忍冬花蕾中主要化学成分的变化对药材质量的影响Word下载.docx

1、1.2.3有机酸类 41.3 药理作用 51.3.1抗菌、抗病毒作用 51.3.2 解热、抗炎作用 51.3.3 利胆保肝作用 51.34 降血脂作用 51.4 前景与展望 52材料与方法 62.1实验材料 62.2 取样方法及材料处理情况 62.3 标准曲线制定 62.3.1绿原酸标准曲线制定 62.3.2黄酮标准曲线制定 62.4 绿原酸含量测定 72.5 黄酮的含量测定 73 结果与分析 73.1 金银花中黄酮含量的变化情况 73.2 金银花中绿原酸含量的变化情况 94 结论 12参考文献 131前言11关于金银花 金银花的应用历史悠久，传统医学认为金银花具有清热解毒、凉散风热的功能，现

2、代药理实验研究证明其具有抗菌、抗病毒、解热、增强免疫力、止血、利尿和降低胆固醇等作用，是卫生部、国家药品监督管理局和国家工商局关于30个贵重药材的通知中的品种，并列为出口创汇的主要品种心。中国药典2000年版一部收载中药材金银花即忍冬科植物忍冬三onicera Thunb、红腺忍冬LhypoglaucaMiq、山银花Lconflzsa DC或毛花柱忍冬Ldy,ys巧忆Rehde 4种为法定药用金银花正品，以其干燥的花蕾或带初开的花人药。金银花性味甘、性寒，用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、风热感冒、瘟病发热等症，属清热解毒之要药，有“中药之中的青霉素”之称1。在非典预防的中药处方中，金银花、

3、甘草应用频率最多，是常用大宗药材。1.2主要化学成分研究1.2.1挥发油 近年国内外学者通过气质联用已分离出芳樟醇、双花醇、棕榈酸、二氢香苇醇、二十四碳酸甲酯、十八碳二烯酸乙酯、棕榈酸乙酯、1，1一联二环己烷等数十种挥发油，其中鲜花以芳樟醇为主，含量高达14以上，其余为低沸点的不饱和萜烯类；干花则以棕榈酸为主，占26以上，芳樟醇含量不到04，为干燥加工过程所损失。其它成分则多为醇、醛、酮、酸、酯类和烷烃类等。1.22 黄酮类 从金银花正丁醇萃取物中分离得到4个黄酮类化合物，分别鉴定为木犀草素-3-0一D一葡萄糖苷、木犀草素-70一BD半乳糖苷、槲皮素一7-0- D葡萄糖苷和金丝桃苷。黄丽英等从

4、金银花氯仿萃取物中又分别得5一羟基一3 7，4，7一三甲氧基黄酮和Corymbosin。景小琦等2用紫外分光光度法测定显示：不同时期的金银花修剪枝各部位均含有黄酮且都是节部和叶片含量最高，花中次之，茎含量较低。1.2.3有机酸类 绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分，包括绿原酸（Chlorogcnic acid）和异绿原酸（Isochlorogenicacid）、咖啡酸（Coffeic acid）和3，5一二咖啡酰奎尼酸（3-5-0一dicaffeoylquinacid）。前三者是金银花的主要活性成分。异绿原酸是一混合物，咖啡酸是绿原酸的水解产物，而3，5一二咖啡酰奎尼酸为其主要成分。1.3

5、药理作用1.3.1抗菌、抗病毒作用 现代药理研究显示，金银花是一种作用很强的广谱抗菌中药。水浸剂较煎剂好。其抗菌消炎的主要成分是绿原酸及异绿原酸。金银花l：20的水煎剂对流感病毒、疱疹病毒有效，具有细胞外抑制柯萨病毒、埃可病毒作用，为治疗病毒性疾病提供了用药依据。金银花还能延缓呼吸道合胞病毒的CPE（细胞病变），于体外有一定的抗钩体作用，对皮肤真菌有一定抑制作用3。另外，金银花还有一定的抗猴免疫缺陷病毒（SIV）的作用，对抗艾滋病病毒（HIV）亦显示中等活性4。1.3.2 解热、抗炎作用 金银花具有明显抗炎作用，明显抑制炎性渗出和炎性增生，于体外还能抑制人的球蛋白的Cu热变性。其水煎液、口服液

