1、BDNA连接酶能催化磷酸与脱氧核糖之间形成化学键C通过检测发现大肠杆菌中没有胰岛素原产生,则可判断重组质粒未导入受体菌D人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原有较高的生物活性解析本题考查基因工程的相关知识和分泌蛋白的合成,意在考查考生对所学知识的综合分析能力。人细胞内转录的主要场所是细胞核,翻译的场所是核糖体,大肠杆菌的转录和翻译都发生在细胞质中。磷酸与脱氧核糖之间的磷酸二酯键可由DNA连接酶催化形成。大肠杆菌中没有胰岛素原产生的原因可能是基因表达受阻或含目的基因的重组质粒未导入受体细胞。胰岛素原需经过内质网和高尔基体的加工后形成胰岛素,胰岛素具有较高的生物活性。答案B4(2014浙江调研)
2、下列关于培育良种“试管动物”的叙述,正确的是()A从附睾中取出的是已获能的成熟精子B采集卵母细胞前必须对良种母畜进行配种C供体包括提供配子且遗传性状优良的雌性和雄性个体D将早期胚胎移植到代孕母畜中,经发育可获得表现型与受体相同的后代解析从附睾中取出的精子并没有获能,故A项错误;采集卵母细胞前需要对良种供、受体母牛用激素进行同期发情处理,用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理,但不需要进行配种,故B项错误;供体是提供胚胎的动物,包括提供配子且遗传性状优良的雌性和雄性个体,故C项正确;将早期胚胎移植到代孕母畜中,经发育可获得表现型与供体相似的后代,故D项错误。5(2014浙江省浙南、浙北部分学校联考
3、)下列有关高等植物原生质体制备和培养的叙述,正确的是()A纤维素酶和果胶酶混合液可用于制备高等植物细胞的原生质体B原生质体由细胞膜、液泡膜及两膜之间的细胞质组成C从不同植物组织分离得到的原生质体大小、形状相同D原生质体经植物组织培养不能得到再生植株解析制备高等植物原生质体时要去除细胞壁,可使用纤维素酶和果胶酶混合液;成熟植物细胞的细胞膜、液泡膜及两膜之间的细胞质合称为原生质层;从不同植物组织分离得到的原生质体的大小、形状通常不同;原生质体经培养可再生出细胞壁,进一步培养可得到再生植株。 6(2014南京模拟)治疗性克隆有望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排异反应等问题。下图表示治疗性克隆
4、的过程,下列有关叙述不正确的是()A上述过程利用了动物细胞核移植、动物细胞培养等技术B上述过程充分说明动物细胞具有全能性C过程的完成离不开胚胎干细胞的增殖和分化潜能D过程都发生DNA的复制和蛋白质的合成解析本题考查治疗性克隆的相关知识,意在考查考生对动物细胞培养、细胞核移植和胚胎干细胞相关知识的识记情况和综合分析问题的能力。A项正确:形成重组细胞利用了动物细胞核移植技术;重组细胞形成囊胚利用了动物细胞培养技术。B项错误:由于最终没有形成个体,故不能体现动物细胞具有全能性。D项正确:过程都有细胞的增殖、分化,因此都会发生DNA的复制和蛋白质的合成。7(2014南京四校调研)下列关于果酒和果醋的制
5、作原理、发酵过程的叙述中,错误的是()A果酒和果醋的发酵菌种不同,但代谢类型相同B制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒C变酸果酒的表面观察到的菌膜可能是醋酸菌的菌落D果酒和果醋的制作可用同一装置,但需控制不同的发酵条件解析本题考查生物技术实践中微生物发酵的相关知识,意在考查考生的识记与判断能力。果酒发酵利用的是酵母菌,酵母菌的代谢类型是异养兼性厌氧型,果醋发酵利用的是醋酸菌,醋酸菌的代谢类型是异养需氧型。8(2014江苏三校联考)下列叙述错误的是()A用加酶洗衣粉洗涤污渍时,浸泡时间不足会造成洗涤效果差B制作腐乳时,料酒的量较多时易造成豆腐腐败变质C制作果醋时,通氧不足或温
6、度过低会造成发酵失败DDNA粗提取实验中可通过控制NaCl溶液的浓度去除提取液中的部分杂质解析料酒的量较少时易造成豆腐腐败变质,较多时会延长腐乳成熟的时间。9(2014南京模拟)如图为某二倍体植株花药中未成熟的花粉在适宜培养基上形成完整植株的过程。下列有关叙述正确的是()A过程表示脱分化,过程表示再分化B过程需要照光C过程说明花粉细胞具有全能性D通过过程获得的完整植株自交后代不会发生性状分离解析本题考查花药离体培养的相关知识,意在考查考生的理解和应用能力。A项错误,过程表示脱分化,过程表示再分化。B项错误,通常幼小植株形成后才需要照光。C项正确,通过过程,花粉细胞形成了完整的植株,体现了花粉细
