外源钙对盐胁迫下玉米幼苗生长的影响毕业论文Word文件下载.docx

1、摘 要：本试验以蠡玉68玉米种子为材料，研究不同浓度Ca2+对不同程度盐胁迫下玉米幼苗生长情况的影响。对玉米幼苗叶片中叶绿素、丙二醛、脯氨酸的含量进行测定。结果表明：在低等盐浓度（50 mmol/L的NaCl）下，施加0.05%的CaCl2能有效提高玉米叶绿素含量；施加1%的CaCl2可以有效提高脯氨酸的含量；而施加CaCl2后丙二醛含量却有程度不同的提高。在中等盐浓度（150 mmol/L的NaCl）下，施加0.1%的CaCl2能有效提高玉米叶片中叶绿素含量；施加0.1%的CaCl2能有效提高玉米叶片中脯氨酸的含量。而丙二醛含量却有不同程度的升高。在高等盐浓度（250 mmol/L的NaCl

2、）下,施加1%的CaCl2能有效提高玉米叶片中叶绿素的含量；施加0.05%的CaCl2能有效提高玉米叶片中脯氨酸的含量；而丙二醛含量却有不同程度的增高。不同浓度外源钙的施加可以有效提高不同盐浓度下的玉米幼苗叶片中的叶绿素和脯氨酸含量。从而保障玉米幼苗能够维持正常的生理功能代谢以及正常的生化反应。关键字： 玉米；盐胁迫；外源钙Title: effect of exogenous calcium on growth of Maize Seedlings under Salt StressAbstract: in this experiment, Liyu 68 corn seed as mater

3、ial, salt stress with different concent -ration of NaCl were measured in simulation, chlorophyll, MDA and proline index, the effects of different concentration of NaCl on MaizeSeedling Physiological and biochemical, s -etting different Ca2+ concentrations,alleviate the effect of different concentrat

4、ions of Ca2+ on differe -nt levels of salt stress. The results show that: with the increase of NaCl concentrate ion, a gra dual increase in the degree of salt stress, exogenous calcium concentration can alleviate the effects of different.Keywords: Maize; salt stress; exogenous calcium目 录摘 要 I关键字 I1

5、绪论 42 材料与方法 52.1供试材料 52.2材料处理 52.2.1 沙子的处理 52.2.2 玉米种子的的处理 52.2.3 玉米幼苗的处理 52.3 指标测定和数据分析 52.3.1 叶绿素含量测定 52.3.2 丙二醛含量的测定 62.3.3 脯氨酸含量的测定 62.4 数据处理 63 结果与分析 73.1 外源钙对盐胁迫下玉米幼苗叶绿素的影响 73.2 外源钙对盐胁迫下玉米幼苗丙二醛的影响 83.3 外源钙对盐胁迫下玉米幼苗脯氨酸含量的影响 94 结论与讨论 101 绪论玉米作为北方的主要粮食作物之一，同时在畜牧业饲料来源和工业加工重要原料中占有重要地位。当土壤出现盐渍化情况时，会

6、对玉米的生长产生不利影响，据资料显示，衡水市位于河北东南部，地处河北冲积平原，华北平原腹地。全市范围内除了安平县均存在耕地土壤盐渍化现象。目前，由于受到不利因素的（工业化、城镇化及其他不利因素）影响，耕地盐渍化程度仍在加剧。玉米植株生长在这样的环境中，会对其生理生化反应产生不利影响。盐胁迫影响下，植物种子的发芽率会出现一定程度的降低；同时，植物细胞内的含水量会出现某种程度的下降。由于盐胁迫造成的细胞膜结构变化会影响正常的膜透性。例如，盐胁迫破坏了玉米植株叶绿素的正常结构，影响了正常的光合作用1。玉米是非盐生植物，主要依靠合成不同的有机物调节渗透压，降低膜透性，从而缓解盐胁迫2。盐胁迫下的玉米将

7、Na+贮存到根系和成熟的叶叶梢中，从而减少盐胁迫3。研究表明，盐胁迫条件下，植物种子萌发和幼苗的生长受到不同程度的不利影响。随着盐浓度的增加，植物种子和幼苗中的脯氨酸和丙二醛含量会比对照组高4。虽然有人致力于用组织培养和细胞融合技术从诱变体重得到耐盐植物，但成功率太低5。非盐生植物自身产生一定程度的抗盐性，去适应盐渍化环境，但这种适应是有限的。因此，为了适应盐渍化环境，需要施加一定的外源物质。而外源物质可以维持植物体内渗透压的动态平衡，保护酶活性，稳定生物膜的结构，降低丙二醛和脯氨酸含量，增加叶绿素含量。任菲和张荣佳等研究人员的研究表明，外源ABA可以维持植物渗透压的动态平衡，保护酶活性，保持

