第十八章基因诊断与基因治疗Word文档下载推荐.docx

1、A基因缺失 B基因置换 C基因矫正9基因组结构突变发生在生殖细胞可能引起 A传染病 B肿瘤 C心血管疾病D高血压 E遗传病10利用反义核酸阻断变异基因表达的基因治疗方法是 A基因矫正 B基因失活 C自杀基因的应用D基因增补 E基因置换 11最确切的基因诊断方法是 A基因测序 B核酸分子杂交 CRFLP分析 D斑点杂交法 EPCR/ASO法12以下哪种检测技术不属于DNA诊断 ARFLP分析 BPCR CASO杂交D限制性内切酶酶谱分析 ENorthern杂交13目前在基因治疗的临床操作中选用最多的基因载体是 A腺病毒相关病毒 BPBR322 C噬菌体 D逆转录病毒载体 E脂质体14目前基因治疗

2、所采用的方法中，最常用的是 A基因失活 B基因增补 C基因矫正 D“自杀基因”应用技术 E基因置换15利用外源基因表达一种特异性酶，催化药物前体转化为细胞毒性物质而导致细胞死亡的基因治疗方法是 （ ）A基因矫正 B基因灭活 C自杀基因的应用D基因置换 E基因增补16将外源治疗性基因导入动物细胞的方法不包括 ADEAE-葡聚糖法 B显微注射法 C电穿孔法DCaCl2沉淀法 E病毒介导的基因转移17. 下列方法中哪一种方法不是基因诊断的常用技术或方法 A基因测序 B核酸分子杂交 CPCRDRFLP分析 E细胞培养18非病毒介导基因转移的化学方法是哪一种？ A显微注射 B电穿孔 C基因枪技术DDEA

3、E一葡聚糖法 EDNA直接注射法191990年采用基因治疗疾病并获得成功的一例是 A糖尿病 B重症联合免疫缺陷综合症C高胆固醇血症 D地中海贫血 E血友病20下列哪种方法不属于非病毒介导基因转移的物理方法？ADNA直接注射法 B电穿孔 C显微注射 D脂质体介导 E基因枪技术21基因诊断的技术特点不正确的是 A诊断灵敏度高 B属于病因诊断，针对性强C有很高的特异性 D技术单一，对操作人员要求低E适用性强，诊断范围广二、多项选择题1基因诊断可用于 A遗传病 B亲子鉴定 C恶性肿瘤D器官移植 E感染性疾病2以核酸分子杂交为基础的基因诊断方法有 （ ）A基因序列测定 B限制性核酸内切酶酶谱分析法C基因

4、剔除 D等位基因特异寡核苷酸探针杂交法EDNA限制性片段长度多态性分析法3在基因治疗中，将外源基因导入动物细胞的物理方法有 A基因枪技术 B电穿孔 C氯化钙沉淀法D显微注射 EDNA直接注射法4基因诊断中常用的分子生物学技术有 A基因测序 B细胞培养 C核酸分子杂交DDNA芯片技术 EPCR5基因治疗中最常使用的病毒载体有 A肝炎病毒 BHIV C逆转录病毒D腺相关病毒 E腺病毒6目前在基因治疗中常选用的基因载体是 A逆转录病毒 B质粒 C腺病毒相关病毒DHIV E腺病毒 7基因治疗可用于 A恶性肿瘤 B遗传病 CAIDSD心血管疾病 E免疫缺陷8基因治疗能够采用的方法有 A应用自杀基因 B基

5、因矫正 C基因失活9内源基因的结构突变包括 A基因重排 B转导 C点突变D基因表达异常 E基因扩增三、填空题 1基因突变可导致 的改变，从而引起 。2外源性基因变异是指 疾病。3膜上印迹杂交方法包括 、 和 等类型。4Southern blotting方法于1975年由 首创，该法可用于检测 。5Nouthern blotting 方法于1977年由 建立，该法可用于检测 。6PCR技术的工作原理是模拟体内 过程；其改进之处是用 取代DNA聚合酶，用合成的 代替RNA引物。7PCR过程中，每循环一次包括 、 和 三大步。8PCR循环过程中，变性是指 ；退火是指 ；延伸是指 。9RT-PCR是指

