1、2、我们日常吃的大米中铁含量极低,科研人员通过基因工程等技术,培育出了铁含量比普通大米高60的转基因水稻,改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图,请回答:(1)在上述工程中,铁结合蛋白基因称为_,获取该基因后常用_技术进行扩增。(2)构建重组Ti质粒时,通常要用同种限制酶分别切割_和_。将重组Ti质粒转入农杆菌时,可以用_处理农杆菌,使重组Ti质粒易于导入。(3)将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时,通过培养基2的筛选培养,可以获得_;培养基3与培养基2的区别是_。(4)检测培育转基因水稻的目的是否达到,需要检测转基因水稻_。3、下图是利用生物工程技术培育转荧光蛋白
2、基因克隆猪的过程,请据图回答问题:(1)卵母细胞除从活体输卵管中采集外,还可从已屠宰的雌猪 中获取。(2)过程用到的工具酶有 ;过程最常用的方法是 。(3)图中转荧光蛋白基因克隆猪如果 和 ,即可分别在分子水平和个体水平说明荧光蛋白基因已成功表达。(4)过程为 技术,其意义是 。(5)若要同时获得多头转荧光蛋白基因克隆猪,可在 期进行胚胎分割。4、大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中,如果没有插入外源基因,LacZ基因便可表达出口一半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和X-gal时,X-gal便会被一半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形
3、成蓝色菌落。反之,则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。 请分析并回答: (1)已获得的目的基因可利用 技术进行扩增。 (2)目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中,需要DNA连接酶恢复 键。 (3)将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管的目的是 ;大肠杆菌需事先用Ca2+进行处理,目的是 。 (4)将试管中的菌液接种于选择培养基上培养,培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括 和生长因子,还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素,其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出 。 (5)若观察到培养基上出现 色菌落,则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有
4、LacZ基因,则不利于重组质粒的筛选,原因是 。5、下图是利用质粒(有抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因和Sal I、BamH I、Hind 三种限制酶切割位点)获得转基因抗盐烟草的培育过程,请据图回答有关问题:(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状,这种新性状的产生所依据的原理是 。从基因文库中获得的抗盐基因可用 技术进行扩增。(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下,烟草不会具有抗盐特性,原因是抗盐基因在烟草细胞中不能 ,也不能合成抗盐基因的mRNA。(3)为了确定抗盐烟草是否培育成功,既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测,又要用一定浓度的盐水浇灌的方法从个
5、体水平鉴定烟草植株的耐盐性。(4)图中将抗盐基因导入质粒,需用 限制酶对质粒和 进行切割。(5)烟草组织细胞具有 ,因此,可以利用组织培养技术将导入抗盐基因的烟草组织细胞培育成植株。图中、依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的 、 。在形成愈伤组织的过程中,细胞的新陈代谢类型是 。6、生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。据图回答:(1)过程酶作用的部位是 键,此过程只发生在非结合区DNA,过程酶作用的部位是 键。(2)、两过程利用了酶的 特性。(3)若将得到的DNA片段用于构建重组质粒,需要过程的测序结果与 酶的
6、识别序列进行对比,已确定选用何种酶。(4)如果复合体中的蛋白质为RNA聚合酶,则其识别、结合DNA序列位基因的 。(5)以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有 (多选)A.分离得到核糖体,用蛋白酶酶解后提取rRNAB.用无水乙醇处理菠菜叶片,提取叶绿体基粒膜上的光合色素C通过分子杂交手段,用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位D将抑制成熟基因导入番茄,其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合,终止后者翻译,延迟果实成熟。7、科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组,并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中,需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒,便
7、于重组和筛选。已知限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是GGATCC ,限制性核酸内切酶II的识别序列和切点是GATC,据图回答:(1)过程所需要的酶是。(2)在构建基因表达载体过程中,应用限制性核酸内切酶 切割质粒,用限制性核酸内切酶 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过_ 原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组,原因是 。(3)在过程一般将受体大肠杆菌用_处理,以增大的通透性,使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。(4)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果(黑点表示菌落),能够生长的细菌中已导入了 ,反之则