7、胞的全能性。D项错误,通过过程获得的完整植株是单倍体,高度不育。10(2014杭州质检)如图是用已除去DNA的滤液进行血红蛋白的提取和分离实验的装置,下列有关叙述不正确的是()A首先用图甲装置对滤液进行处理,其目的是去除相对分子质量较大的杂质B图乙装置的试管收集到的液体中最先得到的是相对分子质量较大的蛋白质C用图乙装置分离血红蛋白时,待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每管收集5 mL,连续收集D图丙装置用于电泳法分离提纯血红蛋白的操作解析本题考查血红蛋白的提取和分离实验,意在考查考生获取信息的能力和理解能力。用图甲装置对滤液进行处理,其目的是去除相对分子质量较小的杂质。采用凝胶
8、色谱法分离蛋白质的过程中,相对分子质量较大的蛋白质先从层析柱中洗脱出来。11(2014广州调研)下列有关生物技术的叙述不正确的是()A稀释涂布平板法可用于微生物的纯化和计数B培育转基因植物的过程中,淘汰的植株要严加管制C试管婴儿技术包括人工授精和胚胎移植等D植物组织培养时需要对外植体和接种器材进行灭菌处理解析稀释涂布平板法可用于微生物的纯化和计数;培育转基因植物的过程中,淘汰的植株要严加管制,否则可能会造成基因污染;试管婴儿技术包括人工授精、早期胚胎培养、胚胎移植等;进行植物组织培养时需对接种器材进行灭菌处理,对外植体要用体积分数为70%的酒精消毒。答案D12(2014深圳调研)某学者欲研究被
9、石油污染的土壤中细菌的数量,并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A利用平板划线法对细菌进行计数B用以石油为唯一碳源的培养基筛选C采用稀释涂布平板法分离菌种D称取和稀释土壤样品时应在火焰旁解析分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法,但平板划线法不能用于细菌的计数;筛选能分解石油的细菌,要以石油作为培养基中唯一的碳源;筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行,所以应在火焰旁进行。二、简答题(共76分,其中1315为现代生物科技专题,1618为生物技术实践)13(11分)(2014南昌一模)下图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在HAT培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂
10、能力、不能在HAT培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图,请回答相关问题:(1)图示方法是_技术的应用,该技术的基础是_技术。(2)操作所用的成纤维细胞应传代_代以内,诱导融合时需要加入的促融剂是_。(3)人、鼠细胞先经过细胞融合形成_,再经过一次_,形成单核细胞。(4)HAT培养基起_培养作用,培养时温度应为_,操作中加入乌本苷的目的是_。(5)下表所示为杂交细胞A、B、C、D中存在的人类染色体及人类特有的4种酶(表示存在,表示不存在),这4种酶均为单基因编码产生,据表推断,编码酶的基因位于染色体_上,编码酶_的基因位于染色体2上。解析本题考查动物细胞培养、动物细胞融合等知识,难度中等。
11、(1)图示方法是将骨髓瘤细胞和成纤维细胞融合的过程,即动物细胞融合的过程;动物细胞工程(包括动物细胞融合)的基础是动物细胞培养。(2)动物细胞培养时传代至10代后就不容易传下去;诱导动物细胞融合所用的促融剂是PEG(即聚乙二醇)或灭活的病毒。(4)人成纤维细胞能在HAT培养基上存活,小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活,但二者融合形成的杂交细胞能在HAT培养基上存活,因此,利用该培养基可以筛选出杂交细胞;哺乳动物细胞培养的适宜温度为36.50.5 ;在含有HAT的培养基上,成纤维细胞和杂交细胞都能存活,但所需要的是杂交细胞,因此,加入乌本苷的目的是除去成纤维细胞。(5)表中结果显示,当缺乏染
