普通固体制剂版微生物限度方法适用性Word文档格式.docx

1、中华人民共和国药典2015版 四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准。3、验证目的建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。4 、验证小组成员及职责 人 员姓 名职 位职责组 长质量部经理质量负责人负责验证报告的审核、批准。副组长QC主任1.负责对确认记录、数据进行复核，确认报告的总结。2.负责对验证及检验记录、数据、结果进行分析和汇总。成 员检验人员1、负责验证报告的起草2、负责检验数据的收集、记录的填写5、主要验证用仪器仪表的校验仪器名称

2、规格型号检定情况检定部门立式压力蒸汽灭菌器生化培养箱超净工作台结果：确认人： 日期：6、验证用菌种及培养基菌种名称编号（批号）来 源购进日期传代日期传代次数铜绿假单胞菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养基、缓冲液名称批号配制批号有效期至胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基麦康凯液体培养基麦康凯琼脂培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液复核人日 期7、试验菌悬液制备7.1 需氧菌总数计数方法适用性试验、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验菌株培养接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35培养3天；接种白色念珠

3、菌、黑曲霉于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35培养5天，用于需氧菌总数计数方法适用性试验。接种白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20-25培养5天，用于霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人35ml含0.05% （m l/m l）聚山梨酯8 0的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢

4、子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28 ,在验证过的贮存期内使用。7.2 大肠埃希菌检查方法适用性实验菌株培养将大肠埃细菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35培养18-24小时，取培养物适量，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。8、供试液的制备取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，制成1：10的供试液。8.1需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验8.1.1试验组 取上述1:10供试液1ml和不大于100cfu试验菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢

5、杆菌、白色念珠菌、黑曲霉），分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。取上述1:10供试液1ml和不大于100cfu试验菌（白色念珠菌、黑曲霉），分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。胰酪大豆胨琼脂培养基用于需氧菌总数计数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于霉菌和酵母菌总数计数。8.1.2供试品对照组 取规定量供试液，按平皿法测定供试品本底菌数。8.1.3菌液对照组：测定所加的菌液数。8.1.4阴性对照组：取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基

6、各制备2个平板，均不得有菌生长。8.1.5培养：需氧菌总数计数平板倒置于3035培养箱中培养3天，霉菌、酵母菌总数计数平板倒置于2025培养箱中培养5天。8.1.6回收率计算：8.1.7结果判断：试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液对照组的平均落数的百分率）应在0.52范围内。8.2控制菌检验方法验证8.2.1大肠埃希菌：8.2.1.1试验组：取1：10的供试液10ml和不大于100cfu的大肠埃希菌菌液1ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，3035培养18小时。8.2.1.2供试品对照组：10的供试液10ml接种至100ml胰酪大豆胨液体

7、培养基中，混匀，3035培养18小时。8.2.1.3阳性对照组：取不大于100cfu的大肠埃希菌菌液1ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，3035培养18小时。8.2.1.4 阴性对照组：取试验用的稀释液10ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，3035培养18小时。取上述培养物1ml接种100ml麦康凯液体培养基中，4244培养24小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035培养 18小时。若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果

8、为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。8.2.1.6结果判断：在麦康凯琼脂培养基平板上，阴性对照组与供试品对照组应无菌生长，其他各试验组应有菌落生长，并且经鉴定，显MUG与靛基质阳性。9、需氧菌总数计数方法适用性试验记录菌种产品批号试验组（cfu）供试品对照组（cfu）菌液组（cfu）阴性对照组（cfu）回收率皿1皿2平均枯草芽孢杆菌白色念珠菌结论检验人日期10、霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验记录11、大肠埃希菌检查方法适用性试验记录产 品 批 号试验组BL（ ml） MUG靛基质供试品对照组试 验 组阳性对照组阴性对照组检验员备注：“+”为有菌生长或呈阳性，“-”为无菌落生长或呈阴性 。12、结论：本品按中国药典2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，进行需氧气菌、霉菌和酵母菌总数计数验证，结果表明 用平皿法检查本品的需氧气菌、霉菌和酵母菌。按1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，进行控制菌检查方法验证，结果表明 用麦康凯液体培养基与麦康凯琼脂培养的相关方法检查大肠埃希菌。