临床免疫检测中的干扰因素及对策.ppt

1、免疫学检测方法中的免疫学检测方法中的干扰因素和对策干扰因素和对策第二军医大学附属长海医院实验诊断科第二军医大学附属长海医院实验诊断科 沈 茜 随着基础免疫学研究的深入和现代免随着基础免疫学研究的深入和现代免疫学理论的建立，使大量免疫学检测技术疫学理论的建立，使大量免疫学检测技术被不断地创新、发明；在临床疾病诊治的被不断地创新、发明；在临床疾病诊治的应用中也不断地推陈出新。应用中也不断地推陈出新。目前应用免疫目前应用免疫学原理检测的检验项目占到三级综合医院学原理检测的检验项目占到三级综合医院检验科全部检验项目的检验科全部检验项目的14，医疗收入约，医疗收入约占占13。这就要求检验人员不断掌握最新

2、这就要求检验人员不断掌握最新的临床免疫学知识和各种新的检验方法，的临床免疫学知识和各种新的检验方法，了解检验项目的基本原理。了解检验项目的基本原理。生化生化临检临检 要保证实验结果的正确性和可靠性，必要保证实验结果的正确性和可靠性，必须对实验整个过程中各个环节中的干扰因素须对实验整个过程中各个环节中的干扰因素有比较清楚的掌握和了解。在本次课中主要有比较清楚的掌握和了解。在本次课中主要讨论的是标本本身内在因素、以及由于人为讨论的是标本本身内在因素、以及由于人为因素对标本处理不当等引起的外在因素、对因素对标本处理不当等引起的外在因素、对免疫检测结果造成的影响。在了解这些因素免疫检测结果造成的影响。

3、在了解这些因素的同时，如何在临床工作中注意和解决这些的同时，如何在临床工作中注意和解决这些干扰，以保证结果的准确性。干扰，以保证结果的准确性。基本概念基本概念 抗原：抗原：是一类能刺激机体免疫系统产生特异是一类能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答、并能与相应免疫应答产物（抗体性免疫应答、并能与相应免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）发生或致敏淋巴细胞）发生特异性结合特异性结合的物质。的物质。抗体：抗体：是由抗原刺激是由抗原刺激B细细胞经分化增殖形成的浆细胞胞经分化增殖形成的浆细胞合成和分泌的，能与相应抗合成和分泌的，能与相应抗原发生原发生特异性结合特异性结合并具有多并具有多方面免疫功能的球蛋白。

4、方面免疫功能的球蛋白。基本概念基本概念 免疫学检测就是利用免疫学检测就是利用抗原和抗体高度特异抗原和抗体高度特异性结合的原理性结合的原理而检测分析微量物质的方法。从而检测分析微量物质的方法。从20世纪世纪50年代美国学者年代美国学者Berson和和Yallow发明发明了放射免疫测定技术检测胰岛素起，免疫学检了放射免疫测定技术检测胰岛素起，免疫学检测技术经历了从定性到定量；从常量分析到微测技术经历了从定性到定量；从常量分析到微量、超微量分析；从手工检测到全自动化；从量、超微量分析；从手工检测到全自动化；从单个标本检测到高通量检测等一系列长足的进单个标本检测到高通量检测等一系列长足的进步。步。免疫

5、测定技术均是以标记物示踪作为基免疫测定技术均是以标记物示踪作为基础，同位素、荧光素、酶是经典的三大标记础，同位素、荧光素、酶是经典的三大标记免疫测定技术。这三大标记技术发展了各种免疫测定技术。这三大标记技术发展了各种各样的免疫测定方法，如各样的免疫测定方法，如RIA、ELISA、荧光、荧光免疫测定、免疫化学发光测定等，目前应用免疫测定、免疫化学发光测定等，目前应用这三大标记技术的检测试剂盒在临床广为应这三大标记技术的检测试剂盒在临床广为应用。近年来，作为免疫测定发展方向的非同用。近年来，作为免疫测定发展方向的非同位素标记技术以其敏感、安全等倍受关注。位素标记技术以其敏感、安全等倍受关注。免疫检