8、细胞膜的完整性，缓解植物受到的盐胁迫5。另有关实验表明，用20 mol/L的氯化钙浸种能显著提高玉米种子在盐胁迫下的萌发率,减轻盐胁迫对胚根的膜伤害，稳定膜结构，提高胚根活力，改善玉米幼苗的生长状况6。而郎志宏、任珺和陶玲的试验表明，氯化钙可以缓解芨芨草受到的盐胁迫，促进植株正常生长，相同NaCl浓度下，芨芨草的萌发率、根长和茎长随外加钙浓度的增加而增长7。钙是植物必须的矿质元素之一，而且对维持细胞壁细胞膜及膜蛋白的稳定性，并且在调节无机盐离子转运和运输方面起到重要作用。与此同时，钙作为细胞内生化反应的第二信使，在细胞内和细胞间的信息传递过程中起到了显著性的作用。玉米生长在盐渍化土壤中会受到盐

9、胁迫，进而影响玉米的正常生长。通过对叶绿素、丙二醛、脯氨酸含量的测定，可以较为全面地分析玉米幼苗的生理状况。一定程度上，这些生理指标可以反应玉米幼苗的生长状态。不同盐浓度会对玉米幼苗产生不同程度的盐胁迫，而缓解不同程度的盐胁迫需要不同浓度的Ca2+。通过对试验数据合理的分析，可以得出较为准确的数据，为衡水市以后的农业生理提供理论依据。2 材料与方法2.1供试材料衡水市农资店购买的蠡玉68玉米种子2.2材料处理2.2.1 沙子的处理选择颗粒大小均匀的沙子作为玉米种子种植的的基质材料，将沙子分别装入25个塑料桶中，沙子的体积约为花盆的3/4。2.2.2 玉米种子的的处理选择颗粒饱满的蠡玉68种子分

10、成10分，每份30粒。分别种在25个塑料桶中，种植的深度相同且适宜，每天给每盆玉米浇水300ml，保证表明湿润即可，直至长出幼苗为止。当长出幼苗之后，向Hoagland营养液中分别加入不同浓度的NaCl溶液300 ml，盐浓度梯度为0、50 mmol、100 mmol、150mmol、250 mmol。同一盐浓度下的玉米幼苗有5组。 且对同一盐浓度下的玉米幼苗施加不同浓度的CaCl2溶液100 ml，CaCl2的浓度分别为0、0.05%、0.1%、0.5%、1%。每天用NaCl溶液和CaCl2溶液同时施加在玉米幼苗上，时间为一个月。2.2.3 玉米幼苗的处理一个月后，将玉米幼苗叶片剪下，用报纸

11、包好，做上标记，放在冰箱中保存。2.3 指标测定 叶绿素含量反应了植物光合作用的能力，而脯氨酸做为一种渗透调节物质，可以有效缓植物细胞受到的渗透胁迫。丙二醛作为细胞膜脂过氧化作用的产物之一，可以有效判定植物受到的盐胁迫程度以及膜脂破坏程度2.3.1 叶绿素含量测定测定的步骤为：将25个样品各称取0.1g叶片，分别放入25个带塞试管中，并做好标记；按照丙酮：乙醇：水=4.5:4.5:1的比例配好提取液，向每个试管中分别加入10mL提取液，盖上试管塞；摇晃试管，使叶片完全浸没在提取液中，待叶片变为黄色后，测定提取液在663nm和645nm处的吸光值，算出叶绿素含量。叶绿素含量计算公式如下：叶绿素含

12、量Ca=12.7A6632.69A645；Cb=22.9A6454.68A663； Ct=8.02A66320.21A6452.3.2 丙二醛含量的测定测定方法为分光光度计法。将25个样品各称取0.5g叶片，加入5TCA 5mL，研磨后所得到的匀浆在3000r/min下离心10min；取上清液2ml，加入0.67TBA 2mL，混合后在100水浴上煮沸30min，冷却之后再离心一次；分别测定上清液在450nm、532nm、和600nm处的吸光值，再算出丙二醛含量。丙二醛含量公式如下：丙二醛含量 C=6.45（A532A600）0.56A4502.3.3 脯氨酸含量的测定测定方法为磺基水杨酸法。

