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1、原儿茶醛的含量在 0.01%0.09%之间,平均回收率为 98.96%, RSD=1.66%。结论 本法简便、准确、重1复性好,可作为丹参药材的含量测定标准。【关键词】 丹参;丹酚酸 B;丹参素;原儿茶醛;高效液相色谱法Key words：Salvia miltiorrhiza Bge.;Salvianolic acid B;Danshensu;Protocatechuicaldehyde;HPLC丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎,味苦,性微寒,归心、肝经,具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的作用。用于月经不调,经闭通经,癥瘕积聚,胸腹刺痛,热

2、痹疼痛,疮疡肿痛,心绞痛等。丹参的主要药效成分之一是丹参中的水溶性成分,主要是酚酸类化合物丹酚酸 B、丹参素和原儿茶醛。我们采用 HPLC 法建立了这 3种成分的含量测定方法,可用于丹参及其饮片和制剂的研究及质量控制等。1 仪器与试药高效液相色谱仪：HP1100 高效液相色谱仪,G1315A DAD 检测器,G1311A 四元泵,G1313A 自动进样器,G1316A 柱温箱,G1322A 在线脱气机,Agilent ChemStation 色谱工作站。丹酚酸 B 对照品（批号 200201）、丹参素钠对照品（批号 855-200102）、原儿茶醛对照品（批号 0801-9402）均为供含量测

3、定用,购于中国药品生物制品检定所。乙腈：色谱纯,美国;甲醇：色谱纯,北京化工厂;高纯水：自制;其他试剂均为分析纯。丹参药材由2本所生药室提供。2 方法与结果2.1 丹酚酸 B 的含量测定2.1.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm 250 mm, 5 流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（3010159）;流速：1 mL/min;柱温：35 ;检测波长 s=286 nm;理论板数按丹酚酸 B 峰计算应不低于 4 000。在此条件下丹酚酸 B 与其他组分达到良好分离（见图 1）。2.1.2 供试品溶液的制备取本品粉末（过 3 号筛）0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 7

4、5%甲醇 50 mL,密塞,称定重量,加热回流 1 h,取出,放冷,再称定重量,用 75%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜（0.45 m）滤过,取续滤液,即得。32.1.3 对照品溶液的制备tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！关于治疗病毒性心肌炎中药有效成分单体筛选方法的研究雷蕾,崔蒙,尹爱宁,曹洪欣,刘丽红,奚怀平【关键词】 病毒性心肌炎;中药有效成分单体;筛选方法中药有效成分单体和中药新药研发有着密切的关系。自麻黄碱成功提取后,我国常用中药有效成分单体的研究成为中医药领域中的一个重要的研究方向,而后靛玉红、三氧4化二砷成功治疗白血病及青蒿素开发成抗疟疾药物等成功的实

5、例使中药有效成分单体的研究为世人瞩目。 目前,我国中药有效成分单体的研究主要有两步：一是化学成分的分离和提取,二是通过药效筛选,确定哪些化学成分为中药有效成分。在药效筛选方面,又分为传统筛选模式即利用体内外药理模型筛选模式和高通量筛选模式1。尽管化学成分提取方法和药效筛选方法已经有了很大发展,但由于中药本身的复杂性和科技研究手段的局限性,有效成分单体的发现速度一直十分缓慢。中医药是我国的瑰宝,如何充分利用已有的中医药文献资源、建立筛选中药有效成分单体研究新方法是本研究的主要内容。 病毒性心肌炎是病毒感染引起的常见心脏器质性疾病,目前仍没有治疗的特效药物。笔者以治疗病毒性心肌炎的中医药临床文献为

6、基础,结合现代药理实验资料,研究筛选中药有效成分单体的新方法,并且得到了一些有意义的结果。1 资料与方法1.1 从中医治疗病毒性心肌炎药物确定中药有效成分单体的药理作用中医认为,病毒性心肌炎主要分以下 4 个证型：急性热盛型、心阴虚损型、气阴两虚型、阴阳两虚型。结合现代药理学分析,中医治疗病毒性心肌炎药物的药理作用可以概括为保护心肌作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用等2-4。1.2 中药有效成分单体的筛选方法5中医药治疗病毒性心肌炎疗效显著,而化学成分是中药治病的物质基础,所以,临床使用的中药包含的化学成分 A 就可以作为中药有效成分单体筛选中的第一个集合,见图 1

7、。如前所述,中医在治疗病毒性心肌炎时使用的药物基本有保护心肌作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用等药理作用。那么,具有以上药理作用的中药化学成分就具有治疗病毒性心肌炎的潜力,所以,这类化学成分可以作为中药有效成分单体筛选的第二个集合,即化学成分 B。两个集合取交集可以筛选出中药有效成分单体。既有临床实践,又有现代药理实验数据的支持,因此筛选出的中药有效成分单体对于中药新药研发更具有开发潜力。1.3 资料来源与疾病以及方剂相关的临床文献数据来自中医临床诊疗文献数据库,与中药相关的数据来自中国中药数据库,从现代药理实验出发寻找具有保护心肌作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作

8、用、抗病毒作用、免疫调节作用的数据主要来源于中药药理数据库和中药化学数据库。1.4 数据的清理和拆分由于数据都来自于专题数据库,虽然其内容专一、相对完整、有效实用,但是,专题数据6库中的数据都是使用自然语言来描述的,不能直接用于分析统计以及数据库之间关联关系的建立,所以,数据必须进行清理和拆分,使之规范化。实验方法是使用文本挖掘技术,即中国中医科学院中医药信息研究所研制的 词雀 软件,利用特定的程序抽取化学成分名称,对所需要的数据进行清洗和整理。例如,龙胆根含裂环烯醚萜苷类苦味成分：龙胆苦苷（gentiopicroside）,当药苦苷（swertiamarin）,当药苷（sweroside）