8、没有导入;再将灭菌绒布按到培养基a上,使绒布表面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图b的结果(空圈表示与a对照无菌落的位置)。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是 ,这些细菌中导入了_。(5)人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为 。写出目的基因导入细菌中表达的过程 。8、国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制各药用蛋白”取得重大进震。目前,已经成功获得经纯化的抗凝血酶III蛋白,达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图:(1)根据流程图分析,动物乳腺生物反应器主要利用了 技术(至少写2种)。(2)要实现超数排卵,应在崂山奶出羊A发情
9、期的某一阶段用 处理,然后收集卵子。通过采集的精子不能直接使成熟的卵子受精,原因是 。(3)过程需将抗凝血酶III基因注入受精卵内,在显微镜下判断是否受精作用的标志是 。(4)要使人的抗凝血酶III基因在山羊乳腺细胞中特异性表达,在之前要提取囊胚期的 细胞,采用检测 技术对其 和 进行检测。(5)若要一次获得多只完全相同的转基因崂山奶山羊D,应采用 技术。9、番茄果实成熟过程中,某种酶(PG)开始合成并显著增加,促使果实变红变软。但不利于长途运输和长期保鲜。科学家利用反义RNA技术(见图解),可有效解决此问题。该技术的核心是,从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA,继而以该信使RNA为模板
10、人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞,经组织培养获得完整植株。新植株在果实发育过程中,反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有mRNA(靶mRNA)互补形或双链RNA,阻止靶mRNA进一步翻译形成PG,从而达到抑制果实成熟的目的。请结合图解回答:(1)若要将人工合成的完整反义基因克隆出成百上千的反义基因,可用 (写出中文名称)技术实现体外快速扩增。(2)假设PCR反应中的初始只有一个DNA作为模板, n轮循环的产物中含有模板DNA链的DNA分子有 个、含有人工合成的DNA引物的DNA分子有 个。若DNA分子中共含900个碱基对,碱基数量满足:(A+T)(G+C)=12,经5次循环,至少需要
11、向试管中加入 个腺嘌呤脱氧核苷酸(不考虑引物所对应的片段)。(3)PCR反应中所用到的酶是 ,其具有 的特性。(4)普通番茄细胞导入目的基因后,先要接种到诱导培养基上培养,脱分化后得到 ,再转接到分化培养基上,诱导出试管苗,然后进一步培养成正常植株。10、人外周血单核细胞能合成白细胞介素2(IL-2)。该蛋白为淋巴因子,可增强机体免疫功能,但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因,在酵母菌中表达出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。技术流程如右图。请回答:(1)从健康人外周血分离得到的单核细胞,应置于 气体环境中,并在适宜
12、温度和pH条件下培养48h。提取细胞总RNA,生成cDNA。图中PCR过程的模板是 。(2)表达载体1中的位点a应含有图中 酶的识别序列,才能成功构建表达载体2。(3)表达载体2导入酵母菌后,融合基因转录出的mRNA中,与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有 密码,才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白。(4)白细胞介素在单核细胞内合成的直接模板是 ,在体液免疫过程中,白细胞介素可作用于受抗原刺激的B细胞,使B细胞增殖、分化,形成 细胞。(5)将表达载体2导入酵母细胞,在培养液中培养一段时间后离心,取 (上清液/菌体)进行产物鉴定。11、人类在预防与诊疗传染性疾病过程中,经常使用疫苗和抗体。已
13、知某传染性疾病的病原体为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图: 请回答:(1)过程代表的是_。(2)过程构建A基因表达载体时,必须使用_和_两种工具酶。(3)过程采用的实验技术是_,获得的X是_。(4)对健康人进行该传染病免疫预防时,可选用图中基因工程生产的_所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时,可以疑似患者体内分离病毒,与已知病毒进行_比较;或用图中的_进行特异性结合检测。12、由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱,有人将地衣芽孢杆菌的-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。(1)图甲中,过程需要的酶有_。为达到筛选目的,平板内的固体培养基应以_作为唯一碳源。、过程需要重复几次,目的是_。(2)某同学尝试过程的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_;推测该同学接种时可能的操作失误是_。(3)以淀粉为原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵,接种_菌的发酵罐需要先排气,其原因是_。(4)用凝胶色谱法分离一淀粉酶时,在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质,相对分子质量较_。13、
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