临床生物化学检验II 大题重点Word格式.docx

1、保证检测系统的完整性和有效性1、核实检测系统性能：如果实验室的检测系统具有溯源性，并已被许多实验室广泛应用，实验室只需核实该系统已被认可的性能。精密度和准确度。2、确认检测系统性能：如果实验室购置的检测系统在国内刚刚推出，但产品的分析性能已经由厂商进行了详细的评价，所有的分析性能资料已被生产厂商所在国的有关监督机构认可，且获得了生产许可证，实验室在使用该检测系统检测患者标本前应对该检测系统的基本性能进行评估。确认实验应做精密度、准确度和结果可报告范围。3、评价检测系统性能：一个新的检测系统或对原有检测系统的任何改变都必须对该系统的性能进行全面评估，内容有精密度、准确度、可报告范围、分析灵敏度、

2、分析特异性和参考区间。有关基质效应一、基质/基体（matrix）：反应溶液中或样品中除分析物以外的所有组分。二、基质效应：1、美国临床标准化委员会（NCCLS）文件中从两个角度定义：样品中除分析物以外的其它成份对分析物测定值的影响；基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。2、对于临床实验室：不同于新鲜标本的反应特性使测定结果产生的偏差三、基质偏差：基质效应所致分析结果的偏差。【评价】1、首先明确基质效应评价的前提： 通常认为新鲜（或冰冻）血清无基质效应； 决定性方法或参考方法无基质效应。2、选定制备物，如胆固醇定标物或质控物。3、按照一定程序，选择比较方法与被评价方法进行制备物胆固醇的基质效

3、应检测。4、通过检测，发现存在基质效应，则需进一步评估基质偏差的大小。评价过程：量值溯源 ：就是应用参考系统。即用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。实验室信息系统（LIS）：对实验室日常工作、科室管理、学科建设和实验室发展等方面所产生及所需求的信息，通过计算机收集、处理、存储、输送和应用的系统。LIS在实验室的应用，有助于提高实验室的整体管理水平，提高工作效率，减少漏洞，提高检验质量。【组成】1、临床检验信息：实验室日常工作所产生的信息，如检测结果、质控数据、工作记录等信息。2、实验室管理信息：实验室的各种文件、技术资料、行政管理、检验收费、后勤供应、仪器维修保养等与实验室

4、管理有关的信息。1、如何确定参考范围：标准： 参考个体（按预定标准选择的个体） 组成：参考人群（包括尽可能多的参考个体） 选出：参考组 测定：参考值 分析：分布特征（正态、偏态） 统计：参考值限度 指定：参考范围（参考值区间）2、应用参考凡事应注意哪些问题？正确选择受检对象具有代表性。合理规定参考人群的条件，如年龄、性别、民族，以及标本采集的时间和地区因素等。保证一定数量的受检人数，一般应有100例以上，若分布呈偏态时应在120例以上，特殊情况至少也应30例以上。测定方法标准化，保证结果的可靠性和可比性。根据专业知识确定单、双侧位界，严格按照统计要求进行测定结果的处理。诊断试验结果与常见评价指

5、标：联合试验：临床上常用的单项诊断试验都不够完善，灵敏度和特异度均不是很高，可联合使用两种或更多种的试验来提高诊断灵敏度或诊断特异度，即。1、平行试验可提高诊断灵敏度 ，但降低了特异度 ；2、系列试验可提高诊断特异度，但降低了灵敏度。ROC曲线：以灵敏度为纵坐标、（1特异度）为横坐标，将相对应的各临界值连接起来的折线图，称为受试者工作特征曲线（ROC曲线），简称受试者工作曲线。根据金标准诊断结果将诊断试验数据分段、设定各临界值、划分四格表，再计算各临界值下的真阳性率、假阳性率，最后绘制ROC曲线，计算曲线下面积（AUC）。【应用】ROC曲线的优点：ROC曲线将灵敏度与特异度以图示方法结合在一起

6、，可准确反映某分析方法二者的关系，是试验准确性的综合代表。方法简洁、直观，可用肉眼直接作出准确性判断。作用：选择合适的临界值：最靠近ROC曲线左上角的临界值时，其假阳性和假阴性的总数最少。比较两种或两种以上的诊断试验对同种疾病诊断的可靠性：ROC曲线下面积（AUC）越大，说明该诊断试验性能越好。ROC曲线的缺点：ROC曲线图上显示的不是真正的判断值，实际的分界值通常没有在图上表示出来。研究分析对象的数目没有在图上表示出来。当样品数减少，图形呈锯状和崎岖不平；即使样品数目大，也可能是崎岖不平。画图和计算均比较繁琐。酶含量的表示方法一、酶活性浓度的单位（一）酶活性单位1、惯用单位：酶活性测定方法的