12、色体1时,杂交细胞A、C都缺乏酶,当有染色体1时,杂交细胞B、D都有酶,这说明编码酶的基因位于染色体1上;当缺乏染色体2时,酶和酶都缺乏,当有染色体2时,酶和酶都有,这说明编码酶和酶的基因位于染色体2上。答案(1)动物细胞融合动物细胞培养(2)0PEG(或灭活病毒)(3)多(双)核细胞有丝分裂(4)选择36.50.5除去成纤维细胞(5)1和14(16分)(2014天津河西区质检一)镰刀形细胞贫血症是一种单基因遗传病,是由正常的血红蛋白基因(HbA)突变为镰刀形细胞贫血症基因(HbS)引起的。在非洲地区黑人中有4%的人是该病患者,会在成年之前死亡,有32%的人是携带者,不发病但血液中有部分红细胞
13、是镰刀形。(1)在非洲地区黑人中HbS基因的频率是_。(2)某表现型正常的非洲裔夫妇,若他们的孩子已经出生,检查孩子是否患病的方法是_;若孩子尚未出生,可以采用从羊水中收集少量胎儿的细胞,提取出DNA,用_技术进行复制,然后通过_的方法确认胎儿是否正常。(3)下图甲是正常人和患者血红蛋白基因的部分片段,若用Mst限制酶切割下图中正常红细胞基因片段,则会出现_个相同的黏性末端;若用Mst限制酶切割下图中镰刀形细胞贫血症基因片段,与原DNA相比,则会增加_个游离的磷酸基团。(4)若用Mst限制酶切割胎儿DNA后,用凝胶电泳分离酶切片段,片段越大,在凝胶带上距离加样孔越近。加热使酶切片段解旋后,用荧
14、光标记的CFGACTCCT序列与其杂交,荧光出现的位置可能有下图乙所示的三种结果。若出现_结果,则说明胎儿患病;若出现_结果,则说明胎儿是携带者。解析本题考查基因频率、遗传病诊断、基因工程的相关知识及考生从题干中获取信息、识图分析能力,难度较大。(1)分析题意可知,非洲地区黑人中HbS基因的基因频率为32%1/24%20%。(2)如已出生,检查孩子是否患病的方法可直接用显微镜观察红细胞的形态;如尚未出生,检查胎儿是否正常,可用基因诊断的方法进行检查;提取出的DNA,可用PCR技术进行复制。(3)分析图示可知,Mst限制酶切割正常的红细胞基因片段,酶切位点3个,因此会出现6个相同的黏性末端;游离
15、磷酸基团,就是没有形成磷酸二酯键,因此若用Mst限制酶切割镰刀形细胞贫血症基因片段,酶切位点2个,与原DNA相比,则会增加4个游离的磷酸基团。(4)分析图示可知,HbA基因突变为HbS基因后,恰好丢失了一个Mst限制酶切割位点,由于基因突变后酶切位点的丢失,使酶切片段变长,根据题意,片段越大,在凝胶上离加样孔越近,可知B为患病胎儿,C中出现两条杂交带所以为携带者。答案(1)20%(2)显微镜下观察红细胞形态PCR基因诊断(或DNA分子杂交)(3)64(4)BC15(15分)(2014郑州质检二)人的血清白蛋白在临床上需求量很大,通常从人血中提取。由于艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的
16、威胁与日俱增,使人们对血液制品顾虑重重。如果应用一定的生物工程技术,将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中,利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白就成为可能。其过程大致如下:a将人体血清白蛋白基因导入“奶牛胚胎”的细胞中,形成细胞;b取出细胞的细胞核,注入去核牛卵细胞中,形成细胞;c电脉冲刺激细胞促使其形成早期胚胎;d将胚胎移植到母牛的子宫内,最终发育成转基因小牛。(1)人体血清白蛋白基因通常可以从基因文库中获取,含有一种生物所有基因的文库称为_,获得人体血清白蛋白基因后可以利用_技术进行扩增,该技术要用到一种特殊的_酶。人体血清白蛋白基因一般利用_技术导入“奶牛胚胎”细胞中。当受精卵分裂到囊胚期时,需要
