1、受试大鼠注射DNP(二硝基苯酚)可能引起什么现象?其机理何在?复制中为什么会出现领头链和随从链?简述乳糖操纵子的结构及其调节机制。5何谓限制性核酸内切酶?写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。生物化学试卷1答案一、名词解释:1螺旋为蛋白质的二级结构类型之一。在螺旋中,多肽链围绕中心轴作顺时针方向的螺旋上升,即所谓右手螺旋。每3.6个氨基酸残基上升一圈,氨基酸残基的侧链伸向螺旋的外侧,螺旋的稳定依靠上下肽之间所形成的氢键维系。 2Glycolysis: Aanaerobic degradation is universal and ancient central pathway o
2、f glucose catabolism. In glycolysis a molecule of glucose is degraded in a series of enzymatic reactions to yield two molecules of pyruvate or lactate. The basic process of glycolysis can be divided into two phase: reactions from glucose to pyruvate and from pyruvate to lactate.3one carbon unit 一碳单位
3、 指某些氨基酸分解代谢过程中产生含有一个碳原子的基团,包括甲基、亚甲基、甲烯基、甲炔基、甲酰基和亚氨甲基等。4机体在生命活动过程中不断摄入O2及营养物质,在细胞内进行中间代谢,同时不断排出CO2及代谢废物,这种机体和环境之间不断进行的物质交换即物质代谢。5Expression vector: A modified plasmid or virus that carries a gene or cDNA into a suitable host cell and there directs synthesis of the encoded protein. Some expression vec
4、tors are designed for screening DNA libraries for a gene of interest; others, for producing large amounts of a protein from its cloned gene.6核糖体:核糖体由rRNA与核糖体蛋白共同构成,分为大、小两个亚基。核糖体的功能是作为细胞内蛋白质的合成场所。在核糖体中,rRNA和核糖体蛋白共同为mRNA、tRNA与氨基酸的复合物、翻译起始因子、翻译延长因子等多种参与蛋白合成过程的分子提供了识别和结合部位。7卵磷脂胆固醇脂酰转移酶,催化HDL中卵磷脂2位上的脂肪酰基
5、转移至游离胆固醇的3位上,使位于HDL表面的胆固醇酯化后向HDL内核转移,促成HDL成熟及胆固醇逆向转运。8指某些嘌呤、嘧啶、叶酸以及某些氨基酸类似物具有通过竞争性抑制或者以假乱真等方式干扰或阻断核苷酸的正常合成代谢,从而进一步抑制核酸、蛋白质合成以及细胞增殖的作用,即为核苷酸合成的抗代谢作用。9由RNA-pol,局部解开的DNA双链及转录产物RNA3-端一小段依附于DNA模板链而组成的转录延长过程的复合物。10Gluconeogenesis: The process of transformation of non-carbohydrates to glucose or glycogen i
6、s termed as gluconeogenesis. Non-carbohydrates are some compounds, such as glucogenic amino acids, lactate, glycerol, and other organic acids.二、填空:1靠配对碱基之间的氢键 ;疏水性碱基堆积力2ApoB100;胆固醇酯3cAMP ;cGMP4典型转录起始点 ;热刺激5氧化型谷胱甘肽;还原型谷胱甘肽6中心轴;顺时针;右手736;388线粒体;胞浆9降低;增加10.解链;延长三、问答:1酶在发挥其催化作用之前,必须先与底物密切结合。这种结合不是锁与钥匙式的