9、整理完毕后的数据见表1,可以用于统计分析。整个实验是使用 Access 和 Excel 完成的。表 1 使用词雀软件处理后的数据（略）2 结果与讨论2.1 从临床文献筛选的化学成分 A以 心肌炎 、 病毒性 为主题词,在中医临床诊疗文献数据库中检索到 1 645 篇文献,涉及 782 首方剂,共包含 260 味中药,6 111 个化学成分。2.2 从现代药理实验数据筛选的化学成分 B从中药药理数据库和中药化学数据库中筛选具有保护心肌作用、抗心肌缺血作用、抗心律失常作用、抗病毒作用、免疫调节作用类化学成分共 1 163 个。这些化学成分的特点都是经过现代药理实验研究,具有治疗病毒性心肌炎的潜力,

10、但是都没有经过临床实7践的检验。2.3 中药有效成分单体的筛选取丹酚酸 B 对照品适量,加 75%甲醇溶解并制成每 1 mL 含 0.14 mg 的溶液,即得。2.1.4 标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液（0.14 mg/mL） 4、8、12、16、20 L,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹酚酸 B 的进样量为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程：Y=-0.153 6+895.6X,r=0.999 6,结果表明,丹酚酸 B 在 0.562.8 g 范围内呈线性关系。2.1.5 精密度试验8取供试品溶液 1 份,在上述色谱条件下连续进样 5 次,每次进样 5 L

11、,测定丹酚酸 B 含量,经计算,RSD=0.28%。2.1.6 重复性试验平行制备 5 份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样 5 L,测定丹酚酸 B 含量,经计算, RSD=2.24%。2.1.7 稳定性试验取供试品溶液 1 份,上述色谱条件下,分别于样品制备后第 0、1、2、4、8、16、24 h进行测定,测定丹酚酸 B 含量,经计算,RSD=1.76%。2.1.8 加样回收率试验取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹酚酸 B 对照品,按上述色谱条件测定,计算回收率,丹酚酸 B 为 99.64%,RSD=1.09%。见表 1。表 1 丹酚酸 B 回收率试验结果9（略）2.1.

12、9 含量测定按供试品溶液制备方法,分别对 10 个不同来源丹参药材丹酚酸 B 的含量进行测定。结果见表 2。表 2 不同产地丹参药材丹酚酸 B 的含量测定结果（略）2.2 丹参素和原儿茶醛的含量测定2.2.1 色谱条件Kromasil C18（4.6 mm 250 mm,5 流动相：检测波长 s=280 nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于 4000。在此条件下,丹参素、原儿茶醛与其他组分达到良好分离（见图 2）。2.2.2 供试品溶液的制备取丹参药材粉末（过 3 号筛）约 0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水 25 mL,密10塞,称定重量,超声提取 1 h,取出,再加热回流 4

13、 h,取出,密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液,即得。2.2.3 对照品溶液的制备精密称取丹参素钠、原儿茶醛对照品适量,分别加甲醇溶解,并制成每 1 mL 分别含丹参素钠 0.08 mg（相当于丹参素 0.07 mg）、原儿茶醛 0.012 mg 的溶液,即得。2.2.4 标准曲线的绘制分别精密吸取丹参素钠对照品溶液（0.08 mg/mL）和原儿茶醛对照品溶液（0.012 mg/mL）各 3、6、9、12、15 L,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹参素钠和原儿茶醛的进样量（ g）为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线并计算回归方程。丹参素钠 Y=-7.14

14、7 2+406.353X,r=0.999 1;原儿茶醛 Y=-0.772 7+ 4 943.475X,r=0.999 2。结果表明,丹参素钠在 0.241.2 g 范围内呈线性关系;原儿茶醛在 0.0360.18 g 范围内呈线性关系。2.2.5 精密度试验11取供试品溶液 1 份,在上述色谱条件下连续进样 5 次,每次进样 5 L,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的 RSD=1.26%,原儿茶醛的 RSD=0.86%,二者之和的RSD=1.13% 。2.2.6 重复性试验平行制备 5 份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样 5 L,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的

15、 RSD=2.60%,原儿茶醛的 RSD=0.66%,二者之和的RSD=2.20% 。2.2.7 稳定性试验取供试品溶液 1 份,在上述色谱条件下,分别于样品制备后 0、1、2、4、8、16、24 h进行测定,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的 RSD=0.58%,原儿茶醛的RSD=1.47%,二者之和的 RSD=0.58%。122.2.8 加样回收率试验取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹参素钠、原儿茶醛对照品,按上述色谱条件测定,二者回收率分别为 98.94%和 98.96%,RSD 分别为 1.49%和 1.66%（见表 3、表4）。表 3 丹参素钠回收率试验结果（略）表 4 原儿茶醛回收率试验结果（略）2.2.9 含量测定按供试品溶液制备方法,分别对 10 个不同来源丹参药材中的丹参素、原儿茶醛的含量进行测定。结果见表 5。表 5 不同来源丹参药材中丹参素、原儿茶醛的含量测定结果3 讨论在丹酚酸 B 含量测定中,曾经试用过甲醇-乙腈-甲酸-水不同配比的流动相,结果正文采用的流动相配比分离效果最好,所以最终选择其作为流动相。试验过程中曾对供试品的提取溶媒、溶媒用量、提取方法、提取时间等因素进行了考察,结果表明,正文所列的供试品溶液制备方法为各因素最佳组合。13医药卫生栏目14