3微生物计数培养基适用性检查验证方案Word下载.docx

1、组 员 质量控制实验室 QC主任 组 员 质量控制实验室 微生物QC 6.验证周期:除另有规定外，在实验室中，若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可以只进行一次。如果培养基的制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行适用性检查试验。7.验证小组人员及职责:7.1验证小组人员:本文件为受控文件，仅限湖北*药业有限公司内部使用。XX，不得使用、泄露或拷贝 16 文件 湖北*药业有限公司 微生物计数培养基 17/9 题 目 页码 SOP-YZ-6303 B 0 版本号 修改状态 编 号 验证方案 7.2验证人员职责及要求 7.2.1按验证方案及相

2、关文件实施验证。7.2.2认真观察并做好验证原始记录。7.2.3对实施验证的结果负责。7.3验证中各部门的职责 7.3.1验证领导组职责 7.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。 7.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。 7.3.1.3负责验证方案的批准工作。7.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。 7.3.1.5负责验证报告的批准工作。7.3.2验证项目小组职责 7.3.2.1负责验证方案的起草工作。7.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。 7.3.2.3负责验证方案的实施。7.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。 7.3.2.5参与验证结果的评价工作。

3、7.3.3质量部职责 7.3.3.1负责公司验证日常管理工作。7.3.3.2负责验证方案的审核工作。7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。 7.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。 7.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。XX，不得使用、泄露或拷贝 17 微生物计数培养基 18/9 题 目 页码 7.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。7.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。7.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。8.合格标准:8.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值

4、应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致;8.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。9.验证实施条件 9.1验证方案培训:在验证实施前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文件进行培训，确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。9.2微生物限度检测室:检验所使用的检测室应经过HVAC系统确认，并符合要求。9.3检验用水:验证过程使用的纯化水其制备系统应经过确认并符合要求，纯化5年版二部的要求。 水质量应经过检验并符合中国药典2019.4检验仪器设备:验证涉及的检验仪器（设备）与检验方法，应经过技术监督局校验合格或者公司确认/验证合格。9.5验证菌

5、种:验证所使用的菌种，其种类与传代次数应符合中国药典的相关要求。菌种情况见附件2:菌种确认。10.验证过程 10.1菌液制备 10.1.1取经30-35?培养18-24h的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢-6-8杆菌的新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-10，约为?100cfu/ml的菌悬液备用。10.1.2取经20-25?培养2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液体培养物1ml, 加入XX，不得使用、泄露或拷贝 18 微生物计数培养基 19/9 题 目 页码 -5-8-10，约为?100cfu/ml的菌悬液9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至

6、10备用。10.2实验操作 10.2.1胰酪大豆胨琼脂培养基:取11个无菌平皿，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（接种量?100cfu），另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后于30,35?倒置培养，培养时间不超过3天（白色念珠菌、黑曲霉培养时间不超过5天），计数;被检培养基同法操作。10.2.2胰酪大豆胨液体培养基:新鲜配制10ml/支的对照胰酪大豆胨液体培养基7支，121?灭菌15min，备用。取6支，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2支，每支接种1ml菌液（接种量

7、?100cfu），另1支不接种菌作为空白对照;置30,35?培养，培养时间不超过3天，分别观察结果。10.2.3沙氏葡萄糖琼脂培养基:取5个无菌平皿，分别接种上述白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1ml菌液（接种量?100cfu），另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于20,25?倒置培养培养，培养时间不超过5天，计数;10.3.检查结果:见附件5:计数用培养基适用性检查结果 11.异常情况与偏差处理:当出现偏差时，应按偏差处理管理规程进行处理。12.验证结果评定、结论与建议 验证小组组长负责收集各项验证、试验记录，根据验证、试验结果对验证效果进行综合评审，

8、起草验证报告、做出验证结论。对验证结果的评审应包括以下内容:12.1验证试验是否有遗漏, 12.2验证实施过程中对验证方案有无修改,修改原因、依据以及是否经过批XX，不得使用、泄露或拷贝 19 微生物计数培养基 20/9 题 目 页码 准, 12.3验证记录是否完整, 12.4验证试验结果是否符合标准要求,偏差及对偏差的说明是否合理,是否需要进一步补充试验, 13.附件 13.1 附件1:验证实施条件确认 13.2 附件2:培养基确认 13.3 附件3:菌种确认 13.4 附件4:菌液浓度确定 计数用培养基适用性检查结果 13.5 附件5:13.6 附件6:验证结果审批表 附件1: 设施设备验