6、和注射液有不同程度的退热作用，另外还能明显提高巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，提高血清凝集毒物的抗体积数水平，其临床作为清热解毒剂治疗感染性疾病主要是通过调节机体的免疫功能实现的。另外，金银花水提液能显著促进白细胞的吞噬功能，使受损淋巴细胞抗体产生能力显著增强。1.3.3 利胆保肝作用 金银花具有显著的利胆作用，可增进大鼠的胆汁分泌，对因乙酰基酸（paracetamo）所致小鼠肝脏毒性有保护作用。对CCl3引起的小鼠肝损伤有明显的保护作用，减轻肝脏病理损伤的严重程度，对醋氨酚所致小鼠急性肝损伤也有明显的保护作用旧川。1.34 降血脂作用 金银花能显著降低多种模型小鼠血清胆固醇及动脉粥样硬化指数，

7、提高高密度脂蛋白一胆固醇含量，保护胰腺B细胞及弱降糖作用5。体外实验也发现金银花可与胆固醇相结合。1.4 前景与展望 由于影响金银花品质的因素较多，有必要对其栽培、采收、加工、储存进行系统研究，总结出一套行之有效的方法，从而提高金银花商品药材的质量与产量。金银花植物来源复杂，金银花的商品药材及民间使用的药材植物品种较多，中国药典仅收载4个品种，而实际使用远不止于此。目前对金银花化学成分研究主要集中在忍冬，其余则少见报道。建议对一些主流商品（或野生变家种）品种的化学成分进行更加深入系统的研究，较全面地评价这些品种，以便充分开发利用金银花药用植物资源。一般认为，金银花的抗菌有效成分为绿原酸类化合物

8、，且常以绿原酸的含量高低来评价金银花质量的优劣6。但绿原酸并非是金银花中唯一的抑菌成分，金银花抗菌作用的有效成分和作用机理还有待进一步地深入研究。金银花除抑菌外，还有多种药理活性，若仅用绿原酸类化物作为金银花品质优劣的评价指标，尚欠妥当。有必要深入研究金银花的化学成分及各类成分的药理活性、构效关系，这对其进一步的临床应用具有重要的指导意义。现代研究发现金银花具有抗生育、溶血、致敏原作用等7，为确保用药安全有效，应加强金银花毒理学方面的研究。加强物种鉴定、品种选育、种植管理及质量控制等研究，为金银花产业提供技术支持。加强金银花系列产品研发，更好地为人类健康服务。2材料与方法2.1实验材料 在20

9、09年，取河南封丘县潘店乡屯里村规范化种植示范园区三年生、六年生、九年生、二十二年生忍冬的干燥花蕾，在2010年采同株的四、七、十、二十三年生忍冬的干燥花蕾，绿原酸对照品（美国SIGMA公司产），忍冬苷对照品（中国药科大学提供）。2.2 取样方法及材料处理情况 开花期每天按所定各株分采一次花样，烘干备用。在做化学分析前把样品烘干、碾碎备用。2.3 标准曲线制定2.3.1绿原酸标准曲线制定 精密称取样品绿原酸0.0038g，放入50mL容量瓶中，用0.2moLL-1 HCL定容至刻度，摇匀，配制成0.0762mgmL-1 绿原酸溶液，再分别吸取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、1