13、将25个样品各称取0.5g叶片，用3磺基水杨酸溶液研磨提取，磺基水杨酸最终体积为5mL，匀浆液转至离心管中，在沸水浴中提取10min，冷却后，3000r/min离心10min。取上清液；取2mL上清液，移至试管中，加入2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min，溶液即为红色；冷却后加入4ml甲苯，静置片刻，取上层清液至离心管中，离心5min；用吸管吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，测定在520nm处的吸光值。3 结果与分析3.1 外源钙对盐胁迫下玉米幼苗叶绿素的影响植物生长离不开光合作用，而光合作用离不开叶绿素。在某种程度上，叶绿素的含量反应了植物的光合

14、作用能力，并且从某种程度上说明了植物的健康水平。根据植物体内叶绿素含量的高低，可以从某种程度上分析植物的生理情况。由图3-1可知，生长在不同的盐浓度条件下，玉米幼苗会受到不同程度的盐胁迫。未受外源钙处理的玉米幼苗随着盐胁迫程度的增强，叶绿素的含量都有一定程度的降低。在低盐胁迫和高盐胁迫下，随着钙浓度的增加，叶绿素的含量先减少后增加，当钙浓度为0.10%时，叶绿素含量最少。在中盐胁下，随着钙浓度的增加，叶绿素的含量先增加后减少，钙浓度为0.10%时，玉米幼苗叶片叶绿素含量最高。无论低盐胁迫还是中盐胁迫和高盐胁迫，叶绿素含量最高的玉米幼苗都是经过外源钙处理过的，说明Ca2+对玉米所受的盐胁迫有一定

15、的缓解作用，但是效果不是很稳定。由表3-1可知，在低度盐胁迫（50 mmol/L的NaCl）下，施加0.05%、0.1%、0.5%和1%的外源钙的玉米幼苗叶片中的叶绿素含量为0.967430、0.436820、0.543670和0.645390 mg/L，分别是对照组叶绿素含量的1.07倍、0.48倍、0.60倍、0.71倍，其中经过0.05%外源Ca2+处理的玉米幼苗中叶绿素含量最高；在中度盐胁迫（150 mmol/L的NaCl）条件下，施加0.05%、0.1%、0.5%和1%的外源钙的玉米幼苗叶片中叶绿素含量为0.594280、0.797930、0.690200和0.617830 mg/L

16、，分别是对照组的1.01倍、1.34倍、0.86倍、0.89倍，经过0.10%外源Ca2+处理的玉米幼苗中叶绿素含量最高；在高度盐胁迫（250 mmol/L的NaCl）下，施加0.05%、0.1%、0.5%、1%的外源钙的玉米幼苗叶片中叶绿素含量为0.681190、0.627140、0.585400和0.755720 mg/L，分别是对照组的0.92倍、0.79倍、0.85倍和1.11倍，经过1.00%外源Ca2+处理的玉米幼苗中叶绿素含量最高。可以看出，从低盐胁迫到中盐胁迫和高盐胁迫变化中，最能缓解缓解盐胁迫的钙浓度分别为0.05%、0.10%、1.00%，说明随着盐胁迫强度的增加，能够缓解

17、盐胁迫的钙浓度也在不断增高。表3-1外源钙对盐胁迫下玉米幼苗叶绿素的影响Ca2+浓度低盐胁迫50mmol/L中盐胁迫150mmol/L高盐胁迫250mmol/L叶绿素比值0.00%0.05%0.9039700.9674301.001.070.5872900.5942801.00.6811900.6271400.90.10%0.50%0.4368200.5436700.480.600.7979300.6902001.41.20.5396200.5854000.81.00%0.6453900.710.6178301.10.755720 图3-1外源钙对盐胁迫下玉米幼苗叶绿素的影响3.2 外源钙对盐

18、胁迫下玉米幼苗叶片中丙二醛含量的影响在植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，而丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终分解产物，通常可用来作为膜脂过氧化指标，所以可以通过测定丙二醛的含量来观察植物遭受盐胁迫伤害的程度。由图3-2可以看出，在高盐胁迫下，外源钙能明显促进丙二醛含量的升高，在经过0.05%、0.1%、0.5%和1%的不同浓度外源钙处理的玉米幼苗叶片中的丙二醛含量分别为4.029368mmol/g、0.622600 mmol/g、2.490836mmol/g和2.108460 mmol/g，分别是对照组的6.04倍、2.43倍、3.73倍和3.16倍。但是在高盐胁迫下，不

