新型冠状病毒标本采集、运送及保存.pptx

1、新型冠状病毒标本采集、运送及保存病毒研究室新型冠状病毒标本采集冠状病毒冠状病毒是一类具有囊膜的线性单股正链RNA病毒，基因组大小约27-31kb。冠状病毒5端具有帽状结构，3端具有poly(A)结构，是目前已知RNA病毒 中基因组最大的病毒。冠状病毒仅感染脊椎动物，可引起人和动物呼吸道、消化道和神经系统疾病。于1937年在禽类发现，1965年在人群中发现感染。1968年，Tyrrell、D.A.J等人从普通感冒患者鼻冲洗液接种到人胚气管细胞，鉴定为人冠状病毒。根据血清型和基因组特点，冠状病毒亚科被分为、和四个属。截至目前，已知感染人的冠状病毒共有7种，其中属有HCoV-229E和HCoV-NL

2、63，属有HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV以及此次爆发流行的SARS-CoV-2。新型冠状病毒2019年12月以来，湖北省武汉市发现多起病毒性肺炎病例，2020年1月7日，相关实验室检测出并证实为一种新型冠状病毒（SARS-CoV-2）。SARS-CoV-2属于属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与SARS-CoV和MERS-CoV有明显区别。据日前研究表明：SARS-CoV-2感染细胞的方式，是其外壳上的刺突蛋白（S Protein）与人体细胞的ACE2受体作用从而入侵细胞，是侵染宿主细胞的关键，其亲

3、和力是SARS病 毒的10-20倍。新型冠状病毒武汉株02照片来源：国家病原微生物资源库(中国 疾病预防控制中心病毒病预防控制所)5标本的类型（取材的 部位）标本运送培养基标本运送的时间和条 件标本的采集、运送和保存标本的采集、运送及保存是病毒病原学诊断的基本环节。病原学诊断运送培养基低温运送标本采集操作6采集拭子样本保存液常温运送标本的采集标本采集要求经过生物安全培训（培训合格）且具备相应的实验技能，操作熟 练、规范；做好个人防护：N95及以上防护口罩、护目镜、连体防护服、双层乳胶手套、防水靴套；如果接触了患者血液、体液、分泌物或排 泄物，应及时更换外层乳胶手套；住院病例的标本有所在医护人员

4、采集；密切接触者标本由当地指定的疾控机构、医疗机构负责采集标本的采集采集标本种类采集急性期呼吸道标本（包括上呼吸道及下呼吸道），重症优先采集下呼吸道标 本；根据临床需要可留取便标本、全血标本、血清标本标本种类上呼吸道标本：鼻拭子、咽拭子等，急性期采集下呼吸道标本：深咳痰、肺泡灌洗液、支气管灌洗液、呼吸道吸取物等便标本：如果不便于留取便标本，可采集肛拭子血液标本：尽量采集发病后7天内的急性期抗凝血，EDTA抗凝血清标本：尽量采集急性期、恢复期双份血清，急性期血清在发病7天内采集，第二份（恢复期）在发病后3-4周采集。血清标本主要用于抗体的测的标本的采集运送载体（采样液）的选择病毒保存液：1640

5、、普通肉汤pH7.47.6的 Hanks、Eagles水解乳蛋白液等为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素。样本保存液一般为含胍盐的病毒裂解液10运送培养基（病毒保存液）：运送培养基的性能体现在以下三个方面：抑菌效果好对病毒活毒的保存时间长有利于病毒的进一步研究标本的采集可灭活的样本保存液：灭活病毒，降低转运及检测的风险可使RNA酶灭活，减少RNA降解，提高检出率病毒保存液含病毒裂解液的样本保存液采样管的选择：仅用于核酸检测的样本（不培养病毒）建议用含病毒裂解液的采样管取材降低转运和检测风险可以减少病毒核酸的降解有利于提高病毒低拷贝数标本的检出清楚样本保存液的成分及作用裂解病毒、抑