7、机械关系,而是在酶与底物相互接近时,其结构相互诱导、相互变形和相互适应,这一过程称为没底物结合的诱导契合假说。酶的构象改变有利于与底物结合;底物也在酶的诱导下发生变形,处于不稳定状态,易受酶的催化攻击。这种不稳定状态称为过渡态。过渡态的底物与酶的活性中心在结构上最相吻合,从而降低反应的活化能。2解偶联剂大部分是脂溶性物质,最早被发现的是2,4-二硝基苯酚(DNP)。给受试动物注射DNP后,产生的主要现象是体温升高、氧耗增加、P/O比值下降、ATP的合成减少。其机理在于,DNP虽对呼吸链电子传递无抑制作用,但可使线粒体内膜对H+的通透性升高,影响了ADP+PiATP的进行,使产能过程与储能过程脱
8、离,线粒体对氧的需求增加,呼吸链的氧化作用加强,但不能偶联ATP的生成,能量以热能形式释放。3DNA复制是半不连续的,顺着解链方向生成的子链,复制是连续进行的,这股链称为领头链。另一股链因为复制的方向与解链方向相反,不能顺着解链方向连续延长,这股不连续复制的链称为随从链。原因有.链延长特点只能从5 .同一复制叉只有一个解链方向。DNA单链走向是相反的。因此在沿5方向上解开的母链上,子链就沿 5 方向延长,另一股母链5 解开,子链不可能沿5 。复制的方向与解链方向相反而出现随从链。4乳糖操纵子含Z、Y、及A三个结构基因,编码降解乳糖的酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P和一个调节基因I,在
9、P序列上游还有一个CAP结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个编码基因由同一个调控区调节。乳糖操纵子的调节机制可分为三个方面:(1)阻遏蛋白的负性调节 没有乳糖时, 阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录起动;有乳糖时,少量半乳糖作为诱导剂结合阻遏蛋白,改变了它的构象,使它与O序列解离,RNA聚合酶与P序列结合,转录起动。(2) CAP的正性调节 没有葡萄糖时,cAMP浓度高,结合cAMP的CAP与lac操纵子启动序列附近的CAP结合位点结合,激活RNA转录活性;有葡萄糖时,cAMP浓度低,cAMP与CAP结合受阻,CAP不能与CAP
10、结合位点结合,RNA转录活性降低。(3)协调调节 当阻遏蛋白封闭转录时,CAP对该系统不能发挥作用;如无CAP存在,即使没有阻遏蛋白与操纵序列结合,操纵子仍无转录活性。5解释限制性内切核酸酶;酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构。生物化学试卷21脱氧核苷酸2核苷酸的负反馈调节作用3激素敏感脂肪酶4核心酶5DNA cloning6Km7Oxidative Phosphorylation8泛素化标记9逆转录酶 10基因的不连续性填空(每空1分,共20分):1在嘌呤核苷酸补救合成中HGPRT催化合成的核苷酸是 和 。2原核生物转录终止分为_ _与_两大类。3设法将众多的转化菌落和菌斑区分开来,并鉴
11、定哪一菌落或噬菌斑所含重组DNA分子确实带有目的基因,这一过程即为或选择, 有直 接选择法和非直接选择法, 直接选择法主要有 、 、 等。4在酶浓度不变的情况下,底物浓度对酶促反应速度的作图呈 双曲线,双倒数作图呈 线。5甲硫氨酸循环中,产生的甲基供体是 ,甲硫氨酸合成酶的辅酶是 。6蛋白质合成后其空间结构的修饰包括 和 。7脑是机体耗能的主要器官之一,正常情况下,主要以 作为供能物质,长期饥饿时,则主要以 作为能源。8生物素是体内多种 酶的辅酶,参与体内 的羧化过程。9调节血糖浓度最主要的激素是 和 。问答(每题10分,共50分):1酮体是如何产生和利用的?2为什么测定血清中转氨酶活性可以作