19、同浓度的钙的作用很不稳定，0.05%浓度外源钙的促进作用极为明显，0.1%浓度的钙的促进作用最小。在低盐胁迫和中盐胁迫下，经过外源钙处理的玉米幼苗的叶片中丙二醛的含量同样也都高于对照组，但是效果没有高盐胁迫下的那么明显。经外源钙处理的玉米幼苗中丙二醛的含量是对照组的1.31.6倍之间。说明外源钙的施加能很好的促进丙二醛含量的升高，尤其是在高盐胁迫下，效果最为明显，但是在同种盐胁迫下，不同浓度的钙对丙二醛含量的影响效果并不是很稳定。讨论里探究表3-2外源钙对盐胁迫下玉米幼苗丙二醛的影响丙二醛1.9650642.8077002.2326522.5348042.5545521.431.141.291

20、.301.9292042.8687403.0074762.6106602.7451121.51.60.6666604.0293681.6226002.4908362.1084606.02.43.73.2图3-2外源钙对盐胁迫下玉米幼苗丙二醛的影响3.3 外源钙对盐胁迫下玉米幼苗脯氨酸含量的影响脯氨酸（Pro）是植物蛋白质的组分之一，在干旱、盐渍等胁迫条件下，许多植物体内脯氨酸大量积累。在盐胁迫条件下，植物体内脯氨酸的含量显著增加，因此植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗盐性。由图3-3可知，在低盐胁迫下，随着外源钙浓度的增加，脯氨酸含量也在不断增高，施加0.05%、0.1%、0.5%和

21、1%的外源钙的玉米幼苗叶片的脯氨酸含量为4.468939g/g、4.690623g/g、5.225264g/g和5.694726g/g，分别是对照组的1.01倍、1.06倍、1.18倍和1.29倍。在中盐胁迫下，随着外源钙浓度的增加，脯氨酸含量先升高后降，但是升高和降低的幅度不是很明显。当外源钙浓度为0.1%时，脯氨酸含量最高为6.646531g/g，是对照组的1.1倍，而施加0.05%、0.50%、1.00%浓度的外源钙是，脯氨酸的含量分别是对照组的1.01倍、1.02倍、0.93倍，含量基本和对照组相当。在高盐胁迫下，除0.05%外源钙处理的玉米幼苗中脯氨酸含量高于对照组，达到了8.902

22、459是对照组的1.3倍，其他外源钙处理的玉米幼苗中的脯氨酸含量都明显低于对照组，在0.10%是最低，为3.034459，只有对照组的0.4倍。所以在较低水平的盐胁迫下，不同浓度的外源钙可以有效提高玉米幼苗叶片的脯氨酸含量，且随着钙浓度的增加，脯氨酸的含量也随之增加。但是随着盐胁迫程度的增大，外源钙对脯氨酸含量不再有明显的促进升高的作用。表3-3外源钙对盐胁迫下玉米幼苗脯氨酸含量的影响NaCl浓度Ca2+ 浓度脯氨酸4.4297985.8772706.9333394.4689391.015.9294578.9024591.34.6906231.066.6465313.0344590.45.22

23、52641.185.9033636.2032735.6947265.5643135.0229020.7图3-3外源钙对盐胁迫下玉米幼苗脯氨酸含量的影响4 结论与讨论钙是植物生长发育过程中所必须矿质离子之一，可以较为有效缓解植物受到的盐胁迫。例如，钙可以维护和稳定细胞膜和叶绿体膜的正常结构，从而保证叶绿体正常的生理作用，进而可以保证植物能够进行正常的光合作用。而且钙可以提高植物体内的脯氨酸含量，这对于维持细胞正常的渗透调节起到了非常重要的作用。除了这些以外，钙对于维持细胞壁、细胞膜及膜结合蛋白的稳定性，以及在调节无机离子运输方面起到了重要作用，并且钙可以作为细胞内生理生化反应的第二信使，在细胞内

24、和细胞间的信号传递过程中起到了非常重要的作用。当植物受到盐胁迫时，会对植物造成渗透胁迫。此时，细胞内存在的脯氨酸及其他渗透调节物质不能够很好的缓解此刻受到的渗透胁迫，进而会影响细胞正常的生理功能。通过外源钙的施加，可以有效提高植物细胞体内脯氨酸含量。并且可以修复植物细胞内和细胞间正常的信号通讯，从而保证植物细胞内正常生化反应的正常进行。从而使得植物细胞结构稳定以及生长状况良好。盐胁迫下，植物体内会积累脯氨酸。脯氨酸对盐胁迫下植物细胞有多种好处。盐胁迫是一种渗透胁迫，而脯氨酸的积累可以维持植物细胞的渗透平衡，从而可以维持植物细胞膜正常形态，进而保证植物细胞正常的生理生化反应。另外一定浓度范围内的