6、制RNA酶活性减少病毒核酸降解裂解病毒、抑制RNA酶活性减少病毒核酸降解、增大核酸沉降系数有利 核酸的分离口咽拭子（OPS）纤维拭子植绒拭子采集部位：扁桃体、咽后壁鼻咽拭子（NPS）采集部位：鼻咽腔后壁。13标本的类型（取材的部位）：）：口鼻咽拭子急性期采集：最好发病72小时内，晨起后。咽拭子和鼻拭子采集方法1.咽拭子采集1）准备咽拭子（生理盐水浸湿甩干）光源和压舌板2）嘱患者发长“啊”音，将拭子越过舌根，在两侧扁桃体稍用力来回擦拭数次，再在咽后壁擦拭数次3）置拭子于标本保存液中，折断并拧紧管盖，贴上条形码后保存于冰箱待送检2.鼻拭子采集1取鼻拭子（生理盐水浸湿甩干），从鼻腔沿下鼻道的底部向后

7、缓缓进入（如图示）至有阻力（长度约为鼻孔到耳根）2轻轻旋转一周（如遇反射性咳嗽，应停留片刻），然后缓慢取出拭子3置拭子于标本保存液中，折断并盖好贴上条形码后保存于冰箱待送检咽喉壁扁桃体举例正确错误痰液支气管灌洗液：将收集器头部从鼻孔 或气管插口处插入气管（约30cm深，注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收下呼吸道标本深咳痰：咳出的痰收集于含采样液的螺口塑料管中。如果痰液未收集于采样液中，可在检测前加入2-3ml采 样液或等体积的痰消化液集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液冲洗收集器1次（亦可 气管插管抽吸物用小孩导尿管接在50ml注射器上来替 代收集）支气管肺泡灌洗液肺泡灌洗液：局麻

8、后，通过纤支镜 操作16鼻咽抽取物或呼吸道抽取物1.鼻咽抽取物发病早期2.气管抽取物发病各期方法：1.用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。2.将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲洗收集器1次；3.亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器。可用病毒保存液送检，也可直接将粘液送检！盛放容器：无菌、带垫圈的50ml螺口塑料管；标本的采集粪便标本：取1ml标本处理液，挑取黄豆粒大小的粪便加至管中，轻轻吹打3-5次，室温静置10分钟，8000rpm离心5分钟，取上清检测肛拭子：用消毒棉拭子轻轻插入肛门3-5

9、cm处，再轻轻旋转退出，放入含保 存液的管中，弃去尾部，旋紧管盖。血液标本：EDTA抗凝血清标本：急性期和恢复期双份血清19不合格标本未取到细胞，PCR扩增结果：内参阴性新型冠状病毒运送与保存标本的运送外包装所有标本应放在大小适合的带螺旋盖内有垫圈、耐冷冻的样本采集管里，拧紧管盖采样管标识清楚，条码信息包括：姓名、样本种类、样本编号、种类、姓名、采样日期等。运输前尽可能对容器外壁做好消毒送检：样本采集后尽快送实验室检测。标本的运输国内运输：标本采集后，按照A类感染性物质的包装，即三层包装：主容器（防水、密封、防泄漏，如装标本的试管等）、辅助容器（防水、耐95kPa的压力、无渗漏，如塑料罐等）和

10、外 包装（在辅助容器外的保护层，具有 足够的强度，如运输箱或一次性运输包装等）对标本进行包装后，由经过 生物安全培训并培训合格的至少两名 专业人员、配有生物危害物质溢出紧 急处理箱的专车运送。如需长途运输 的，标本需置干冰中运输。标本的运输国际运输新型冠状病毒毒株或样本在国际间运输的，应规范包装，按照出入境特殊物品卫生检疫管理规定办理相关手续，并满足相关国家和国际相关要求。标本的保存用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测；24小时内检测的标本可置于4保存；24小时内无法检测的标本则应置 于-70或以下保存（如无-70保存条件，则于-20冰箱暂存）。血清可在4存放3天，-20以下可长期保存。