12、为肝、心组织损伤的参考指标?3讨论复制保真性的机制。4试述乳酸异生为葡萄糖的主要反应过程及其酶。5举例说明蛋白质一级结构、空间构象与功能之间的关系。生物化学试卷2答案1脱氧核苷酸:脱氧核苷与磷酸通过酯键结合即构成脱氧核苷酸,它们是构成DNA的基本结构单位,包括dAMP、dGMP、dTMP、dCMP四种。2核苷酸合成的反馈调节:指核苷酸合成过程中,反应产物对反应过程中某些调节酶的抑制作用,反馈调节一方面使核苷酸合成能够适应机体的需要,同时又不会合成过多,以节省营养物质和能量的消耗。3即甘油三酯脂肪酶,它对多种激素敏感,是脂肪动员的关键酶。42合称核心酶。转录延长阶段只需要核心酶。5DNA clo
13、ning: Recombinant DNA technique in which specific cDNAs or fragments of genomic DNA are inserted into a cloning vector, which then is incorporated into cultured host cells (e.g., E. coli cells) and maintained during growth of the host cells; also called gene cloning.6Km 即米氏常数。Km米氏常数是单底物反应中酶与底物可逆地生成中
14、间产物和中间产物转化为产物这三个反应的速度常数的综合。Km=k2+k3/k1 米氏常数等于反应速度为最大速度一半时的底物浓度。7Oxidative Phosphorylation:The precess by which NADH and FADH2 are oxidized and the coupled formation of ATP from ADP, is called oxidative phosphorylation.8泛素化标记 是一种依赖ATP参与在胞浆中进行的蛋白质标记过程,标记多个泛素化分子后由蛋白酶体将其标记蛋白分解成多肽小分子物质。9以RNA为模板合成DNA的过程,是
15、RNA病毒的复制形式,需逆转录酶催化,过程是RNA为模板合成DNA/RNA杂化双链,然后水解RNA,再合成DNA双链的过程。10真核结构基因两侧存在有不被转录的非编码序列,往往是基因表达的调控区。在编码基因内部有内含子将外显子分割开来,因此真核基因是不连续的。1IMP ;GMP2依赖因子;非依赖因子3筛选;抗药性标志选择;标记补救;分子杂交法4矩形;直5S腺苷甲硫氨酸;维生素B126亚基聚合;辅基连接和疏水脂链的共价连接等7葡萄糖;酮体8羧化;CO29胰岛素; 胰高血糖素1酮体是脂肪酸在肝脏经有限氧化分解后转化形成的中间产物,包括乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮。肝细胞以-氧化所产生的乙酰辅酶A为原料
16、,先将其缩合成羟甲戊二酸单酰CoA(HMG-CoA),接着HMG-CoA被HMG-CoA裂解酶裂解产生乙酰乙酸。乙酰乙酸被还原产生-羟丁酸,乙酰乙酸脱羧生成丙酮。HMG-CoA合成酶是酮体生成的关键酶。肝脏没有利用酮体的酶类,酮体不能在肝内被氧化。酮体在肝内生成后,通过血液运往肝外组织,作为能源物质被氧化利用。丙酮量很少,又具有挥发性,主要通过肺呼出和肾排出。乙酰乙酸和-羟丁酸都先被转化成乙酰辅酶A,最终通过三羧酸循环彻底氧化。2正常时体内多种转氨酶主要存在于相应组织细胞中,血清含量极低,如谷丙转氨酶(GPT)在肝细胞中活性最高,而谷草转氨酶(GOT)在心机细胞中活性最高,当肝细胞或心机细胞损
