微生物肥料实验用培养基技术条件NYT 1114文档格式.docx

1、5培养基选用原则5.1含有满足所培养的微生物生长必需的营养物质。5.2各种营养物质要有合适的比例和浓度。5.3有合适的pH范围和一定的缓冲pH能力。5.4有一定的氧化还原电位和合适的渗透压。5.5对于特殊用途的培养基，除遵循以上原则外，还应满足以下要求：5.5.1在选择培养基中，应加入利于目的微生物生长而抑制其它微生物生长的化学物质。5.5.2菌种保藏培养基选用原则5.5.2.1对于产芽孢或孢子的菌种保藏培养基应以易产生芽孢或孢子为原则。5.5.2.2对于自养微生物的菌种保藏培养基应只使用无机盐类，不使用有机物。5.5.2.3对能利用无机氮源的微生物，其菌种保藏培养基中不宜使用有机氮源。5.5

2、.2.4对营养缺陷型微生物，其菌种保藏培养基中必须含有该缺陷所需的物质。5.5.2.5对耐某种药物的微生物，其菌种保藏培养基中应含有一定浓度的该种药物。6要求6.1材料6.1.1用于配制培养基的化学试剂纯度至少为化学纯。6.1.2试剂出现颜色改变、沉淀、混浊、吸潮结块的现象时，不宜使用。6.1.3天然原材料应质量稳定，未发生霉变、生虫和变质。6.1.4琼脂凝固后应具有良好的透明度。6.2器皿6.2.1配制试剂所用的器皿应洁净。6.2.2盛装培养基的器皿应由对微生物无毒害并耐高温的材料制成。6.2.3材料需加热溶解时，可选用玻璃容器、搪瓷缸和不锈钢容器等，禁用铜制、铝制和铁制容器。6.3棉塞或硅

3、胶塞6.3.1不应使用脱脂棉制作棉塞。6.3.2使用棉塞或硅胶塞时，将其长度的2/3塞入容器内。要求松紧适当，紧贴管壁。6.3.3灭菌时，棉塞外要加包牛皮纸或耐高温透气塑料薄膜，以防止灭菌时棉塞受潮或进水。6.4培养基配制6.4.1材料称量6.4.1.1根据培养基配方，准确称取相应材料的量。6.4.1.2当配方中某种成分微量时，可预先将该成分配制成一定浓度的母液，然后按量加入。母液须低温保存。6.4.2材料溶解6.4.2.1不溶于水的组分应在所需的溶剂中溶解后，再加入到培养基中。6.4.2.2非溶性组分，如CaCO3,应最后加入。6.4.2.3易形成沉淀的组分应分别溶解。6.4.2.4不易溶解

4、的组分应做预处理。加热溶解过程中一旦出现焦化现象时应弃用。6.4.2.5培养基中含有指示剂或有颜色的试剂时，应在培养基pH调节好之后再加入。6.4.3pH测定与调节6.4.3.1用精密pH试纸或酸度计测定培养基的pH。6.4.3.2培养基的pH用稀酸或稀碱溶液调节。调节过程中不可用酸碱溶液反复调节。6.4.4分装装入三角瓶的培养基体积不应超过其容量的1/2，装入试管的培养基体积为其容量的1/41/5。分装过程中防止培养基粘附在瓶口或管口。6.4.5灭菌6.4.5.1高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌控制的条件为121、维持30min。当培养基中含有不耐高温的组分时，可采用115、维持15min30min

5、。6.4.5.2过滤除菌在无菌条件下，将待除菌溶液经滤膜为0.2m的细菌过滤器，达到除菌的目的。适用于易受高温破坏、失活的物质的灭菌，如维生素。6.4.5.3干热灭菌将待灭菌的器皿，用纸包好或放在特定的容器内，置于烘箱中，在160左右保持2h。适用于培养皿等玻璃器皿的灭菌。6.4.6平板和斜面的制备在无菌条件下把冷却至45左右的培养基倒入无菌培养皿内，平板厚度范围控制在3mm5mm。制备的斜面长度不超过试管长度的2/5。6.5培养基合格检验6.5.1检查固体培养基湿度。培养基冷凝水过多或干燥出现裂痕时，均不能使用。6.5.2随机抽取已灭过菌的培养基放入2830培养箱中培养24h48h，确定无菌

6、生长后方可使用。6.6培养基存放培养基应放在冰箱48保存。经过存放的培养基使用前应进行6.5的合格检验，合格后方可使用。7微生物肥料常用培养基配方、配制要点和用途微生物肥料常用培养基配方、配制要点和用途参见附录A。 附录A（规范性附录）常用培养基配方A.1营养琼脂A.1.1成分蛋白胨 10.0 g牛肉膏 3.0 g氯化钠（NaCl） 5.0 g琼脂 18.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.27.5A.1.2配制要点将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，再加琼脂，加热溶化后分装。121高压灭菌30min。A.1.3用途适用于一般细菌培养和保藏。A.2芽孢杆菌培养基A.2.1成分土壤浸出液25

7、0 mL750mL 18. 0 g A.2.2配制要点土壤浸取液：土壤50g，加水200mL，121灭菌1h，过滤补水至250mL。其他同A.1.2A.2.3用途适用于芽孢杆菌的保藏。A.3阿须贝氏（Ashby）培养基A.3.1成分磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.2 g硫酸镁（MgSO47H2O）碳酸钙（CaCO3）甘露醇（C6H14O6）硫酸钙（CaSO42H2O） 0.1 g 6.87.0A.3.2配制要点同A.1.2A.3.3用途用于固氮菌的培养。A.4根瘤菌培养基YMA.4.1成分磷酸氢二钾（K2HPO43H2O） 0.5 g酵母膏 1.0 g0.5%刚果红溶液 5 mLA.4.2配制

8、要点将各种营养成分溶解于蒸馏水内，调节pH后，加入刚果红溶液。再加琼脂，加热溶化后分装。A.4.3用途适用于根瘤菌的培养。A.5根瘤菌培养基 = 2 * ROMAN II A.5.1成分酵母粉 200 mL 15.0 g 800 mL 7.2A.5.2配制要点土壤浸出液：土壤50g，加水200mL，121灭菌1h，过滤补水至200mL。A.5.3用途适用于根瘤菌的保藏和培养。A.6硅酸盐细菌培养基A.6.1成分蔗糖（C12H22O11）磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O） 2.0 g 0.1 g 三氯化铁（FeCl36H2O） 0.005 g 7.58.0A.6.2配制要点先将三氯化铁配制成5的溶液，按量加入，其他同A.1.2A.6.3用途适用于硅酸盐细菌的培养。A.7固氮（茎瘤）根瘤菌培养基A.7.1成分乳酸钠（C3H5O3Na）