11、应设立专库或专柜单独保存标本。标本运送期间应避免反复冻融。标本的保存毒株和样本管理新型冠状病毒毒株及其样本应由专人管理，准确记录毒株和样本的来源、种类、数量，编号登记，采取有效措施确保毒株和样本的安全，严防发生误用、恶意使用、被盗、被抢、丢失、泄露等事件。无保存资质的单位，完成检测后应在一周内将新冠阳性标本送交有保存资质 的单位或按规定开展复核检测的单位。如果无需上送，应在一周内销毁。新型冠状病毒监测期间，可设立有保存条件的各级疾控中心和有生物安全三级实验室的单位为临时保存单位。其他单位如因有科研项目或实验任务，需 要临时保存和使用新型冠状病毒生物样本，可向当地分管生物安全的行政部 门提出申请

12、。实验室生物安全要求根据目前掌握的新型冠状病毒的生物学特点、流行病学特征、临床资料等信息，该病原体暂按照病原微生物危害程度分类中第二类病原微生物进行管理第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。第一类病原微生物，能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及尚未 发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物，能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接 或者间接 在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三类病原微生物，能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并 且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病

13、原微生物，在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生 物人间传染的病原微生物名录2006年版病毒培养是指病毒的分离、培养、滴定、中和试验、活病毒及其蛋白纯化、病毒冻干以及产生活病毒的重组实验等操作。上述操作应 当在生物安全三级实验室的生物安全柜内进行。使用病毒培养物提 取核酸，裂解剂或灭活剂的加入必须在与病毒 培养等同级别的实验室和防护条件下进行，裂解剂或灭活剂加入后可比照未经培养的感 染性材料的防护等级进行操作。实验室开展相关活动前，应当报经国家卫生健康委批准，取得开展 相应活动的资质。新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南动物感染实验是指以活病毒感染动物、感染动物取样、感染性样本处理和检

14、测、感染动物特殊检查、感染动物排泄物处理等实验 操作，应当在生物安全三级实验室的生物安全柜内操作。实验室开展相关活动前，应当报经国家卫生健康委批准，取得开展相应活动的资质。动物感染实验新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南未经培养的感染性材料的操作是指未经培养的感染性材料在采用可靠的方法灭活前进行的病毒抗原检测、血清学检测、核酸提取、生化分析，以及临床样本的灭活等操作，应当在生物安全二级实 验室进行，同时采用生物安全三级实验室的个人防护。感染性材料或活病毒在采用可靠的方法灭活后进行的核酸检测、抗原检测、血清学检测、生化分析等操作应当在生物安全二级实 验室进行。分子克隆等不含致病性活病毒的其他

15、操作，可以在生 物安全一级实验室进行。未经培养的感染性材料的操作新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南在生物安全柜中操作时，怀疑被污染的手套，应在生物安全柜内脱除并扔在生物安全柜内的医疗垃圾袋中。生物安全柜中装医疗废弃物的垃圾袋用密封袋，转移到黄色医疗垃圾袋前，须在密封袋封口处内外喷75%医用酒精或有效氯500-1000 mg/L的含氯消毒剂。黄色医疗垃圾袋在移出生物安全柜前，在封口处和垃圾袋外面喷75%医用酒 精或有效氯500-1000 mg/L的含氯消毒剂。对操作中如产生的迸溅或泄漏，必须通过消毒达到对病原微生物的杀灭。实验室操作过程中产生的所有废弃物均须经12130 min压力蒸汽灭菌

16、，同时 设置高压效果指示物，高压灭菌后按普通废弃物处理。实验废弃物的处理标本的采集、运送及保存是病毒病原学诊断的基本环节。操作要细心，严防标本间交叉污染；做好个人防护。标本采集人员应熟练掌握采集方法。采集拭子标本时，注意采集力度，反复涂抹数次，须采集到含有人体细胞的标本。含“内标”的扩增试剂，可 以监控取材是否合格。下呼吸道病毒含量通常高于上呼吸道，核酸检测及病毒分离培养阳性率高含病毒保存液的采样管，采集标本后注意冷藏保存并及早低温运送，冷藏 保存宜不超过48小时，若超过最好放于-80冻存。如仅用于核酸检测的样本（不培养病毒），建议用含病毒裂解液的采样管 取材，可以常温运送。实验操作要遵照不同的实验室生物安全要求及管理规范。检测后样本的保存按照省相关管理制度执行。广州市妇女儿童医疗中心Thank you！谢 谢!