17、伤时上述转氨酶分别释放入血。3. 遵守严格的碱基配对规律;. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能;DNA-pol依据碱基表现的亲和力,实现正确的碱基选择。. 复制出错时DNA-pol I的及时校读功能。4(1)乳酸经LDH催化生成丙酮酸。(2)丙酮酸在线粒体内经丙酮酸羧化酶催化生成草酰乙酸,后者经GOT催化生成天冬氨酸出线粒体,在胞液中经GOT催化生成草酰乙酸,后者在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸。(3)磷酸烯醇式丙酮酸循酵解途径至1,6二磷酸果糖。(4)1,6二磷酸果糖经果糖二磷酸酶1催化生成6磷酸果糖,再异构为6磷酸葡萄糖。(5)6磷酸葡萄糖在葡萄糖6磷酸酶作用下生成葡萄
18、糖。5蛋白质一级结构是高级结构的基础。有相似一级结构的蛋白质,其空间构象和功能也有相似之处。如垂体前叶分泌的肾上腺皮质激素的第4至第10个氨基酸残基与促黑激素(-MSH,-MSH)有相同序列,因此ACTH有较弱的促黑激素作用。又如广泛存在与生物学的细胞色素C,在相近的物种间,其一级结构越相似,空间构象和功能也越相似。在物种上,猕猴和人类很接近,二者的细胞色素C只相差1个氨基酸残基,所以空间构象和功能也极相似。生物化学试卷31酶的活性中心2P/O比值3de novo synthesis of purine nucleotide4TC 环5多聚核蛋白体6Expression vector7糖原(g
19、lycogen)8-谷氨酰基循环9限速酶10SnRNP(小分子核糖核蛋白体)二、填空(每空1分,共20分):1Km值等于酶促反应速度为最大速度 时的 浓度。2维生素B2在体内的活性型为 及 ,分别可作为黄素酶的辅基。3核苷酸抗代谢物中,常用嘌呤类似物是 ;常用嘧啶类似物是 。4分泌蛋白进入内质网过程N端信号肽与 结合导向ER膜,ER腔内 促进信号肽裂解。5一个完整的基因克隆过程包括:目的基因的获取,的选择与改造, 的连接,重组DNA分子导入受体细胞,筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。6在一轮三羧酸循环中,有 次底物水平磷酸化,有 次脱氢反应。7血液中转运氨的两种主要方式是: 和 。8血浆
20、中间密度脂蛋白升高,血浆脂质中的_和_也会升高。9DnaA,B,C和UvrA,B,C分别是E.coli中与复制有关的蛋白质,前者的作用是 ;后者的作用是 。10糖异生的原料有 、 和生糖氨基酸。三、问答(每题10分,共50分):1胞浆中的NADH如何参加氧化磷酸化过程?试述其具体机制。2举例说明蛋白质的变构效应。3糖、脂、蛋白质在体内是否可以相互转变?简要说明可转变的途径及不能转变的原因。4试述复制和转录的异同点。5 试述人体胆固醇的来源与去路。生物化学试卷3答案酶分子中与酶的活性密切相关的基团称为酶的必需基团。这些必需基团在一级结构上可能相距很远,但在空间结构上彼此靠近,形成具有特定空间结构
21、的区域。该区域能与底物特异地结合并将底物转化为产物。该区域称为酶的活性中心。2P/O比值是指物质氧化时,每消耗1摩尔氧原子所消耗的无机磷的摩尔数(或ADP摩尔数),也即生成ATP的摩尔数。3de novo synthesis of purine nucleotide:Pathway for synthesis of a nucleotide, from simple precursors; as distinct from a salvage pathway. 4TC环:TC环是tRNA的茎环结构之一,因含有假尿嘧啶()而命名。5不论真核还是原核细胞中1条mRNA模板链可能附着10-100个核
22、蛋白体,同时进行肽链合成,这种mRNA和多个核蛋白体聚合物称为多聚核蛋白体。6Expression vector:7糖原:动物体内糖的储存形式,是可以迅速动用的葡萄糖储备。8-谷氨酰基循环 指通过谷胱苷肽的代谢作用将氨基酸吸收和转运到体内的过程。9指整条代谢通路中,催化反应速度最慢的酶,它不但可以影响整条代谢途径的总速度,还可改变代谢方向,是代谢途径的关键酶,常受到变构调节和/或化学修饰调节。10小分子核糖核蛋白体。由snRNA和核内蛋白质组成,作为RNA剪接的场所。1一半;底物2FAD;FMN36-巯基嘌呤;5-氟尿嘧啶4信号肽识别颗粒;信号肽酶5载体;目的基因与载体61;47丙氨酸;谷氨酰