17、取囊胚的_细胞做DNA分析,进行性别鉴定,以确保发育成熟的牛能分泌乳汁。(2)实验过程b利用的技术是_,胚胎工程操作中终端的环节是_。(3)该过程培养的牛被称为克隆牛。与其相比,试管牛培育过程特有的生物技术是_。(4)若将早期胚胎分离成若干个胚胎细胞,让其分别发育成小牛,这些小牛的基因型_(填“相同”或“不同”),此项技术称为_,在对囊胚阶段的胚胎进行操作时,需要特别注意的问题是_,否则会影响胚胎的恢复和进一步发育。(5)运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞(ES细胞)进行培养,在培养过程中,必须用_处理内细胞团,使之分散成单个细胞。为了维持ES细胞不分化的状态,一般将ES
18、细胞放在_细胞上,或在添加抑制因子的培养液中进行培养。(6)哺乳动物的胚胎的营养液成分较复杂,除一些无机盐和有机盐外,还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及_等物质。解析本题考查动物细胞工程、胚胎工程和基因工程等知识,难度中等。(1)含有一种生物所有基因的文库,称为基因组文库;获取目的基因后,可以使用PCR技术进行扩增,该过程需要在高温条件下进行,需要热稳定DNA聚合酶(Taq酶);目的基因导入动物细胞中,常采用显微注射法;受精卵发育到囊胚期后,需要取囊胚的滋养层细胞进行DNA分析,选取雌性胚胎。 (2)b过程为细胞核移植技术,胚胎工程的最后环节是胚胎移植。(4)将桑椹胚或囊胚期胚胎进行胚
19、胎分割,可以获得多只基因型相同的个体;采用囊胚期细胞进行胚胎分割时,因内细胞团将来会发育形成组织和器官,若不均等分割将会影响胎儿的生长发育。(5)用胰蛋白酶处理可以将ES细胞分离,可以在饲养层上培养干细胞,以维持干细胞不分化的状态。(6)动物细胞培养液中,由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境。答案(1)基因组文库PCR热稳定DNA聚合(Taq酶)显微注射滋养层(2)核移植胚胎移植(3)体外受精 (4)相同胚胎分割将内细胞团均等分割(5)胰蛋白酶饲养层(6)(动物)血清16(10分)(2014成都诊断一)苯酚(C6H5OH)是广泛存在
20、于化工行业废水中的一种污染物。为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌,科研人员进行了如图A所示的实验(实验中的LB培养基能使菌种成倍扩增)。请分析回答:(1)该实验中_等可放入干热灭菌箱中灭菌。与步骤中培养基的成分相比,步骤培养基成分的最大区别是以苯酚作为唯一的_;步骤中的培养基成为固体的原因是添加了_。(2)若经步骤培养后菌落的分布如图B,则接种时甲、乙、丙三个区域划线的操作顺序依次是_。多次划线后,最终可得到由_个细胞繁殖而来的单个菌落。(3)接种时,在第一区域划线后须将接种环_后再划线,在第二次划线时须从笫一次划线的末端开始,这样做的目的是_。(4)步骤的目的是_;经过步骤培养后,应从残余苯酚
21、浓度_的培养瓶中再分离、培养目的菌株,若需将获得的菌种长期保存,常采用_的方法。解析本题考查微生物的培养、分离和纯化的相关知识,难度较小。(1)该实验中使用干热灭菌箱灭菌的有锥形瓶、培养皿、接种环等;与步骤中培养基的成分相比,步骤培养基成分的最大区别是以苯酚作为唯一的碳源;步骤中添加了琼脂,使培养基成为固体培养基。(2)菌落数量由多到少依次为甲、乙、丙,则表示接种时划线的操作顺序依次是甲、乙、丙;多次划线后,最终可得到由一个细胞繁殖而来的单个菌落。(3)接种时,为避免因细菌过多而影响后面各区的分离效果,因此再次划线接种时,须将接种环灼烧,冷却后再划线;在第二次划线时须从第一次划线的末端开始,这
22、样做的目的是从上一区域获取菌种。(4)分析图示可知,实验中步骤的目的是分离纯化能分解苯酚的菌株;要培养目的菌株,经过步骤培养后,应从残余苯酚浓度最低的培养瓶中再分离;可采用甘油管藏的方法对获得的菌种长期保存。答案(1)锥形瓶、培养皿和接种环碳源琼脂(2)甲、乙、丙一(3)灼烧、冷却(从上一区域)获取菌种(4)分离纯化能分解苯酚的菌株最低甘油管藏17(13分)(2014郑州质检二)近几年,全国柑橘销售市场陷入低迷,为改变这种状况,并满足不同人的需求,可以将其加工制成果汁、果酒、果醋等。结合下图回答相关问题:(1)通过过程制作果酒时常常接种的菌种是_,最适合其繁殖的温度为_左右。在过程中不用灭菌一