6、测技术免疫检测技术-标记物标记物标本自身及前处理所造成的干扰因素标本自身及前处理所造成的干扰因素 类风湿因子（类风湿因子（RF）嗜异性抗体嗜异性抗体 自身抗体自身抗体 补体补体 纤维蛋白纤维蛋白 溶血或黄疸溶血或黄疸 交叉反应物质交叉反应物质 外源性物质外源性物质免疫学检测免疫学检测-干扰因素干扰因素干扰因素和对策干扰因素和对策-类风湿因子类风湿因子 患者体内存在的类风湿因子能显著干扰患者体内存在的类风湿因子能显著干扰许多免疫学检测方法，许多免疫学检测方法，IgM、IgG型型RF可以与可以与免疫检测系统中的捕获抗体及标记二抗的免疫检测系统中的捕获抗体及标记二抗的Fc段直接结合，从而导致检测结果

7、假阳性或假段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假性升高。性升高。RF对不同检测系统的干扰程度有所对不同检测系统的干扰程度有所差异，影响程度并不与差异，影响程度并不与RF的浓度成正比的浓度成正比。目前，在临床工作中使用的免疫检测试剂盒目前，在临床工作中使用的免疫检测试剂盒大部分均没有很好地防止大部分均没有很好地防止RF干扰的措施，国干扰的措施，国外著名公司要好于国内公司。外著名公司要好于国内公司。干扰因素和对策干扰因素和对策-类风湿因子类风湿因子 收集收集10份份RF311000IU/L的患者血清，的患者血清，在美国和欧洲在美国和欧洲66各临床实验室进行各临床实验室进行74个项目个项目的免疫竞争

8、法或免疫夹心法检测，仪器和试的免疫竞争法或免疫夹心法检测，仪器和试剂均配套。剂均配套。3445个结果中个结果中8.7为假阳性。错为假阳性。错误高值结果中的误高值结果中的21（所有结果的（所有结果的1.8）引）引起了临床的错误诊断，在使用起了临床的错误诊断，在使用RF吸附剂后再吸附剂后再检测，错误结果得到纠正。检测，错误结果得到纠正。39的假阳性结的假阳性结果也可在使用果也可在使用RF吸附剂后降低。吸附剂后降低。Clinical Chemistry 2002;48(11):20082016RF的干扰对策的干扰对策u 捕获抗体用捕获抗体用F(ab)2替代完整的替代完整的IgGu 标本用连有热变性（

9、标本用连有热变性（63，10 min）IgG的的 固相吸附剂（固相吸附剂（Euroimmune公司）处理（将公司）处理（将 热变性热变性IgG加入到标本稀释液或血清中同样加入到标本稀释液或血清中同样 有效），有效），4过夜离心后在检测；过夜离心后在检测；u 检测抗原时，可以用终浓度检测抗原时，可以用终浓度0.1mol/L 2-巯巯 基乙醇基乙醇(2-ME)等加入到标本稀释液或标本等加入到标本稀释液或标本 中，使中，使RF（IgM型）降解。型）降解。干扰因素和对策干扰因素和对策-嗜异性抗体嗜异性抗体 嗜异性抗体通常是指与其他种类动物的嗜异性抗体通常是指与其他种类动物的免疫球蛋白产生反应的人类抗体

10、，具有广泛免疫球蛋白产生反应的人类抗体，具有广泛的种特异性。免疫检测系统中大量使用单克的种特异性。免疫检测系统中大量使用单克隆抗体，嗜异性抗体可与啮齿类动物隆抗体，嗜异性抗体可与啮齿类动物IgG的的Fc段结合。这样嗜异性抗体既可与检测系统段结合。这样嗜异性抗体既可与检测系统中的捕获抗体结合、又可和标记抗体结合，中的捕获抗体结合、又可和标记抗体结合，造成检测结果假阳性或假性升高。嗜异性抗造成检测结果假阳性或假性升高。嗜异性抗体干扰的程度、频率与患者的疾病状态、年体干扰的程度、频率与患者的疾病状态、年龄、性别等无关。龄、性别等无关。干扰因素和对策干扰因素和对策-嗜异性抗体嗜异性抗体 将将11261

11、份血清标本使用荧光时间分辨免份血清标本使用荧光时间分辨免疫分析系统（疫分析系统（PE公司，二步法、双位点）检公司，二步法、双位点）检测测CEA，将缓冲液中加入小牛，将缓冲液中加入小牛IgG 约约210个病个病人、人、3.34.7%的标本出现假性升高；加入的标本出现假性升高；加入15mg/L热处理小鼠热处理小鼠IgG（MAK33）（Roche）可将干扰降为）可将干扰降为0.86%；同浓度天然；同浓度天然小鼠小鼠IgG无效；去除捕获抗体或标记抗体的无效；去除捕获抗体或标记抗体的Fc段也可将干扰降至段也可将干扰降至0.1%。Clinical Chemistry 2002；48(4):613621 处

