1、审核 人起草日期年 月 日审核日期批准日期 年 月 日批 准 人执行日期分发部门公司各部门一、目的 对实验室日常用试剂、耗材等易耗品进行管理,确保实验室工作正常、安全。二、范围 本制度适用于实验过程中所涉及的试剂、耗材等易耗品。三、责任者本公司技术部门对本规程实施负责。四、程序 4.1实验室易耗品管理 4.1.1 实验室易耗品的购买需经实验室负责人以上部门管理人员批准。 4.1.2 常用试剂存放条件。(见附录1) 4.1.3 对字迹不清的试剂标签要及时更换,对过期失效和没有标签的试剂不准使用,并要进行妥善处理。 4.1.5 常用试剂和耗材在用完之前及时提出领用申请,以免影响后续实验。 4.1.
2、6 已经取出的试剂原则上不可以再放回试剂瓶内;试剂使用结束后,做好密封工作,并放回原位。 4.1.7 试剂和耗材的使用严格按照实验操作规范,并做好一定的防护措施 4.1.8 易耗品实行存放建账制,若有减少或增加及时建账。 4.2 常用试液配置说明(见附录2)附录1常用试剂存放条件名称性质新用处理方式保存条件备注血清液体分装-20培养基4固体培养基粉末4避光配置后无菌检测胰酶PSPBSPBS粉末常温干燥避光配置滤菌电泳琼脂常温干燥一抗二抗-20避光DIPA-20避光光PCR试剂注:试剂盒内试剂按其说明书要求存放附录2 常用试液配置配置支原体检测培养基支原体半流体培养基:猪胃消化液 500ml 氯
3、化钠 2.5g牛肉浸液(1:2) 葡萄糖5.0g酵母浸粉 5.0g 琼脂2.5-3.0gpH值7.60.2。于121灭菌15分钟。无菌检测培养基硫乙醇酸盐流体培养基:酪胨(胰酶水解)15.0g 酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g 氯化钠2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的1.Oml0.1刃天青溶液硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g (或硫乙醇酸)(0.3ml) 水1000ml 除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调pH 值为弱碱性,煮沸,滤清,加人葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调pH 值使灭菌后为7.1士0.2 。分装至适宜的容器中,其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(
4、粉红色)不超过培养基深度的1/2 , 灭菌在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5 ,否则,须经100 水浴加热至粉红色消失(不超过20 分钟)后,迅速冷却,只限加热1次,并防止被污染。改良马丁培养基:胨5.0g 磷酸氢二钾1.0g酵母浸出粉2.0g 硫酸镁0.5g葡萄糖20.0g 水l000ml 除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调pH 值约为6.8 ,煮沸;加人葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调pH值使灭菌后为6.4士0.2 ,分装,灭菌。实验用PBS组份浓度:137 mM NaCl,2.7mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4配制量:1L配置方
5、法: 1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。 NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。4. 高温高压灭菌后,室温保存。注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。50TAE组分浓度:2mol/L Tris碱;1mol/L乙酸;100mmol/L EDTA;水配置量:配制方法:1.称下列试剂,置于1L烧杯中。Tris碱 242g0.5 mol/L EDTA
6、(pH 8.0) 200ml或(Na2EDTA2H2O 37.2g)3. 加入57.1 ml冰乙酸(17.4 mol/L)4. 加去离子水定容至1L,室温保存。4%多聚甲醛1.称取40g多聚甲醛。2.加入0.2M的PB 500ml,加热溶解。3.冷却后过滤,加双蒸水定容至1000ml。琼脂糖凝胶1.根椐制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉,加入适当的锥形瓶中2加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。4.微波炉中加热熔化琼脂糖。必须注意,在微波炉中加热时间不宜过长,每次当溶液起泡沸腾时停止加热,否则会引起溶液过热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时,必须保证琼脂糖充分完全熔化,否则,会造成电泳图像模糊不清。5. 使溶液冷却至60左右,如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 mg/ml),并充分混匀。溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套。6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在35 mm之间。7. 在室温下使胶凝固(大约30分钟1小时),然后放置于电泳槽中进行电泳。凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4下保存,一般可保存25天。
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