1、无水氯化钙0.2g,K2HPO41.0g,KH2PO41.0g,MgSO4 。7H2O 0.48g,NaCO3 10g,NaCL 2g,蒸馏水1000mL,溶解后备用。7豆芽汁液体培养基豆芽汁10mL,磷酸氢二铵1g,KCL 0.2g,MgSO4.7H2O 0.2g,琼脂20g。将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH至6.26.4,分装于三角瓶中,0.04%的溴甲酚紫酒精溶液(黄色5.26.8紫色)作为指示剂,115灭菌20min。豆芽汁制备:将黄豆芽或绿豆芽200g洗净,在1000mL中煮沸30 min,纱布过滤得豆芽汁、补足水分至1000mL。8麦芽汁琼脂培养基优质大麦或小麦,蒸
2、馏水,碘液。取优质大麦或小麦若干,浸泡612h,置于深约2cm的木盘上摊平,上盖纱布,每日早、中、晚各淋水一次,麦根伸长至麦粒两倍时,停止发芽晾干或烘干。称取300g麦芽磨碎,加1000mL水,38保温2h,再升温至45,30min,再提高到50,30min,再升至60,糖化11.5h。取糖化液少许,加碘液12滴,如不为蓝色,说明糖化完毕,用文火煮半小时,四层纱布过滤。如滤液不清,可用一个鸡蛋清加水约20mL调匀,打至起沫,倒入糖化液中搅拌煮沸再过滤,即可得澄清麦芽汁。用波美计检测糖化液浓度,加水稀释至10倍,调pH56,用于酵母菌培养;稀释至56倍,调pH7.2,可用于培养细菌,121灭菌2
3、0min。9查(察)氏培养基NaNO3 2g,K2HPO4 1g,MgSO4. 7H2O 0.5g,KCL 0.5g,FeSO4.7H2O 0.01g,蔗糖30g,琼脂1520g,蒸馏水1000mL,pH值自然。加热溶解,分装后121灭菌20min。10马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)马铃薯(去皮)200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂20g,水1000mL。pH值自然。将马铃薯去皮、洗净、切成小块,称取200g加入1000mL蒸馏水,煮沸20min,用纱布过滤,滤液补足水至1000mL,再加入糖和琼脂,溶化后分装,121灭菌20min。另外,用少量乙醇溶解0.1g氯霉素,加入1000mL培养
4、基中,分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。11PY基础培养基蛋白胨0.5g,酵母提取物1.0g,胰酶解酪胨 (Trypticase) 0.5g,盐溶液 4.0mL,蒸馏水1000mL。盐溶液成分:CaCL2 0.2g,MgSO4.7H2O 0.48g,K2HPO4 1.0g,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCL 2.0g,蒸馏水1000mL。12甘露醇琼脂培养基(MSA)牛肉浸膏1g,月示胨NO.3(Difco)10g,D-甘露醇10g,NaCL 75g,琼脂约13g,酚红0.025g,水1000mL,pH7.27.6按量将各成分(酚红除外)混合,加热使完全溶解
5、,调pH至7.40.2。加1%的酚红溶液2.5mL,混匀。121高压灭菌15min13高氏一号(淀粉琼脂)培养基(主用于放线菌、霉菌培养)可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCL 0.5g,K2HPO40.5g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4.7H2O 0.01g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.27.4,121灭菌20min。14淀粉铵盐培养基 (主要用于霉菌、放线菌培养)可溶性淀粉10g,(NH4)2SO4 2g,K2HPO4 lg,MgSO4.H2O lg,NaCL 1g,CaCO3 3g,蒸馏水1000mL,pH7.27.4,121灭菌20min。若加入1520g
6、琼脂即成固体培养基。15麦氏培养基(醋酸钠琼脂培养基)葡萄糖1.0g,KCL 1.8g,酵母汁2.5g,醋酸钠8.2g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,pH自然,0.7kg/cm2灭菌30min。16高盐察氏培养基(用于霉菌和酵母菌计数、分离用)硝酸钠2g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁(MgSO4 7H2O)0.5g,氯化钾 0.5g,硫酸亚铁0.01g,氯化钠60g,蔗糖30g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,115灭菌30min。注:分离食品和饮料中的霉菌和酵母可选用马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基和/或孟加拉红培养基。分离粮食中的霉菌可用高盐察氏培养基。17糖、醇类发酵基础培养基(1)一般细菌常以休