6、 ；其可以归纳为三个阶段： 、 和 。10PCR技术应用十分广泛，如 、 、 和 等。11基因诊断可用于 、 、 和 等。12基因变异致病的主要类型是 和 。13目前基因治疗的主要策略有 、 、 和 等。14基因诊断常用技术方法有 、 、 和 。15内源基因的变异可分为 和 。16基因诊断中最常用诊断技术是 和 。17基因转移方法概括地讲有 、 和 等。18目前用作基因转移载体的病毒有逆转录病毒 和 。19目前基因治疗中导入基因的方式有 和 。20对已知基因突变位点的检测需人工合成两种寡核苷酸探针，一种是与 互补的寡核苷酸，另一种是与 互补的寡核苷酸。四、名词解释1基因失活 2RNAi 3基因

7、矫正 4Southern blotting5基因诊断 6反义RNA 7基因治疗 8生物芯片9自杀基因 10免疫基因治疗 11基因增补 12核酸分子杂交13基因置换 14Northern blotting 15探针 16PCR技术17. 中性突变 18。限制性片段长度多态性五、问答题 1简述核酸分子杂交的基本原理。2基因治疗要符合哪些要求？3当前基因治疗拟采用哪些方法？4简述基因诊断的特点。5试述内源基因结构突变的主要类型以及内源基因结构突变所致的疾病。6简述基因诊断的临床应用概况。7目前基因诊断可应用于哪些疾病？8简述基因治疗的基本过程。9简述核酸分子杂交（固相）操作的主要步骤。10简述PCR

8、技术原理和基本过程。11何谓Southern blotting？ 其主要有哪些用途。12何谓Nouthern blotting？其主要有哪些用途。参 考 答 案1.E 2.C 3.E 4.E 5.C 6.E 7.B 8.A 9.E 10.B11.A 12.E 13.D 14.B 15.C 16.D 17.D 18.D 19.B 20.D21D1A、B、C、E 2B、D、E 3A、B、D、E 4A、C、D、E5C、D、E 6A、C、E 7A、B、C、D、E 8A、B、C、D、E9A、C、E四、填空题 1相应表型；疾病。2病原体感染性3Southern blotting Nouthern blot

9、ting 斑点杂交4Edwin Southern 基因组DNA特异碱基序列5Alwine 总RNA或mRNA6. DNA复制 TaqDNA聚合酶 DNA引物7变性 退火 延伸8DNA双链解开为单链 模板链与引物的结合 引物的延伸9逆转录PCR 提取RNA RT PCR10. DNA的微量分析 克隆目的基因 病原体检查 肿瘤诊断11遗传病的基因诊断 恶性肿瘤的基因诊断 感染性疾病的基因诊断 法医鉴定 12内源基因突变 外源基因的入侵 13基因矫正 基因置换 基因增补 基因失活14核酸杂交 PCR 基因芯片 基因测序 15基因结构突变 表达异常 16核酸分子杂交 PCR17化学法 物理法 生物（病

10、毒）法18物理方法 化学方法 19间接体内疗法 直接体内疗法 20突变基因碱基序列 正常基因碱基序列 五、名词解释1是将特定的反义核酸（反义RNA、反义DNA和核酶）导入细胞，在转录和翻译水平阻遏某些基因的异常表达，从而达到治疗目的。2RNAi是指在特定因子作用下，由导入胞内的双链RNA降解成的约22nt左右的SiRNA，后者利用碱基配对原则与特异基因表达的mRNA结合，并促使其降解，从而在转录后水平调控基因的表达。3是指将致病基因中的异常碱基进行纠正，而正常部分予以保留的基因治疗技术。4DNA分子经限制性内切酶酶切和凝胶电泳后，可按分子量大小分离，再进行变性处理后，将单链DNA从凝胶中吸附转

