国标法检测食品中大肠菌群技术文件赛项规程Word格式.docx

1、检验程序及操作技术依照食品安全国家标准 品微生物学检验大肠菌群计数（GB4789.3-2010 ）进行考核评 判。本项目主要考察学生在食品微生物学检验实施过程中所涉 及的样品稀释液的制备、样品的接种、无菌操作、发酵结果的判 断及数据处理等环节的基本操作技能， 以及在整个实验过程中的 操作文明和操作安全意识。竞赛内容具体分为两个环节， 第一环节为初发酵试验， 主要 包括采样、制备样品稀释液、 样液接种；第二环节为复发酵试验， 包括初发酵结果观察判断、转接种、复发酵结果观察、出具检验 报告。2、竞赛说明本赛项由一名选手独立完成整个操作过程， 并要求参赛选手 在0.5 个小时内完成初发酵试验 （15

2、 分种）和复发酵试验 （15分钟）初发酵结的各步操作内容，如超时，将按超出时间的长短酌情扣分。另外 参赛选手还应明确一点， 竞赛过程中用到的初发酵管、果、复发酵管、复发酵结果及MPN佥索表均由工作人员事先准备 好，参赛选手只要按照竞赛内容里规定项目依据国标要求完成各 步操作。五、评分办法和评分标准1、评分办法本项竞赛评分严格按照公平、公正、公开的原则。竞赛成绩 按照百分制计分。竞赛成绩的评定完全依照赛前制定的技术文件中的主要考 核内容及评分标准， 根据选手实际操作表现， 由现场裁判组进行 客观评判、 计分。 有关现场操作考核内容及评分标准另见文件中 相关标题。在竞赛过程中， 参赛选手如有不服从

3、裁判判决、 扰乱赛场秩 序、舞弊等不文明行为，由裁判长按照规定扣减相应分数，情节 严重的取消竞赛资格，竞赛成绩记 0 分。2、对考评员的要求1）不得少于 3 人。2）提前 15min 到达考核现场，熟悉考核规则、评分标准。3）按评分标准独立评分。不得涂改考核记录表。3、评分标准项目考核内容表1主要考核内容及评分标准分值评分细则扣分主要扣分点记录（35分）称取25 g样品,放入盛有 225 mL生理盐水的无菌均 质袋中，用拍击式均质器 拍打1 min2 min，制成 1:10的样品匀液。样品匀 液的pH值应在6.57.5 之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl调

4、节。用1 mL无菌吸管吸取1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓缓 注入9 mL生理盐水的无菌 试管中，振摇试管或换用 支1 mL无菌吸管反复吹 打，使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估 计，按上述操作，依次制成 十倍递增系列稀释样品匀液。称量（称取方法、无 菌操作）拍击式均质器的使 用（方法、操作熟练 程度）进行pH值测试吸管使用（打开方式、 取液、调节液面、放液）稀释样品（顺序、混匀、 换管）试管操作（开塞、管口 灭菌、持法、盖塞）酒精灯无菌区操作操作熟练程度初发酵试验（15每个样品，选择3个适宜的 连续稀释度的样品匀液，每 个稀释度接种3管月桂基硫 酸盐胰蛋白胨

5、（LST）肉汤， 每管接种1mL3个稀释度的选择接种（发酵管的数量、 接种量）从制备样品匀液至样 品接种完毕，全过程不超过15 min复发酵（2036C 1 C培养 24 h 2 h, 观察倒管内是否有气泡产 生，24 h 2 h产气者进行 复发酵试验，如未产气则继 续培养至48 h 2 h，产气 者进行复发酵试验。未产气 者为大肠菌群阴性。用接种环从产气的LST肉汤 管中分别取培养物1环，移 种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB管中根据已准备好的初发 酵管样品判定结果，记 录在报告单上，此处在 原始记录及报告处进 行评分接种环的使用（持法、 灼烧灭菌、冷却、取培 养物、灼烧多余培养 物）产气管的选

6、择36 C 1 C培养 48 h 2 h, 观察产气情况。产气者，计 为大肠菌群阳性管。根据已准备好的复发 酵管样品判定结果，记 录在报告单上，此处在 原始记录及报告处进 行评分大肠菌 群最可 能数（MPN的报告按复发酵确证的大肠菌群 LST阳性管数，检索MPN表， 报告每g （mL）样品中大肠 菌群的MPN值。结果记录在报告单上， 此处在原始记录及报 告处进行评分文明操 作（10 分）实验后台面整理干净、物品 归位、器皿无破损5物品的整理归位器皿的破损情况原始 记录及报告（20 分）观察现象与记录一致、清 楚、无涂改10观察现象的记录征得评委同意，每改1次扣0.5分报告结果规范、正确、无涂改