7、和利夫森二氏培养基蛋白胨5g,NaCL 5g,K2HPO4 0.2g,糖醇(葡萄糖或其它糖、醇)10g,琼脂56g,1溴甲酚紫(溴百里香草酚蓝)3mL,蒸馏水1000mL,pH7.07.2,分装试管,培养基高度约4.5cm,115灭菌20min。(2)芽孢菌培养基(NH4)2HPO4 1.0g,KCL 0.2g,MgSO4.7H2O 0.2g,酵母膏0.2g,琼脂56g,糖或醇类10.0g,蒸馏水1000mL,溴甲酚紫(0.04)15mL,pH7.07.2,分装试管,培养基高度约45cm,112灭菌30min。(3)乳酸菌培养基蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵母膏5g,吐温80(Tween 80)0
8、.5mL,糖或醇10g,琼脂56 g,蒸馏水(自来水)1000mL,加入1.6溴甲酚紫溶液约1.4mL。以上调pH6.87.0,分装试管,112灭菌30min。18硝酸盐培养基(硝酸盐还原试验用)蛋白胨5.0g,KNO30.2g, 蒸馏水1000 mL,pH7.4,每管分装45mL,121灭菌1520min。吲哚实验培养基:1胰蛋白胨,调pH7.27.6,分装1/31/4试管,115灭菌30min。19硫化氢试验(纸条法)培养基蛋白胨10g,NaCL 5g,牛肉膏10g,半胱氨酸0.5g,蒸馏水1000mL,pH7.07.4,分装试管,每管液层高度45cm,112灭菌2030min。另外将普通
9、滤纸剪成0.51cm宽的纸条,长度根据试管与培养基高度而定。用510的醋酸铅将纸条浸透,然后用烘箱烘干,放于培养皿中灭菌备用。20尿素培养基(尿酶试验)蛋白胨1.0g,葡萄糖1.0g,NaCL 5.0g,KH2PO4 2.0 g,0.4酚红3.0mL,琼脂20.0g,20尿素100.0mL,pH7.17.4。将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH值,加入琼脂,加热熔化并分装于三角瓶,121灭菌15min,冷却至5055,加入过滤除菌的尿素溶液,分装于灭菌试管内,摆成琼脂斜面备用。21氮源利用基础培养基KH2PO4 1.36g,NaH2PO4 2.13g,MgSO47H2O 0.2g,FeSO
10、4.7H2O 0.2g,CaCL2 0.5g,葡萄糖10.0g,蒸馏水1000mL。将需要测定的氨基酸、氨态氮(如磷酸氢二氨)、硝态氮(如硝酸钾)加入到上述基础培养基中,使其终浓度为0.050.1,如测定菌不能利用葡萄糖为碳源,可用其它碳源代替(终浓度为0.20.5),另做一份不加氮源的空白对照,调pH7.07.2,分装于试管,每管45mL,112灭菌2030min,制备出的培养基要求无沉淀。22甲基红培养基(M.R及V-P试验用)蛋白胨7.0g,葡萄糖5.0g,K2HPO4(或NaCL)5g,水1000mL,pH7.07.2,每管分装45mL,115灭菌30min。23动力、靛基质、尿素(M
11、IU)综合培养基 (用于检验细菌运动性、吲哚、尿素酶用)蛋白胨(含色氨酸)30 g,KH2PO4 2g、NaCL 5g、琼脂3 g、0.2%酚红酒精溶液2mL、尿素20g、蒸馏水1000mL。分装于小试管,112灭菌15min,灭菌后液体应呈淡黄色。24半固体培养基(用于细菌的动力试验)牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,琼脂35g,蒸馏水1000mL,pH7.27.4,熔化后分装试管(8mL)121灭菌15min,取出直立试管待凝固。25M17琼脂培养基(分离、培养乳球菌等的选择培养基)植物蛋白胨5g,酵母粉5g,聚蛋白胨5g,抗坏血酸0.5g,牛肉膏2.5g,MgSO47H2O 0.01g,
12、ß-甘油磷酸二钠19g,蒸馏水1000mL,121灭菌15min。26蛋白胨水溶液(靛基质试验用)蛋白胨20.0g,NaCL 5.0g,蒸馏水1000mL,pH7.4,121灭菌15min。27精氨酸双水解酶实验培养基蛋白胨1g,氯化钠5g,K2HPO40.3g,L-精氨酸10g,琼脂10g,酚红0.01g,蒸馏水1000mL。除酚红外,将以上各成分溶解,调节pH7.07.2,加入指示剂,分装试管,培养基高约45cm,121灭菌20min备用。28葡萄糖氧化发酵培养基蛋白胨2g,氯化钠5g,1溴百里酚蓝水溶液3mL,琼脂56g,K2HPO40.2g,葡萄糖1,蒸馏水1000mL。除
13、溴百里酚蓝外,溶解以上各成分,调节pH值为6.87.0,分装试管,用115灭菌20min备用。29假单胞菌选择培养基(PSA)基础成分:多价胨16g,水解酪蛋白10g,硫酸钾10g,氯化镁1.4g,琼脂11g,甘油10mL,蒸馏水1000mL,pH7.1CFC选择添加物:溴化十六烷基三甲胺10mg/L,梭链孢酸钠10mg/L,头孢菌素50mg/L。先将基础成分加热煮沸使之完全溶解,121,15min条件下灭菌。冷却到50备用。当基础培养基冷却到50后加入溶解后过滤除菌的CFC补充物,完全混合后倒平板备用。30乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨20g,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖10g,0.04%溴甲
14、酚紫水溶液25mL,蒸馏水1000mL,pH7.4。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115,15min高压灭菌.双料乳糖胆盐培养基除蒸馏水外,其他成分加倍。31伊红美兰琼脂培养基蛋白胨20g,乳糖10g,磷酸氢二钾2g,琼脂17g,2%伊红Y溶液20mL,0.65%美兰溶液10mL,蒸馏水1000mL,pH7.1。将蛋白胨、磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,高压灭菌121,15min备用。临用时,加入乳糖,并加热溶化琼脂,冷至5055,加入伊红和美兰溶液,摇匀,倾注平板。32乳糖发酵培养基蛋白胨20g,乳糖10g,0