23、般也不会受到杂菌的污染,原因是(写出两点)_。(2)过程和过程所用微生物在代谢方式上的主要区别是_。过程涉及的主要化学反应是_(写反应式)。(3)选用新鲜而不是干枯的柑橘果皮作为提取香精油的材料,理由是新鲜柑橘果皮_。过程最好采用的方法是_法,用这种方法提取橘皮精油的主要步骤是:石灰水浸泡、漂洗、_、过滤、静置、再次过滤。(4)橘皮精油的提取之所以不采用水蒸气蒸馏法,是因为水中蒸馏会导致原料_和有效成分_等问题。(5)现获得一株无籽突变柑橘,研究人员要在较短时间内获得大量该突变植株,最好采用_的方法,该过程中需要对外植体使用酒精进行消毒处理。对培养基彻底灭菌时,应采用的灭菌方法是_。解析本题考
24、查植物有效成分的提取等知识,难度中等。(1)果酒制作过程需要接种酵母菌,最适合其繁殖的温度为20 ;过程中培养液的缺氧环境及酵母菌产生大量酒精能抑制绝大多数微生物的生长繁殖,一般不需要灭菌,也不会受到杂菌污染。(2)过程为果酒制作,所用酵母菌是兼性厌氧型,过程为果醋的制作,所用醋酸菌是好氧型。(3)新鲜柑橘果皮中芳香油含量较高,因柑橘原料易焦糊,适用压榨法提取芳香油。(5)短时间获取大量植株,可以使用植物组织培养技术,该过程使用的培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌。答案(1)酵母菌20培养液的缺氧环境及酵母菌产生大量酒精能抑制绝大多数微生物的生长繁殖(2)过程所用酵母菌是兼性厌氧型,过程所用醋酸菌
25、是好氧型 C2H5OHO2CH3COOHH2O (3)芳香油含量较高压榨压榨(4)焦糊水解(5)植物组织培养高压蒸汽灭菌18(11分)在农业用地中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解,长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤,可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度一定,该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行_处理。(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌,上述培养皿中培养基的特点是:_体培养基且_。若需要调节培养基pH,应该在各种成分都溶化后且分装_(填“前”或“后”)进行。对培养基进行灭菌,
26、常采用的方法是_。(3)在划线前,接种环应该在酒精灯火焰上_。培养后发现,只有很少菌落出现,大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是_或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中,无透明带菌落利用的氮源主要是_,有透明带菌落利用的氮源主要是_,据此可筛选出目的菌。(5)A细菌和B细菌都能降解该除草剂,研究发现以每克菌体计算,A细菌降解该除草剂的能力比B细菌要强,对此现象合理的假设是_或_。解析本题考查微生物的培养和应用,难度中等。(1)将浓度高的溶液通过稀释的方法降低浓度。(2)图中的接种方法是平板划线法,因此,使用的培养基为固体培养基;利用该培养基的目的是筛选能降解除草
27、剂的细菌,因此,该培养基为选择培养基,培养基中应加入除草剂作为唯一的氮源;调节培养基的pH应在分装前进行;培养基中含有水分,应采用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌。(3)划线前,接种环应通过灼烧灭菌;由于该培养基中添加的氮源除草剂只能被能降解除草剂的细菌利用,因此,在该培养基上只有该细菌才能生长。(4)根据题中信息“含除草剂的培养基不透明”,则可知无透明带菌落利用的氮源并不是除草剂,而是来自空气中的氮气,有透明带菌落利用的氮源为除草剂。(5)降解除草剂的能力强弱与细菌所含有的相应酶的活性或数量有关。答案(1)稀释(2)固以除草剂作唯一氮源前高压蒸汽灭菌(3)灼烧灭菌培养基中缺少这些细菌可利用的氮源(4)氮气该除草剂(5)A细菌酶活性更强A细菌酶量更多
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