11、移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后在该滤膜上与标记探针进行杂交反应，称为Southern印迹杂交法。5是利用分子生物学技术，直接检测体内DNA或RNA的结构及其表达是否异常，从而对疾病做出诊断，为治疗提供依据。6反义RNA即是与其mRNA碱基序列互补的RNA。7是运用基因工程技术更换、校正或增补靶细胞内有缺陷的基因，以达到治疗疾病的目的。8基因芯片又叫DNA芯片、cDNA芯片、寡核苷酸阵列。其主要是利用固相支持物上数以万计的已知碱基序列的寡核苷酸片段，与标记样品进行分子杂交，通过检测、分析杂交信号的强弱，以研究组织细胞内基因表达谱或基因差异表达等。9在病毒或细菌中的某个基因可产生一种特异性酶，它

12、可将原本无细胞毒或低细胞毒药物前体转化为细胞毒性物质，将感染细胞杀死，此种基因称为“自杀基因”。10将编码外源性抗原的基因导入体细胞表达抗原蛋白，诱导机体免疫系统激活，达到防病治疗目的。11在保留异常基因的情况下把正常基因导入体细胞，通过基因的非定点整合进入体细胞DNA，并使其表达，以补偿缺陷基因的功能；或导入靶细胞原来不表达的基因，利用其表达产物治疗疾病。12核酸分子经变性与复性，两条具有互补碱基序列的单链核酸分子结合成杂化双链的过程。13是将特定的目的基因导入体内，对其缺陷基因进行精确的原位替换，使细胞内基因得以正常表达。14将提取的RNA样本经变性琼脂糖凝胶电泳分离后，转移到硝酸纤维薄膜

13、上，再采用标记探针与之杂交，经显影或显色，检测信号强度，以用于组织细胞中总RNA或mRNA的定性和定量分析。15通常是指带有标记的、并已知碱基序列的DNA或RNA片段，能与待测样本中单链核酸分子互补配对结合，进而检测是否有同源序列。16又称基因扩增技术。在TaqDNA聚合酶催化下，以目的基因为模板、dNTP为原料，在特异性引物基础上沿着模板链延伸合成互补链。反复经过变性、退火和延伸这一循环过程，使目的基因呈指数扩增。17. 错义突变若发生在蛋白编码的非必需区，编码蛋白的活性不改变，这种突变称为中性突变。18如果突变发生在限制性核酸内切酶的识别位点上，用相关的限制酶切割基因组DNA，就会产生长度

14、改变的片断，称为限制性片断长度多态性（RFLP）。1核酸分子杂交的基本原理是依据 DNA 双链碱基互补、变性和复性的原理，用带有标记的、并已知碱基序列的核酸片段作为探针，与待测样本中单链核酸分子互补配对结合，进而检测样本中是否存在与其互补的同源核酸序列。2基因治疗要符合：属于已明确的单基因缺陷性疾病；仅限于体细胞；靶细胞有亲缘性和可操作性等；有明显疗效和无或低危害性等；表达水平稳定，时程长；必须有动物实验基础3目前基因治疗拟采用的方法有基因矫正、基因置换、基因增补、反义核酸技术及自杀基因的应用等。4基因诊断的对象是基因，它具有一般诊断所不具备的以下特点：针对性强、特异性高，以特定的基因为探测靶

15、点；诊断灵敏度高，PCR技术具有放大效应，PCR技术的几何扩增效应可检出pg水平的靶基因；适用性强、诊断范围广，可用于内源性基因和外源性基因的检测；简便快速、易行。5内源基因结构突变包括点突变、缺失或插入突变、染色体易位、基因重排、基因扩增等。突变若发生在生殖细胞，可引起各种遗传性疾病；若发生在其他细胞，可导致肿瘤、心血管疾病等。6基因诊断临床应用概况：遗传病的基因诊断：如镰刀形红细胞贫血病的珠蛋白基因的第六个密码子发生单个碱基突变。这一突变改变了该基因内部的一个内切酶Mst 作用位点。当把正常人和带有基因突变者的基因组DNA用Mst 酶解后，用珠蛋白基因探针杂交，结果会出现不同的DNA条带，