10、2.0mL于50mL容量瓶中, 用0.2 moLL-1HCL定容至刻度，得7种不同浓度的溶液，再以0.2 moLL-1HCL做空白对照，于紫外327 nm处测吸光度，根据吸光值计算的回归方程：Y=53.8374X-0.0671 r=0.99982.3.2黄酮标准曲线制定 精确称取忍冬苷7.54mg,加甲醇溶解，最后定容至50mL刻度，摇均，即得浓度为0.1508 mgmL-1对照品溶液.精确吸取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0mL，分别置于25mL的容量瓶中，加蒸馏水至8mL，加1mL5%亚硝酸钠，放置6分钟；加入1mL10%硝酸铝，放置6分钟；

11、再加入10mL10%轻氧化钠；加蒸馏水至刻度；摇均，放置15分钟。在510nm处比色测定。根据测定值计算标准方程：Y=2.9644X+0.0456 r=0.96582.4 绿原酸含量测定 精密称取金银花材料粉末0.5000g，加95%乙醇40mL泡12h，将泡好溶液过滤，移入50mL容量瓶中，用少量95%乙醇冲洗药渣，并定容至刻度，摇匀。精密吸取滤液1mL于50mL容量瓶中，用0.2 moLL-1HCL定容至刻度，摇匀。再以0.2 moLL-1HCL做空白对照，于紫外327 nm处测吸光度，按照标准曲线，计算绿原酸含量8。2.5 黄酮的含量测定 精密称取金银花粉末2g，加入100mL圆底烧瓶，

12、用50mL 95%乙醇水浴（80度），加热回流2小时，过滤，吸取5mL滤液置于蒸发皿上蒸干。残渣用25mL蒸馏水溶解，然后完全转移至分液漏斗中，用等体积乙酸乙酯萃取3次，取下层液置于水浴上蒸干。残渣用25mL的0.5%碳酸钠溶液完全溶解，吸取5mL于25mL容量瓶中，加蒸馏水至8mL，加1mL5%亚硝酸钠，放置6分钟；再加入10mL10%氢氧化钠，加蒸馏水至刻度；摇均，放置15分钟在510nm下比色测定。3 结果与分析3.1 金银花中黄酮含量的变化情况 2009年五月和六月在河南封丘中科院南京土壤研究所野外生态实验站对三年生、六年生、九年生、二十二年生金银花研究，并做黄酮含量测定，结果如下：表

13、1：五月份金银花中黄酮的含量和分析结果三年生六年生九年生二十二年生12月5日2.170-1.1605月13日2.1601.9001.6405月14日2.0405月15日2.3902.1205月16日2.4802.1305月17日2.8405月18日2.8605月19日2.3002.5201.7605月20日3.0005月21日2.2802.0602.905月25日2.3402.260方差0.022580.079220.034190.5851标准方差0.15030.28150.18490.7649平均值2.26832.37172.02672.2817变异系数6.6311.879.1233.52

14、注：画横线的为空缺；在统计不同时期的数据时不计算空缺的数据。表2：六月份金银花中黄酮的含量和分析结果6月20日1.0201.7500.8206月21日1.4801.2203.4801.3006月22日3.8206月23日3.8801.3206月24日2.8064.5706月25日4.3502.9803.5906月26日2.9704.4603.2006月27日1.7406月28日4.5604.1406月29日0.61331.97670.84871.14440.78310.44350.92121.07002.06833.43833.50862.198637.8612.9026.2648.66注：图

15、1五月份和六月份金银花中黄铜含量的变异系数图从图1可知：二十二年生忍冬的金银花中黄酮含量的在五月、六月份变异系数较大，三年生、九年生的忍冬的金银花中黄酮含量在六月份的变异系数较大；三年生忍冬的金银花中黄酮的含量变异系数较小；总体的来说六年生、九年生的忍冬的金银花中黄酮的含量比较稳定；五月份金银花中黄酮的含量较稳定。 图2五月份和六月份金银花中黄酮含量的比较图从图2可知：五月份忍冬的金银花中黄酮的含量差别不大；六月份六年生、九年生的忍冬中黄酮的含量较高。3.2 金银花中绿原酸含量的变化情况五月和六月在河南封丘中科院南京土壤研究所野外生态实验站对三年生、六年生、九年生、二十二年生金银花研究，并做绿

