀酸y=1790.4x+8.7663R2 =12.50.001mg/mL柠檬酸y=1041.8x+10.858R2 =0.9998苹果酸y=954.78x+9.691R2

15、 =0.9997表4 有机酸标准曲线浓度记录2.52384.02602.44476.21.0990.11078.01813.6499.8546.1916.70.25251.3276.0460.8100.6110.0185.550.155.493.425.227.945.410.911.518.8图2 三种有机酸标准曲线2.1.3 脂溶性维生素的标准曲线脂溶性维生素（维生素D、维生素E）标准曲线见表5，图3。VD y=61968x+58.454 R2 =0.9902 0.0250.005mg/mLVE y=25663x+33.692 R2 =0.9924 0.0250.005mg/mL表5 VD

16、、VE标准曲线浓度记录浓度VDVE1589.9668.8749.2316.2315142.6图3 VD、VE标准曲线2.2 色谱图分析2.2.1 水溶性维生素的色谱图2.2.1.1 VB1液相色谱图图4、图5为无锡水蜜桃阳山红花和小湖景两个样品VB1的液相色谱图。图4 阳山红花VB1液相色谱图图5 小湖景VB1液相色谱图 2.2.1.2 VB2、VC和尼克酸的液相色谱图图6、图7是无锡水蜜桃阳山红花和小湖景VB2、VC和尼克酸的液相色谱图。图 阳山红花VB2、VC和尼克酸的液相色谱图图 小湖景VB2、VC和尼克酸的液相色谱图从无锡水蜜桃阳山红花和小湖景两个品种样品的VB1色谱图中我们可以看出，

17、维生素B1的出峰时间约为4.941分钟。对比图6、图7，无锡水蜜桃阳山红花和小湖景VB2、VC和尼克酸的液相色谱图，VB2出峰时间约为7.204分钟，VC出峰时间约为7.850分钟，尼克酸出峰时间约为8.371分钟。在VB1色谱图中同样我们可以看出VB2、VC和尼克酸三种维生素在波长为270nm下的出峰情况，但对比图6和图7可以看出VB2、VC和尼克酸三种维生素在波长为254nm下出峰效果更好。实验中，笔者主要是根据出峰情况来判定是否出现主成峰，其中主要看其出峰的时间与标准品进样得到的图谱进行对比，进行初步判定。本次实验测定的项目并没有包含水蜜桃中所有的营养组分，比如此部分我们所测定水溶性维生

18、素是以VC、 VB1 、VB2和尼克酸四种常见的水溶性维生素为代表，而事实上水溶性维生素远不止这三种。以B族维生素为例，除了VB1和VB2以外，还有VB6、VB12、泛酸生物素和叶酸，另外不常见的胆碱和肌醇人们也习惯将其划分为B族维生素。在水溶性维生素中，以VB1、VB2、尼克酸（PP）和VC对机体的代谢调节最为重要。因此，在上述维生素液相色谱图中，我们还看到尾随的很多小峰，可能就是其他水溶性维生素多种，但由于条件和时间的限制，本实验没有作进一步的研究。2.2.2水溶性维生素含量根据水溶性色谱图以及相应的标准曲线，得出阳山红花和小湖景两个水蜜桃品种样品中维生素的含量，见表6。表6 两个水蜜桃品

19、种的维生素含量（mg/100g）（g /100g）小湖景3.2115.2511.270.375阳山红花2.1416.1012.080.258从表6我们可以看出，阳山红花和小湖景两个水蜜桃品种中水溶性维生素含量存在差异：2.2.3 有机酸的色谱图图8、图9是无锡水蜜桃阳山红花和小湖景有机酸的液相色谱图。图 阳山红花有机酸液相色谱图图 小湖景有机酸的液相色谱图从图8和图9阳山红花和小湖景的有机酸液相色谱图，我们可以看出苹果酸、柠檬酸和琥珀酸三者的出峰时间分别是2.221、3.270和6.290分钟左右，有机酸出峰时峰形略显连带现象。水蜜桃中同时还含有酒石酸和乳酸等其他有机酸，所以有机酸色谱图中出现

20、了其他有机酸峰，由于实验条件和时间的限制本次实验并没有作进一步研究进行一一鉴定。2.2.4 有机酸含量根据有机酸液相色谱图以及相应的标准曲线，得出阳山红花和小湖景两个水蜜桃品种样品中有机酸的含量，见表7。表7 两个水蜜桃品种的有机酸含量苹果酸（mg/100g）柠檬酸（mg/100g）琥珀酸（mg/100g）28918 78 18143 73根据表7结果，对比两个水蜜桃品种所含的三种有机酸，我们可以看出阳山红花和小湖景两个水蜜桃品种中的有机酸和维生素含量存在差异：就有机酸中的苹果酸而言，小湖景为阳山红花的1.6倍；2.2.5 脂溶性维生素的色谱图2.2.5.1阳山红花脂溶性维生素液相色谱图图10