23、胺8甘油三酯;胆固醇9复制起始的解链 ;DNA损伤的修复10甘油;乳酸1线粒体内生成的NADPH可直接参加氧化磷酸化过程,但在胞浆中生成的NADPH不能自由透过线粒体内膜,故线粒体外NADPH所带的氢必须通过某种转运机制才能进入线粒体,然后再经呼吸链进行氧化磷酸化过程。这种转运机制主要有-磷酸甘油穿梭和苹果酸-天冬氨酸穿梭两种机制。(1)-磷酸甘油穿梭:这种穿梭途径主要存在于脑和骨骼肌中,胞浆中的NADH在磷酸甘油脱氢酶催化下,使磷酸二羟丙酮还原成-磷酸甘油,后者通过线粒体外膜,再经位于线粒体内膜近胞浆侧的磷酸甘油脱氢酶催化下氧化生成磷酸二羟丙酮和FADH2,磷酸二羟丙酮可穿出线粒体外膜至胞浆
24、,参与下一轮穿梭,而FADH2则进入琥珀酸氧化呼吸链,生成2分子ATP(2)苹果酸-天冬氨酸穿梭:这种穿梭途径主要存在于肝和心肌中,胞浆中的NADH在苹果酸脱氢酶催化下,使草酰乙酸还原为苹果酸,后者通过线粒体外膜上的-酮戊二酸转运蛋白进入线粒体,又在线粒体内苹果酸脱氢酶的作用下重新生成草酰乙酸和NADH。NADH进入NADH氧化呼吸链,生成3分子ATP。可见,在不同组织,通过不同穿梭机制,胞浆中的NADH进入线粒体的过程不一样,参与氧化呼吸链的途径不一样,生成的ATP数目不一样。2当配体与蛋白质亚基结合引起亚基构象变化,从而改变蛋白质的生物活性,此种现象称为变构效应。变构效应也可发生与亚基之间
25、,即当一个亚基构象的改变引起相邻的另一个亚基的构象和功能的变化。例如一个氧分子与Hb分子中一个亚基结合,导致其构象变化,进一步影响第二个亚基的构象变化,使之更易与氧分子结合,依次使四个亚基均发生构象改变而与氧分子结合,起到运输氧的作用。3糖与脂:糖容易转变为脂类磷酸二羟丙酮-磷酸甘油甘油三酯或胆固醇脂肪酸乙酰CoA 糖脂变糖可能性小,仅甘油,丙酮,丙酰CoA可异生成糖,其量甚微。蛋白质与糖、脂:蛋白质可以转变为糖、脂,但数量较小,生糖氨基酸异生成糖,生酮、生糖氨基酸可生成脂类。糖、脂不能转变为蛋白质,糖、脂不能转变为必需氨基酸,虽可提供非必需氨基酸的碳骨架,但缺乏氮源。4复制和转录都以DNA为
26、模板,都需依赖DNA的聚合酶,聚合过程都是在核苷酸之间生成磷酸二酯键,合成的核酸链都从5向3方向延长,都需遵从碱基配对规律。复制和转录最根本的不同是:通过复制使子代保留杂代全部遗传信息,而转录只需按生存需要部分信息表达。因此可以从模板和产物的不同来理解这一重大区别。此外,聚合酶分别是DNA pol和RNA pol,底物分别是dNTP和NTP,还有碱基配对的差别,都可从二者产物结构性质不同上理解。5人体胆固醇的来源有:从食物中摄取。机体细胞自身合成。去路有:用于构成细胞膜。在肝脏可转化成胆汁酸。在性腺、肾上腺皮质可转化成性激素、肾上腺皮质激素。在皮肤可转化成维生素D3。还可酯化成胆固醇酯,储存在
27、胞液及血浆脂蛋白中。生物化学试卷41glycolysis2尿素循环3酶的化学修饰4因子5脂溶性维生素6结合酶7解偶联剂8嘧啶核苷酸的补救合成9Okazaki Fragment10三联体遗传密码1糖异生的原料有 、 和生糖氨基酸。2体内有三种含硫氨基酸,它们是甲硫氨酸、 和 。3当体内葡萄糖有富余时,糖在体内很容易转变为脂,因为糖分解产生的 可作为合成脂肪酸的原料,磷酸戊糖途径产生的 可为脂酸合成提供还原当量。4真核生物的RNA聚合酶催化转录生成_,然后加工成_。5泛酸在体内经肠道吸收后几乎全部用于 的合成,该物质是 的辅酶。6. 科学家感兴趣的外源基因又称,其来源有几种途径:化学合成,酶促合成cDNA, 制备的基因组DNA及技术。嘌呤核苷酸从头合成的调节酶是 和 。干扰素抑制病毒的作用有使eIF-2 和活化 酶再激活核酸内切酶两种机制。9. 位于血浆脂蛋白表面的是 基团
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