16、依此对其进行基因诊断。肿瘤的基因诊断：从分子生物学角度来看，肿瘤的发生是由某些因素的作用所致的多个癌基因的激活或抑癌基因的缺失。所以有人认为肿瘤是一种多基因异常性疾病。依其基因突变事实，可采用相应的技术对肿瘤进行基因诊断。诊断结果对了解癌变机制，肿瘤分类分型及预后均有指导意义。感染性疾病的基因诊断：采用分子杂交技术和PCR技术等对感染性疾病进行基因诊断，可以快速准确地诊断出致病微生物的种类；检测出带菌者和潜在感染性；检测病原微生物耐药性，及进行病原流行病学调查等。7目前基因诊断可应用于遗传性疾病、肿瘤、感染性疾病和某些传染性流行病等的诊断、分类分型；还可用于器官移植的组织配型。8基本过程如下：

17、a）治疗基因的选择 选择对疾病有治疗作用的特定目的基因是治疗的首要问题。b）基因载体的选择 有病毒载体和非病毒载体。常用病毒载体，如逆转录病毒等。c）靶细胞的选择 仅限选择体细胞，如淋巴细胞、造血细胞，上皮细胞等。d）基因转移 是重要环节。导入哺乳动物细胞的方法有非病毒介导基因转移和病毒介导的基因转移。非病毒介导的包括物理的和化学的方法。如显微注射、电穿孔等物理方法，磷酸钙沉淀、脂质体介导等化学方法。e）外源基因表达的筛选 利用载体中的标志基因对转染细胞进行筛选。f）回输体内 将治疗性基因修饰的细胞以不同方式回输体内以发挥治疗效果。如淋巴细胞可经静脉回输入血。9主要步骤为：（1）待测核酸样本制

18、备；（2）凝胶电泳分离待测DNA；（3）用变性液让凝胶中的DNA变性；（4）Southern印迹转移；（5）DNA的固定；（6）特异性探针的制备与标记；（7）预杂交、杂交；（8）杂交信号检测；（9）结果分析判断。10 PCR基本原理：在体外进行DNA复制过程，以目的基因为模板，设计的特异寡核苷酸为引物，dNTP为原料，由TaqDNA聚合酶催化在引物基础上进行延伸合成互补链，经过变性、退火和延伸这一过程的反复进行，可使目的基因在短时间内呈指数扩增。基本成分：DNA模板、特异性DNA引物、TaqDNA聚合酶、原料dNTP和含Mg2+的缓冲液等。基本过程：在反应管中加入反应缓冲液、dNTP、DNA引

19、物、模板DNA和Taq聚合酶；将反应管置于PCR仪进行自动循环操作：包括变性（94、30s）、退火（50、30s）、延伸（72、30s），经过约30轮循环（约2小时），可使新生DNA产量理论上达230拷贝。11Southern印迹杂交是由Edwin Southern于1975年首创的用于检测基因组DNA中特异序列的方法。首先将基因组DNA经限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳，分离后的DNA区带经变性处理后，将硝酸纤维膜覆盖于凝胶上，随着转移缓冲液被滤纸吸附而将凝胶中的DNA单链分子转移到硝酸纤维素膜上，然后在该膜上与标记探针进行杂交反应，即为Southern blotting 。 经检测分析杂交信号，可确定电泳胶中是否有目的DNA，并参照标准分子量的DNA条带，进一步分析目的DNA的分子量。此技术还可用于基因定位、基因结构和基因拷贝数等分析。12Northern印迹杂交是由Alwine于1977年建立，是相对于Southern印迹杂交而命名， 其基本原理与Southern blotting类似，只是转移的对象为RNA。提取RNA样本变性琼脂糖凝胶电泳转移至膜（NC）探针（标记DNA或RNA）与之杂交显影或显色检测信号。Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA由于其专一性好，假阳性率低，是一种较可靠的mRNA含量分析法。