两种常用多肉植物高效组培快繁技术研究.doc

1、摘要：对市场常用的2两种多肉植物小透明和姬杂进行组培快繁技术研究，具体从材料的选取，愈伤组织诱导、增殖、分化，根的诱导和炼苗等方面，以组培去除病毒，提高繁殖系数，以加快多肉植物的应用，为大规模快速生产多肉植物组培苗提供理论和实践依据。关键词：多肉植物；高效组培；快繁技术“多肉植物”的概念由瑞士植物学家琼?鲍汉于1619年首先提出，意指具有肥厚多汁的茎、根或叶片的植物，又称为肉质植物或多浆植物。现代的多肉植物具体指植物营养器官的某一部分，如茎或叶或根（少数种类兼有两部分）具有发达的薄壁组织用以贮藏水分，在外形上显得肥厚多汁的一类植物。”多肉植物常作药用，食用，酿酒，建材，纤维，绿篱等。因其观赏性

2、与抗污染性已然成为时下家庭种植的热点。1 材料与方法1.1 材料以小透明和姬杂的叶片为外植体。1.2 方法1.2.1 取材与消毒。将材料放人烧杯中用自来水冲洗干净，先用适量的洗衣粉清洗，倒去洗涤剂，然后在自来水下冲洗30min以上。再在超净工作台上用75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗23次后，迅速倒入0.1%hgcl2液中浸泡5min，倒去hgcl2液，再用无菌水冲洗45次，剥取叶片，将材料切成1cm左右的小段，用滤纸吸干水后备用。1.2.2 培养条件。培养温度在（252）的恒温条件下，光照条件一般是2000lx，光照每日1216h。1.2.3 愈伤组织诱导培养。在无菌条件下，将经过消毒处理

3、、切成icm左右的备用材料分别接种到原配方a1和改进的a2和a3。以下3种培养基ph值5.86.2，植物生长调节剂单位为mg/l，文中蔗糖与琼脂均为质量分数，b1b4和c1c5培养基相同。a1：ms+ba4.0+3%蔗糖+0.7%琼脂；a2：ms+ba 4.0+naa0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂；a3：ms+2，4-d 4.0+naa 0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂。1.2.4 愈伤组织分化培养。将愈伤组织在无菌条件下转入b1原配方和b2b4改进配方的不同分化培养基。b1：ms+ba 5.0+naa 0.2+3%蔗糖+0.7%琼脂；b2：ms+ba 5.0+tdz 1.0+naa 0.5+3

4、%蔗糖+0.7%琼脂；b3：ms+ba5.0+tdz 1.5+naa 0.5+3%蔗糖+0.7%琼脂；b4：ms+ba5.0+tdz 2.0+naa 0.5+3%蔗糖+0.7%琼脂。1.2.5 诱导生根培养。待叶片长至1.01.5cm时，取出幼苗，在无菌条件下接种到生根培养基中继续培养。生根培养基采用1/2ms基本培养基，即矿物质元素含量减半，其他的成分不变。生根培养基配方为c1原配方和c2c5。c1：1/2ms+naa 1.5+3%蔗糖+0.7%琼脂；c2：i/2ms+iba1.5+naa 1.5+3%蔗糖+0.7%琼脂；c3：i/2ms+iba 2.5+naa1.5+3%蔗糖+0.7%琼脂

5、；c4：1/2 ms+naa 1.5+ba0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂；c5：1/2ms+naa 1.5+ba0.6+3%蔗糖+0.7%琼脂。1.2.6 炼苗与移栽。当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外进行闭瓶炼苗710d，遮荫度为50%70%。然后在自然光下进行开瓶炼苗23d。开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖12d，然后部分开盖12d，最后完全揭盖。2 结果与分析2.1 不同培养基配方对两种多肉植物愈伤组织诱导的影响从表1可以看出：外植体培养一定时间后，从诱导率而言没有差别，均达到100%，但不同的植物生长调节剂组合的培养基诱导生长的愈伤组织形态有明显不同。由此可见，在诱导2种

6、植物愈伤组织的过程中，采取a3配方：ms+2，4-d4.0+naa 0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂这一培养基效果比较理想。2.2 不同培养基配方对两种多肉植物愈伤组织分化的影响将a3配方获得的愈伤组织转入不同芽诱导培养基后，愈伤组织分化有不同表现，培养一定时间其结果如表2，可见：在不同的培养基上愈伤组织都有不同程度的分化。小透明在b2培养基中分化、诱导芽效果最好，芽分化较快，苗健壮，并且有丛生芽，b1、b3配方两者效果次之，虽分化效果较好，但是苗较为细弱。b4配方效果最差，很少有不定芽分化。但姬杂在b4培养基中分化、诱导芽效果最好，芽分化较快，苗健壮，并且有丛生芽，b1、b3配方两者效果次之，

7、虽分化效果较好，但是苗较为细弱。b2配方效果最差，很少有不定芽分化。2.3 不同培养基配方对两种多肉植物生根的影响待植株长至1.01.5cm时，将幼苗切下，在无菌的条件下分别接种到生根培养基c1（原配方）及c2c5配方中继续培养。表3结果表明，小透明生根培养15d左右后分化出不定根。培养40d左右后组培苗高达1.22.8cm，叶35片，叶色浓绿，有1.52.6cm长的粗壮根46条。由表3可知，促进根生长的最佳配方为c4：1/2 ms+naa 1.5+ba 0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂。姬杂生根培养20d左右后分化出不定根，培养40d左右后组培苗高达1.03.2cm，叶达34片。由表3可知，促

8、进根生长的最佳配方为c2：1/2ms+iba 1.5+naa1.5+3%蔗糖+0.7%琼脂。2.4 移栽苗的生长情况组培苗移栽后，要保持其较高的湿度，每23d浇上适量的营养液，温度保持在20左右。30d左右后小透明和姬杂小苗长势良好，叶片翠绿。移栽苗的成活率在95%以上。3 结论3.1 小透明的高效组培扩繁体系在愈伤诱导方面是a3配方：ms+2，4-d4.0+naa0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂；分化配方是b2：ms+ba 5.0+tdz 1.0+naa0.5+3%蔗糖+0.7%琼脂；生根配方是c4：1/2 ms+naa 1.5+ba0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂。此配方体系的繁殖周期需要10

9、5d，而在原配方体系愈伤诱导a1配方：ms+ba 4.0+3%蔗糖+0.7%琼脂，分化b1配方：ms+ba5.0+naa0.2+3%蔗糖+0.7%琼脂，生根c1配方：1/2ms+naa 1.5+3%蔗糖+0.7%琼脂，繁殖周期至少需要123d，可见，经优化后，小透明的高效组培扩繁体系在扩繁时间是比原配方至少提高1.17倍。3.2 姬杂的高效组培扩繁体系在愈伤诱导方面是a3配方：ms+2，4-d4.0+naa 0.3+3%蔗糖+0.7%琼脂；分化配方是b4：ms+ba 5.0+tdz 2.0+naa0.5+3%蔗糖+0.7%琼脂；生根配方是c2：1/2ms+1 ba 1.5+naa1.5+3%蔗糖+0.7%琼脂。此配方体系的扩繁速度很快，在分化阶段，分化率能达到0.974，而原配方b1分化率是0.409，说明采用这套扩繁体系其扩繁速度比原配方至少提高2-3倍。