15、.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸馏水1000mL,pH7.4。将蛋白胨、乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL、10mL或3mL,并放入一个小倒管,115,15min高压灭菌。33胰酪胨大豆肉汤胰酪胨(或胰蛋白胨)17g,植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g,氯化钠100g,磷酸氢二钾2.5g,葡萄糖2.5g,蒸馏水1000mL。将上述成分混合,加热并轻轻搅拌溶液,分装后12115min高压灭菌。最终pH7.3347.5%氯化钠肉汤蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠75g,蒸馏水1000mL,pH7.4。将上述成分加热溶解,校正pH,分装试管,12115min高压灭菌。35豆粉琼
16、脂牛心消化汤1000mL,琼脂20g,黄豆粉浸液50mL,pH 7.47.6。将琼脂加在牛心消化汤中,加热溶解,过滤。加入黄豆粉浸液,分装每瓶100mL,12115min高压灭菌。36血琼脂平板豆粉琼脂100mL,脱纤维羊血(或兔血)510mL。加热融化琼脂,冷至50,以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血,摇匀,倾注平板。或分装灭菌试管,摆成斜面。37aird-Parker氏琼脂平板胰蛋白胨10g,牛肉膏5g,酵母膏1g,丙酮酸钠10g,甘氨酸12g,氯化锂(LiCL6H2O)5g,琼脂20g,蒸馏水950mL,pH7.5。增菌剂的配法:3050%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL
17、混合,保存在冰箱内。将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解。冷至25,矫正pH。分装每瓶95mL,121高压灭菌15min。临用时,加热融化琼脂,冷至50,每95mL加入预热至50的卵黄-亚碲酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。38肉浸液绞碎牛肉500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,蒸馏水1000mL,pH 7.47.6。将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g,混合后放冰箱24h,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后矫正pH7.47.6
18、煮沸并过滤,分装烧瓶,121,30min高压灭菌。39兔血浆柠檬酸钠0.106 mol/L(31.3g Na3C6H5O72H2O溶于1L蒸馏水中)一份加兔血9份混合后离心2000rpm,10min吸取上清液即为兔血浆。40肠毒素产毒培养基蛋白胨20g,胰消化酪蛋白200mg,氯化钠5g,磷酸二氢钾1g,氯化钙0.1g,硫酸镁0.2g,菸酸0.01g,蒸馏水1000mL,琼脂1012g(固体透析培养用),pH7.27.4。41葡萄糖肉浸液肉汤绞碎牛肉500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,葡萄糖10g,蒸馏水1000mL,pH7.47.6。加入蛋白胨、葡萄,氯化钠和磷酸盐,溶解后校
19、正pH,煮沸并过滤、分装,12130min高压灭菌。42牛心浸液绞碎牛心500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,蒸馏水1000mL,pH7.47.6。将绞碎牛心500g,混合后放冰箱24h,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH,煮沸并过滤、分装,121,30min高压灭菌。43匹克氏肉汤 含1%胰蛋白胨的牛心浸液200mL,1:25000结晶紫盐水溶液10mL,1:800三氮化钠溶液10mL,脱纤维兔血(羊血)10mL。将上述已灭菌的各种成分,无菌依次混合,分装于无菌试管内,每管
20、2mL,保存冰箱内备用。44胰蛋白胨大豆胨琼脂(TSA)胰蛋白胨15g,大豆胨5g,氯化钠5g,琼脂约13g,蒸馏水1000mL,pH7.17.5。按量将各成分溶解,加热使完全溶解,调pH值,121,15min灭菌。45缓冲蛋白胨水(BP)培养基蛋白胨l0g,NaCL5g,Na2HPO4.12H20 9g,H2PO4 1.5g,蒸馏水1000mL,pH7.2。121灭菌15min,沙门氏菌前增菌使用。46氯化镁孔雀绿(MM)增菌液甲液:胰蛋白胨5g,NaCL 8g,KH2P04 1.6g,蒸馏水1000m1乙液:MgCL2 40g,蒸馏水100mL丙液:0.4孔雀绿水溶液分别按上述成分配好后,