12、理方法处理方法病人数病人数 频率（）频率（）1切除捕获抗体切除捕获抗体Fc段和加入热处段和加入热处理理15mg/LMAK33后结果正常后结果正常 148 3.02仅切除捕获抗体仅切除捕获抗体Fc段后结果正段后结果正常常 41 0.823切除捕获抗体切除捕获抗体Fc段或加入段或加入15mg/L天然天然MAK33或或15mg/L热处理热处理MAK33后结果正常后结果正常 4 0.084仅加入仅加入15mg/L热处理热处理MAK33后后结果正常结果正常 3 0.06表表1.不同处理方法对嗜异性抗体干扰的排除不同处理方法对嗜异性抗体干扰的排除干扰因素和对策干扰因素和对策-嗜异性抗体嗜异性抗体 使用使用

13、Access免疫化学发光检测系统测免疫化学发光检测系统测定定TSH、PSA、HCG和皮质醇，前三项为和皮质醇，前三项为双位点非竞争法，后为竞争法。双位点非竞争法，后为竞争法。160份标本份标本测定测定HCG有有5份（份（3.1%)假性升高；假性升高；53份标份标本（本（37.9%)用嗜异性抗体吸附剂吸收后结果用嗜异性抗体吸附剂吸收后结果出现差异性下降；有出现差异性下降；有4份标本的结果出现份标本的结果出现4SD的显著增高，使临床对结果的解释出现的显著增高，使临床对结果的解释出现改变。改变。Clin Chem 2003；49(7):11631169嗜异性抗体嗜异性抗体的干扰的干扰对策对策u 在标

14、本稀释液或待检标本中加入过量的动在标本稀释液或待检标本中加入过量的动 物物Ig(s)，但加入量不足或亚型不同时无，但加入量不足或亚型不同时无 效（要与捕获抗体和标记抗体的效（要与捕获抗体和标记抗体的Ig亚型相亚型相 同）。同）。u 捕获抗体使用捕获抗体使用F(ab)2，切除，切除Fc段。段。干扰因素和对策干扰因素和对策-自身抗体自身抗体 嗜靶抗原的自身抗体，如抗甲状腺球蛋嗜靶抗原的自身抗体，如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，能与白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，能与靶抗原结合形成复合物，在免疫检测系统中靶抗原结合形成复合物，在免疫检测系统中均可对靶抗原的测定结果造成负性干扰。均可

15、对靶抗原的测定结果造成负性干扰。判断嗜靶抗原的自身抗体对检测的负干判断嗜靶抗原的自身抗体对检测的负干扰，因紧密结合患者的疾病诊断、病史、其扰，因紧密结合患者的疾病诊断、病史、其他实验检查的结果综合分析。如甲亢、甲低、他实验检查的结果综合分析。如甲亢、甲低、I型糖尿病等。型糖尿病等。Erikssion等人采用针对等人采用针对cTnI中心稳定区中心稳定区域抗原位点的捕获和检测抗体，开发了新的域抗原位点的捕获和检测抗体，开发了新的cTnI检测方法，有利于具有检测方法，有利于具有cTnI自身抗体等干自身抗体等干扰物质的标本。采用新方法和目前一商品化试扰物质的标本。采用新方法和目前一商品化试剂盒共检测剂

16、盒共检测541份胸痛患者的血清，其中份胸痛患者的血清，其中13.5%的标本的标本cTnI两种方法检测均阳性，两种方法检测均阳性，14.2%的标本仅采用新方法检测阳性的标本仅采用新方法检测阳性。上述结果。上述结果说明心梗患者存在说明心梗患者存在cTnI自身抗体绝非特例自身抗体绝非特例。干扰因素和对策干扰因素和对策-自身抗体自身抗体 Clin Chem 2005;51(5):848-55嗜靶抗原自身抗体嗜靶抗原自身抗体的干扰的干扰对策对策 为避免以上情况出现，解决的办法是：为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前标本需用理化方法将免疫复合物解离测定前标本需用理化方法将免疫复合物解离后再测定。解离液组成：后再测定。解离液组成：0.3%Triton X100 1.5%CHAPS 15%SDS100l标本、标本、50 l解离液混匀，解离液混匀，56 30分钟分钟处理。处理。J Clin Microbiol 1999;37:18021808干扰因素和对策干扰因素和对策-补体补体 免疫检测系统中捕获抗体在向固相包被免疫检测系统中捕获抗体在向固相包被中和标记抗体的标记过程中，抗体分子发生中和标记抗体的