7、建立者所规定的单位。由于单位定义不同，参考值差别很大，难以进行比较2、 IU：即国际单位，在特定的条件下，每分钟转化1mol底物的酶量为一个国际单位。（二） 酶活性浓度：单位体积样品中的酶活性单位， 习惯用U/L来表示体液中酶活性即酶活性浓度（三）正常上限升高倍数（ULN）：用测得的酶活性结果除以参考范围上限。二、酶蛋白质量浓度表示法：以mg/L或g/L来表示优点：灵敏度高：灵敏度达到ng/L至g/L的水平。特异性高：测定的影响因素较少，几乎不受体液中激活剂、抑制剂的影响，不受药物的干扰。可测定一些酶活性很难测定的酶。如不表达酶活性的酶原或脱辅基的酶蛋白或失活的酶蛋白。与酶活性测定一起，计算免

8、疫比活性，有可能为临床应用提供新的资料和信息。在同工酶测定中的应用：与电泳法和层析法相比，免疫学法测定简单快速灵敏度高，标本量少，重复性好。与化学抑制法相比特异性好。米氏方程：底物浓度S，最大反应速度（V或Vmax），米氏常数（Km）1、一级反应：当SKm时，反应速率与底物浓度S无关，VVmaxK E，称为零级反应，反应速率与酶浓度E成正比。酶学测定时一般底物浓度可选择为Km的1020倍。酶活性测定的方法：1、固定时间法：将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，经过一定时间后，用终止液终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间即可计算出底物消耗速度（dS/min

9、）或产物生成速度（dP/min），将速度换算为mol/ min便是以国际单位表示的酶活性。【评价/特点】即定时法：测定酶与底物作用反应一定时间后底物或产物变化的总量，计算酶促反应平均速度。比较简单，最后测定时因酶促反应已被终止，故所用仪器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。利用该法测定酶活性浓度，必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。2、连续监测法：将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，每隔一定时间（2s60s）连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信

10、号变化速率，求出酶活性浓度。【评价/特点】又称速率法或动力学法，指在酶促反应过程中用仪器监测某一反应产物或底物的浓度随时间的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，就能将反应物变化的多点测定结果连接成线，观察到整个反应过程，选择线性反应期来计算酶活性，结果准确可靠。要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分析仪都能达到这些要求。同工酶（isoezyme）：同一种属中由不同基因或等位基因编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化作用，但其分子构成、空间构像、理化性质、生物学性质以及器官分布或细胞内定位不同的一组酶。测定方法：1、平

11、衡法：标本中待测物的量有限，经过酶促反应逐渐被消耗，当剩余的底物量很小（1%5%）时，指示反应信号逐渐达到平衡，即通常所说的终点，所以又称为终点法。平衡法的特点是测定待测物的总变化量， 即测定的是“浓度”。2、速率法（rate assay）又称动力学法、连续监测法，测定的是速率（通常指的是初速度）。当底物的消耗量较小时（95%的物质如BaSO4，能隔离渗透扩散层中有色物质辅助试剂层：去除血清中的内源性干扰物，如固定维生素C氧化酶以消除血清中维生素C对H2O2的还原作用试剂层：即反应层，固定了该检测项目所需的试剂支持层：透明塑料基片，允许反射光完全透过，而样品浓度与反射光强度成反比试剂层和支持层

12、之间可加一吸水层加快样品和试剂的渗透速度。二、差示电位法：常用于无机离子K+、Na+、Cl-等的检测也是5层结构：离子选择敏感膜、参比层、氯化银层、银层和支持层电极：样品电极、参比电极测定方式：取一定量血清加到样品电极的加样槽中，再取等量参比液加入参比电极的加样槽中，通过电位计来测定这两个电极的差示电位 。1、理论K值：若某酶活性测定没有可用的校准品，则酶活性计算公式由酶活性的国际单位定义推算得出，理论K值=2、实测K值（实际K值）：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是的影响。在波长和温度等不同时有所不同。试剂说明书的可能与实际所用分析仪所测不同。因而有必要获得用户所用分