25、甜菜碱能够提高青菜叶片中脯氨酸含量，从而显著增强青菜的抗盐性11。同时发现锰硼有明显的互作效应，可以提高植物的抗盐性12。贾恢先和蒲陆梅对猪毛菜（Salsola collina Pall.）、地肤（Kochia scoparia Schrad.）、灰绿藜（Chenop odium glaucum L.）等8种盐生植物和黄花菜（Hermero- callis citrina Baroni）、蚕豆（Vicia faba L.）、草莓（Fragaria ananassa Duchesne）3种非盐生植物生理指标进行对比，脯氨酸含量在盐生植物组中的平均含量高于对照组3.5 倍以上 13。相关试验证明，

26、外源钙处理过的植物的脯氨酸累积的现象比未经钙处理的要明显。这和本试验得到的结果相一致14。相关试验表明，植物的缓解盐胁迫的过程中，会有脯氨酸积累的过程；而外源物质缓解盐胁迫下的玉米幼苗的过程中，同样会有脯氨酸积累的过程。这和本试验得到的试验结果相一致。玉米幼苗处于不同盐浓度下，会受到不同程度的盐胁迫。进而会影响玉米细胞的渗透调节，破坏植物叶绿体膜的结构，造成叶绿体的裂解，进而影响其叶绿素含量。最终导致玉米光合作用的下降。在低等盐浓度（50 mmol/L的NaCl）下，通过施加0.05%的CaCl2，能够提高玉米幼苗叶绿素的含量（是对照组的1.07倍）。在中等盐浓度（150 mmol/L的NaC

27、l）下，施加0.1%的CaCl2，可以有效提高玉米幼苗叶绿素的含量（是对照组的1.01倍）。在高等盐浓度（250 mmol/L）下，通过施加1%的CaCl2，可以有效提高玉米幼苗中的叶绿素含量（是对照组的1.11倍）。通过施加外源钙，以及对玉米幼苗叶片进行叶绿素含量的测定，表明，对于生长在不同盐浓度的玉米幼苗，有不同合适浓度的外源钙可以提高玉米幼苗叶片中的叶绿素含量，进而提高玉米幼苗的光合作用。阎秋洁和华蕾的研究表明，用0.075%的锰和0.25%的硼混合，可显著提高植物叶绿素的含量 8。王瑞恒和侯和胜等研究人员的研究表明，S-3307增加叶绿素含量，进而提高植物抗盐性9。相关研究通过对植物在

28、盐胁迫下叶绿素含量的比较，发现了植物的叶绿素的变化情况，为选择耐盐植物提供了一定程度的指示作用9。随着盐胁迫的增加，玉米细胞膜脂过氧化作用加强，结果造成丙二醛含量的上升，这会影响玉米细胞膜脂的正常结构，进而对玉米幼苗正常的生理生化反应产生不利影响。而在本试验当中，施加0.05%、0.1%、0.5%和1%的CaCl2，玉米幼苗叶片中，丙二醛含量均有不同程度的提高。盐胁迫会导致脯氨酸的积累，而脯氨酸作为一种渗透调节物质，在维持玉米幼苗细胞的渗透平衡发挥着重要的作用，在低等盐浓度（50 mmol/L）下，施加1%的CaCl2可以有效提高玉米叶片内脯氨酸含量（是对照组的1.28倍）。在中等盐浓度（15

29、0 mmol/L）下，施加0.1%的CaCl2可以有效提高脯氨酸含量（是对照组的1.08倍）。在高等盐浓度（250 mmol/L）下，施加0.05%的CaCl2可以有效提高脯氨酸含量（是对照组的1.28倍）。由此可知，对于不同程度的盐胁迫，需要不同浓度的CaCl2进行缓解。在50 mmol/L、150 mmol/L和250 mmol/L的NaCl下，分别有合适浓度的外源钙可以提高玉米叶片中叶绿素和脯氨酸含量。从而有利于玉米幼苗正常的光合作用以及正常的渗透调节功能。但本试验当中，仍有一些不足之处，丙二醛含量的分析仍然需要进一步的分析和讨论。 总而言之，通过对盐胁迫下施加外源钙后，植物叶绿素、丙二醛、脯氨酸含量的研究，较为全面地分析了外源