16、原酸含量测定，结果如下： 表3：五月份金银花中绿原酸含量和分析结果日期-1.9202.4942.4972.6822.6482.6502.8622.6782.9912.950-3.0252.8943.0332.7713.1733.0473.0373.1104.1463.1600.38010.063670.058860.21510.61650.25230.24260.46383.08262.8412.89172.791720.008.888.3916.61 表4：六月份金银花中绿原酸含量和分析结果2.1912.2422.0981.8833.0272.9132.8882.7573.0553.0213

17、.2892.9423.4383.0593.1232.5753.107-3.0812.9340.11810.14140.34150.1499标准差0.34370.3760.58440.3872平均数2.84622.82132.76782.866612.0713.3321.1113.51图3五月份和六月份金银花中绿原酸含量的变异系数比较图从图3可知：五月份三年生、二十二年生的忍冬的金银花的含量的变异系数比较大；六月份九年生忍冬的金银花中绿原酸含量的变异系数最大9。从图4可知：五月份三年生忍冬的金银花中绿原酸含量最高10，其它差别不大；六月份四个株龄的忍冬的金银花中绿原酸含量差别不大。总体来说，五月

18、份绿原酸含量较高，即第一茬花绿原酸含量较高。图4五月份和六月份绿原酸含量的比较图2010年五月在河南封丘中科院南京土壤研究所野外生态实验站对四年生、七年生、十年生、二十三年生金银花（与2009年的四株是同一株）研究11，并做绿原酸含量测定，结果如下：表5：五月份绿原酸含量和分析结果四年生七年生十年生二十三年生5月9日0.2600.2770.3065月11日0.2940.3390.3050.3280.2240.2850.3930.3430.2360.2960.3130.3350.3580.3150.3380.3190.3420.3290.3620.2980.2955月23日0.3810.3660

19、.290.3410.3365月27日0.4950.4065月29日0.3010.3570.00450.00140.00230.00150.06700.03770.04790.03840.32740.33610.33240.305520.4911.2114.412.58从图5可以看出，四年生、七年生、十年生绿原酸含量较高，其中七年生较高，12从图的趋势看中等树龄的忍冬的金银花的绿原酸含量较高。图5五月份绿原酸含量图4 结论 五月份即第一茬忍冬的金银花中黄酮和绿原酸含量较稳定，且其中黄酮和绿原酸的含量较高，因此第一茬金银花的品质比较好13；在采摘金银花时应注意把采摘的花分批存放，不要把不同时期采摘

20、的花混在一起，以免影响金银花的品质。忍冬六年生、九年生的金银花中黄酮和绿原酸的含量较高且含量较稳定，因此六年生、九年生忍冬的金银花的品质较好，由此推测中等株龄的忍冬的品质较好，对于推测的结果的正确性有待进一步的研究14；在人工种植时要控制株龄在中等水平，以提高金银花的品质；采摘时也要把不同株龄的忍冬的金银花分批存放在一起，从而保证金银花的质量。参考文献1. 徐迎春.中药金银花的GAP研究，中国科学院南京土壤研究所，20022. 曾令杰，邢俊波，李萍.忍冬科的植物化学分类学研究的初探J.中国中药杂志，2000,45（5）:3023. 岳凤先.中药的现代化研究M,中医古籍出版社，1988:234. 邢俊波.生物多样性与中药金银花质量的关系.中国药科大学博士学位论文M,2001:455. 张永清，程炳嵩.不同采收期金银花质量的比较，特产研究2003,20（1）：46-48.6. 王本祥. 现代中药药理学 M . 天津: 天津科学技术出版社, 1999:204-204.7. 黄喜茹，刘伟娜，曹冬.金银花的化学成分 药理作用研究评析J.中医药学刊,2005,23（3）:418-419.8. 吴晓春，杨苏亚.金银花的成分与药理作用分析J.青海医药杂志，2007