13、析仪的实际，再计算K值此为实测K值。3、校准K值：酶校准液在分析仪中测定后可自动计算得出校准K值，校准K值=（酶活性U/L）s /（A/min）s次波长【使用目的】：消除噪音干扰。噪音：从光源到比色杯、单色器、检测器整个光路均可产生，因双波长同时检测，两种波长检测产生的噪音基本上相同；减少杂散光影响；减少样品本身光吸收的干扰。如溶血、黄疸和脂浊等干扰可部分消除【常用方法】1、根据待测溶液对吸光谱的吸收曲线，选择最大吸收峰对应的波长为主波长 ，吸收曲线下端较为平坦的某一波长为次波长。2、选待测溶液最大吸收峰对应的波长为主波长 ，选等吸收点的对应的波长为次波长。3、选溶液最大吸收峰的波长为主波长

14、，选显色剂的最大吸收峰对应的波长为次波长。【设置原则】：使干扰物在主、次波长处有尽可能相同的光吸收值。被测物在主、次波长处的光吸收值有较大差异。次波长一般大于主波长100nm，主要考虑脂浊问题。免疫比浊法测定时次波长的选择，则是距离主波长越远越好，以得到较高的灵敏度1、弹性速率：酶活性测定中，当酶活性太高，在读数时间内已不呈线性反应。有些仪器具弹性速率功能，能选择读数时间前段仍呈线性的吸光度值计算结果，使酶活性测定的线性范围得以扩大。2、弹性速率法：具备了弹性速率法的仪器，可以提前并弹性地确定检测读数窗口期，检测出高酶活力的样品，使得可报告范围上限延伸，一般可延伸5倍左右。对于低酶活力或低浓度

15、分析物，可以延长检测的读数窗口时间，使结果具有更多的检测数据，增加最后检测结果的可靠性。【优点】：显著减少了重新检测的频率。避免了高酶活力样品的错误数据，得到准确的病人结果。减少了试剂的消耗，并缩短了发报告的时间，消除了稀释样品的重做引入的误差。自动生化分析仪性能评价一、准确度和精密度二、分析速度：主要由取样周期决定1、取样周期：从样品针采集前一个样品开始到采集下一个样品开始所需的时间取样周期决定了分析仪的工作速度；加试剂周期与取样周期相应2、反应盘圈数和取样针数三、实用性1、通道（channel）数量：与分析仪所能容纳的试剂瓶数有关2、反应杯数量：反应杯数量多，容许同时处于取样、反应检测和清

16、洗状态的反应杯数量便多，分析效率可提高3、一次能容纳的样品数量样品盘模式：即批处理样品量，分析仪对每批样品进行测定的前后均有一个启动过程和停止过程4、试剂瓶容量：检测频率高的项目等需总试剂量大5、总反应时间：目前主流分析仪的总反应时间为8.5 10min，个别15 22 min6、吸光度检测范围：对微弱光线的检测能力，即能检测吸光度的最高值及其准确度决定检测上限。检测灵敏度：能辨别待测物最小浓度差的能力7、检测成本：反应杯类型和寿命决定其耗费；最小取样量影响试剂用量；最小反应杯液量可决定样品和试剂用量8、通道开放程度：开放通道指用户可自由修改的测定分析程序，可使用户方便地选择试剂品牌。某些品牌

17、的分析仪开放通道数仅10个，目的是要求用户使用配套试剂，因此用户选用试剂明显受到限制9、检测原理：除可见紫外吸收光谱分析外，是否具有电化学、荧光等监测器，可决定该分析仪能开展检测项目的类型和数量10、软件功能：灵活性、方便性和数据存储能力等11、其他：用水量、消耗品、样品管要求、保养要求、急诊检验能力、复查功能等 。售后服务和维修固定时间法：在时间-吸光度曲线上选择的两个读数点，既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，其差值用于结果计算。固定时间法可解决某些化学反应的非特异性问题【项目】：1、苦味酸法测定肌酐反应最初30s，血清中快反应干扰物（如维生素C、丙酮酸、乙酰乙酸等）能与碱性苦味酸反应。在第二个30s，碱性苦味酸主要与肌酐反应，且此段时间吸光度曲线的线性较好（故也可用连续监测法测定肌酐）。在80s120s及其以后，碱性苦味酸可与蛋白质以及其它慢反应干扰物反应。故选用30s80s这段固定时间为测定时间2、溴甲酚绿法测定血清清蛋白溴甲酚绿（BCG）在pH4.20的环境中，在有非离子去垢剂（Brij-35）存在时，可与清蛋白（albumin，Alb）结合形成蓝绿色复合物，