21、 阳山红花VD液相色谱图图11 阳山红花VE液相色谱图2.2.5.2小湖景脂溶性维生素液相色谱图图12 小湖景VD液相色谱图图13 小湖景VE液相色谱图从VD、VE色谱图中我们可以看出，该法测定VD、VE两种脂溶性维生素的效果并不是很好，尾随的杂质峰很多，而且峰与峰之间连在一起。笔者初步断定样品中还有其他类似于VD、VE结构的其他物质，由于条件和时间的限制，本实验没有作进一步的研究。目前，采用液相色谱法测定含脂溶性维生素样品中各种成分的含量，重要的是样品的前处理。样品采集后要尽快地制备成适合色谱分析的样品，以便进行色谱分析，尤其是含有脂溶性维生素的样品，如果不及时进行前处理，样品中的脂溶性维生

22、素含量会逐渐降低，这样会影响测定结果的准确度。经典的样品处理方法是用氯仿、乙腈、石油醚、乙醚等做萃取液，经过样品与萃取液混合、pH调节、组份萃取液的回洗、附加的pH调节成二次溶剂分配完成萃取8。这种方法被广泛使用于组份的分离、提取或纯化。在进行高效液相色谱分析时，应根据所选样品和所测成分的不同选用合适的液相色谱法。当所测样品不同时，选用的固定相、流动相和检测器也不相同。脂溶性维生素常用的分离检测方法有液相色谱与紫外检测器（包括二极管阵列检测器DAD）、荧光检测器、电化学检测器等9。2.2.6 脂溶性维生素含量根据脂溶性维生素液相色谱图以及相应的标准曲线，得出阳山红花和小湖景两个水蜜桃品种样品中

23、两种脂溶性维生素的含量，见表8。表8 两个水蜜桃品种的脂溶性维生素含量0.01950.01170.034根据表8，可以明显看出两个品种水蜜桃样品中所含脂溶性维生素VD、VE含量很低，小湖景VD 0.0195 mg/100g，VE0.0117 mg/100g；阳山红花VD 0.02 mg/100g，VE0.034 mg/100g。两者所含的VD含量差不多，而VE阳山红花则是小湖景的2.9倍。一般来说，水果中营养成分主要看其水溶性维生素、有机酸和矿物质的含量，而脂溶性维生素含量本身就很低，实验结果与此也符合，故最后可以考虑忽略水蜜桃中脂溶性维生素（VD、VE）的含量不计。3 全文总结本文以无锡水蜜

24、桃的两个品种阳山红花和小湖景为样，采用高效液相色谱法对水蜜桃中维生素（VB1、VB2、VC、VD、VE、烟酸）和有机酸（苹果酸、柠檬酸、琥珀酸）的含量进行测定。结果如下：1、水溶性维生素：2、有机酸：3、脂溶性维生素：两个品种水蜜桃样品中所含脂溶性维生素VD、VE含量很低，小湖景VD 0.0195 mg/100g，VE0.0117 mg/100g；色谱法对多种维生素的同时测定已取得较大的进展。但整体来说，维生素结构多样、成分复杂且pH值差别大，目前实现的也只是几种维生素的同时测定，成熟的分离条件还需要进一步的优化。可以看到HPLC和HPCE（高效毛细管电泳法）技术在多种维生素同时测定方面有着其

25、他技术难以比拟的优势10，其中HPLC是相对较成熟的方法，在样品及柱的制备方面优于HPCE，而对于HPCE难于解决的问题：如难于准确定量、主成分峰后尾随痕量杂质等问题，应用HPCE方法得到了很好的解决，HPLC与HPCE技术之间具有很大程度的互补性。在继续探讨HPLC与HPCE各自在同时测定多种维生素最优条件的同时，两种方法联用应能更好的解决多种维生素同时测定的问题11。参考文献1 无名.中国水蜜桃之乡-阳山镇N.国内统一连续出版物号:CN11-4904/D.2 张惠明,俞显峰.七里桃乡都是甜N.YANGTZE DELTA,2007,第8期.3 王健梅.无锡水蜜桃热销泰国N.中国农业信息,2006,第04期.4 刘晓琳,武谷,钟淮滨.HPLC法测定复合维生素B溶液中族维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺的含量J.中国药事,2003,17（4）:241-242.5 张高旗,梁炽琼.预混合饲料中多种水溶性维生素的快速测定J.广东饲料，2003,12（3）:39-41.6 董彩霞,董园园,王健.同一流动相测定植物体内12种有机酸和维生素C的高效液相色谱法J.土壤学报,2005（2）:331-335.7 李忠,彭光华,