21、121灭菌15min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL以无菌操作混合即成。47四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液多胨或胨1g,CaCO3 10g,Na2S203 30g,蒸馏水1000m1。将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100m1。分装时应随时振荡,使其中的CaCO3混匀。121灭菌15min备用。临用时每100m1培养基中加入碘溶液2m1、0.1煌绿1m1。 48亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液蛋白胨5g,乳糖4g,亚硒酸氢钠4g,Na2HPO4 5.5g,KH2PO4 4.5g,L胱氨酸0.01g,蒸馏水1000m1,pH7.0。将除亚硒酸氢钠和胱氨酸以外的各种成分溶
22、解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,冷却备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,冷却,以无菌操作与上液混合。再加入1L-胱氨酸氢氧化钠溶液1m1。分装于灭菌瓶中,每瓶l00mL。49亚硫酸铋琼脂(BS)培养基蛋白胨10g,牛肉膏5g,葡萄糖5g,FeSO40.3g,Na2HPO4 4g,煌绿0.025g,柠檬酸铋铵2g,Na2SO46g,琼脂20g, 蒸馏水1000mL,pH7.5。将前5种成分溶解于300mL蒸馏水中,再将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50m1蒸馏水溶解。将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80左右。将以上三液合并,补充蒸馏水至1000m1,校正pH,加0.5煌绿
23、水溶液5mL ;摇匀。冷却至5055,倾注平板。此培养基不需高压灭菌。制备过程中不宜过分加热,以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。50DHL琼脂培养基成份:蛋白胨20g,牛肉膏3g,乳糖10g,蔗糖10g,去氧胆酸钠1g,Na2S2032.3g,柠檬酸钠1g,柠檬酸铁铵1g,中性红0.03g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.3。除中性红和琼脂外,将其他成分溶解于400m1蒸馏水中,校正pH值。再将琼脂溶于600mL蒸馏水中,两液合并,加0.5中性红水溶液6mL,待冷至5055,倾注平板。51HE琼脂培养基月示 胨12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖
24、g,水杨素2g,胆盐20g,NaCL 5g,琼脂20g,蒸馏水1000m1,0.4溴麝香草酚蓝溶液16mL,Andrade指示剂20mL,甲液20mL,乙液20m1。将前七种成分溶解于400mL蒸馏水中。作为基础液,加入甲液和乙液,校正pH值为7.5,再加入指示剂;将琼脂溶于600m1蒸馏水中。二者合并,待冷至5055,倾注平板。此培养基不可高压灭菌;Andrade指示剂:酸性复红0.5g,1M NaOH溶液16m1,蒸馏水100mL。制法为:将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如果复红退色不全,再加氢氧化钠溶液12mL。甲液:Na2S203 34g,柠檬酸铁铵4g,蒸馏水100m
25、1。乙液:去氧胆酸钠10g,蒸馏水100mL。52S.S.琼脂(1)基础培养基牛肉膏5g,月示 胨5g,三号胆盐3.5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL。将牛肉膏、月示 胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中,将琼脂溶于500m1蒸馏水中,二液混合,121灭菌15min备用。(2)完全培养基础培养基1000mL,乳糖10g,柠檬酸钠8.5g,Na2S2038.5g,10柠檬酸铁溶液10m1,1中性红溶液2.5m1,0.1煌绿溶液0.33m1。加热熔化基础培养基,按比例加入上述染料以外的各成分,充分混合均匀,校正pH值为7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于4
26、8h内使用;煌绿溶液配好后应在10d以内使用。53靛基质试验培养基蛋白胨10g,氯化钠5g,水1000mL,pH7.37.5。称取各成分,加入水中加热溶化。用1mol/L NaOH调至pH 7.47.5。分装小试管,每管约3mL,116,15min高压灭菌后410保存备用。54三糖铁琼脂(TSI)蛋白胨20g,硫代硫酸钠0.2g,乳糖10g,蒸馏水1000mL,硫酸亚铁铵0.2g,蔗糖10g,酚红0.025g,氯化钠5g,牛肉膏5g,琼脂12g,葡萄糖1g,pH7.4。将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121高压灭菌15min后放置高层斜面备用。55尿素琼脂蛋白胨1g,葡萄糖1g,0.
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