9、证确认 设施设备名称 验证报告编号 验证结果 实验室HVAC系统 纯化水系统 LDZX-40A型立式自控电热压力 蒸汽灭菌器 PSH-500A型生化培养箱 303AS-2型电热恒温隔水式培养 箱 SW-CJ-1C型双人净化工作台 确认结论:确认人: 确认日期:XX，不得使用、泄露或拷贝 20 微生物计数培养基 21/9 题 目 页码 附件2: 培养基确认 培养基名称 来源 批号 有效期至 胰酪大豆胨琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 胰酪大豆胨琼脂对照培养基 胰酪大豆胨液体对照培养基 沙氏葡萄糖琼脂对照培养基 确认结论:附件3: 菌种确认 培养基名称 来源 批号 枯草芽孢杆

10、菌CMCC（B） 63 501 铜绿假单胞菌 CMCC（B）10 104 金黄色葡萄球菌 CMCC（B） 26 003 白色念珠菌 CMCC（F） 98 001 黑曲霉CMCC（F） 98 003 确认结论:XX，不得使用、泄露或拷贝 21 微生物计数培养基 22/9 题 目 页码 附件4:-3 -4 -5 -6 -7 1010101010 铜绿皿1 假单皿2 胞菌 金黄皿1 色葡萄球皿2 菌 大肠皿1 埃希皿2 菌 枯草皿1 芽孢皿2 杆菌 白色皿1 念珠皿2 菌 白色皿1 念珠菌（沙皿2 氏） 皿1 黑曲霉 皿2 黑曲皿1 霉（沙皿2 氏） 结论:根据要求，菌数要控制在每1ml中含菌数在?

11、100cfu，因此，我们确定菌液制备: 铜绿假单胞菌: 稀释 金黄色葡萄球菌: 稀释 大肠埃希菌: 稀释 枯草芽孢杆菌: 稀释 白色念珠菌（胰酪）: 稀释 白色念珠菌（沙氏）: 稀释 黑曲霉（胰酪）:稀释 黑曲霉（沙氏）: 稀释 年 月 日- 年 月 日 检验人 检验时间 年 月 日 复核人 复核时间 XX，不得使用、泄露或拷贝 22 微生物计数培养基 23/9 题 目 页码 附件5:被检培养基对照培养基比值 菌落形态 培养基 验证菌株 皿号 cfu/ml cfu/ml 0.5-2 大小生长情况 1 铜绿 2 假单胞菌 平均 金黄色 2 葡萄球 胰酪大豆胨琼脂培1 枯草 养基 2 芽孢杆菌 （

12、30,35?，?3天） 平均 *白色念珠菌、黑曲1 霉?5天 白色 2 念珠菌 黑曲霉 2 空白 1 1 铜绿 假单胞菌 2 胰酪大豆胨液体培1 金黄色 养基 葡萄球 2 （30,35?3天） 1 枯草 芽孢杆菌 2 空白 1 白色念珠菌 2 平均 沙氏葡萄糖琼脂培养基 1 （23,28?，72h） 黑曲霉 2 空白 1 检验人 检验时间 年 月 日- 年 月 日 复核人 复核时间 年 月 日 本文件为受控文件，仅限湖北*药业有限公司内部使用。XX，不得使用、泄露或拷贝 23 微生物计数培养基 24/9 题 目 页码 验证对象 验证开始日期 验证结束日期 评审意见（在方框中打?） 1、验证实验有否遗漏 ? 遗漏 ? 未遗漏 2、验证实施过程中对验证方案有无修改 ? 有修改 ? 无修改 3、方案修改的原因 ? 经过批准 ? 未经批准 4、验证记录是否完整 ? 完整 ? 不完整 5、是否出现偏差 ? 出现偏差 ? 未出现偏差 6、对偏差的说明是否合理 ? 合理 ? 不合理 7、是否需要作进一步的试验 ? 是 ? 否 验证项目小组组长:年 月 日 验证领导小组组长:表6:XX，不得使用、泄露或拷贝 24