7、结果的报告每改1次，扣1分完成 时间（30min ）共用（ ）分钟开始：结束：提前，不加分不扣分 按时，不加分不扣分 超时：每超1分钟，扣 1分（最多扣10分）合计评审专家签字: 核分人签字：六、竞赛规则1、选手参加考试竞赛顺序将通过抽签决定。2、参赛选手进入赛场，不允许携带任何书籍和其他纸质资料（相关技术资料由组委会提供），不允许携带通讯工具和存储设备。现场操作考核项目的操作规程、数据记录纸、签字笔等将由组委会统一提供，现场提供的物品各参赛选手可以根据竞赛需要自行选择使用。3、参赛选手必须在正式比赛前 15分钟到赛场候考室报到，报到时应持本人学生证、身份证，并携带（佩戴）大赛组委会签发的参赛

8、证、胸牌。只有等比赛正式开始后，方可进行操作。4、比赛期间，参赛选手必须严格遵守赛场纪律，不得在赛场内大声喧哗，不得作弊或弄虚作假；同时，必须严格遵守操作规程，确保设备和人身安全，并接受裁判员的监督和警示。若因选手因素造成设备故障或损坏， 无法进行比赛， 裁判长有权终止该队比赛； 若因非选手个人因素造成设备故障的， 由裁判长视具体情况做出裁决。5、在竞赛规定时间结束时各参赛选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。 参赛选手欲提前结束比赛， 应向现场裁判员举手示意并记录比赛终止时间， 比赛终止后， 不得再进行任何与比赛有关的操作。6、竞赛操作结束时，各参赛选手要按照大赛要求提交竞赛材料，

9、按照现场考试要求的名字进行命名，如不符合命名规则，体现单位信息与编号信息的，该队竞赛成绩将被取消。七、竞赛技术规范一）竞赛项目行业、职业技术标准竞赛项目的命题结合食品微生物检测职业岗位的技能需求，并参照 GB 4789.3-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数制定。二）赛场场地和环境1、本次竞赛在指定比赛赛场进行，操作比赛地点为黑龙江职业学院食品药品学院实训室， 比赛区环境标准要求照明、 控温良好，能提供稳定的水、电。2、竞赛所需试剂以及部分溶液，由组委会事先准备好，并标示清楚，整齐放臵在每位选手的比赛用品中，其余所用试剂、设备等（表2、3），也按照要求，事先放臵在比赛区域内

10、，供选手取用。表2竞赛项目所用主要设备、仪器、材料序号名称规格备注1拍击式均质器JX-05选手共用2电子天平3超净工作台4接种环每人1个酒精灯6无菌吸管1mL每人4个7无菌试管18X 180mm每人3个8初发酵管每人1套9复发酵管4套共用无菌均质袋1175%酉精棉球每人1瓶12pH试纸精密每人1本13吸水球专用平头小吸水球14火柴每人1盒15记号笔每人1支16嘉士利早餐饼干袋装、无夹心每人1袋17玻璃棒数量月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤9 mLX 9每人一套煌绿乳糖胆盐肉汤10 mLX 9无菌生理盐水含225mL的锥形瓶无菌 1 mol/L NaOH50mL无菌 1 mol/L HCl50ml九、奖

11、励办法竞赛只设单项奖，将评出一、二、三等奖和优秀奖，获奖比例分别为参赛人数的10% 20% 30%其余为优秀奖。获奖选手和获省内三等以上（含三等）奖项学生的指导教师，由省教育厅颁发相应证书。十、申诉与仲裁（一）申诉1、参赛队对不符合竞赛规定的设备、工具等材料，有失公正的评判、奖励以及对工作人员的违规行为等， 均可以提出申诉。2、申诉应在比赛结束后 1小时内提出，超过时效将不予受理。申诉时，应按照规定的程序由参赛队领队向大赛组委会递交书面申诉报告。报告中应对申诉事件的现象、发生的时间、涉及到的人员、申诉依据与理由等进行充分的、实事求是的叙述。事实依据不充分、仅凭主观臆断的申诉不予受理。 申诉报告须有申诉的参赛选手、指导教师和领队的签名。受理申诉的答复并受理申诉。4、参赛队不得采取过激行为攻击工作人员，否则不予受理申诉；在约定时间内，如约定的联系人未到场或中途离开，视为放弃申诉。二）仲裁1、大赛组委会负责受理比赛中出现的申诉并进行仲裁，以保证比赛的顺利进行和比赛结果的公平、公正。2、大赛组委会根据收集并经核对的证据、证词，按照合法的程序组织召开听证会进行听证和仲裁。3、参赛队不得因提起申诉或对申诉处理意见不服而停止比赛或滋事，否则按弃权处理。比赛不因申诉事件而组织重赛。一、其他本比赛办法与规则的最终解释权归大赛组委会。