临床微生物检验考试重点精华版文档格式.docx

1、正常菌群：定居在人类皮肤和黏膜上的各类微生物，在正常情况下无害，而且具有拮抗外来病原微生物和提供某些营养物的作用。 条件致病微生物：原属正常菌群中的细菌，由于机体抵抗力下降、寄居部位改变或寄居微生物丛平衡失调，能引起内源性感染。病原微生物：指少数能引起人类和动、植物致病的微生物。3.微生物学：是生物学的一个分支，它是研究微生物的类型、分布、形态结构、生命活动及规律、遗传、进化以及与人类、动物、植物等相互关系的一门学科。随着其研究的深入，形成了很多分支学科。4.医学微生物学：是研究与医学和疾病有关的病原微生物的生物学特性、致病性、免疫性以及特异性诊断和预防治疗措施的学科。5.临床微生物学的性质和

2、任务：1.研究感染性疾病的病原体特征2.提供快速而准确的病原学诊断3.指导临床合理使用抗菌药物4.对医院感染进行监控6.临床微生物检验的思路与原则：1.确保分析前质量2.全面了解机体的正常菌群3.保证检验过程中的质量4.采用三定一结合（定性、定量和定位，结合病情）5.重视和加强与临床的联系第一章1.生物安全：采用微生物学技术、安全设施、保护设备,防止实验室工作人员、环境及公众暴露于实验室中处理储存的已知或潜在的感染性微生物。2.实验室生物安全：描述防止实验室发生病原体或毒素意外暴露及释放的原则、技术及实践。3.获得性感染主要是由于处理感染性物质时的操作不当造成的。4.危险度评估是生物安全的核心

3、。5.生物安全基本设备：生物安全柜和个人防护设备6.实验室生物安全保障：指单位和个人为防止病原体或毒素丢失 被窃、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。7.生物恐怖：是指使用致病性微生物或毒素等作为袭击手段, 通过一定的途径散布危险因子，造成疾病的暴发、流行，导致人群失能和死亡。8.消毒（disinfection）：通过物理或化学方法去除或杀灭大多数微生物的过程。灭菌（sterilization）：通过物理或化学方法杀灭或去除所有微生物的过程。消毒灭菌技术包括：热力（湿热灭菌和干热灭菌）、化学（液体或气体）、辐射（辐射和紫外线）、过滤技术。9.医院感染的定义：医院感染又称医疗机构相关感染。指病

4、人入院时不存在也不处于潜伏期而在住院期间发生的感染，同时也包括在医院内感染而在出院后发病的感染。医院感染的分类：外源性感染：交叉感染和医源性感染；内源性感染：又称自身感染10.常见医院感染：泌尿道感染最常见：与留置导管有关、 呼吸道感染、外科伤口感染、血流感染占医院感染的小部分，但是最重要的院内感染，近年来日益增加、其它：烧伤、皮肤和软组织感染，眼和结膜感染、子宫内膜炎、产后生殖道感染，胃肠炎、肝炎等 。第二章1.标本采集的一般原则：1无菌采集（标本部位和盛放容器）2早期采集3根据目的菌的特性用不同方法采集4采集适量标本5安全采集2.临床常见采血指征 ：1发热（38C）或低温（36C） 2寒战

5、 3白细胞增多（计数大于12，000109/L，特别有“核左移” 未成熟的或杆状核的白细胞） 4粒细胞减少（成熟的多核白细胞1cmX1cm）结晶紫染色1min，水洗甩干 加碘液媒染1min，水洗甩干加95%乙醇脱色30s，水洗甩干 用稀释复红或沙黄复染30s，水洗吸干后镜检临床意义：鉴别细菌 选择治疗用药 与细菌致病性有关4.培养基：由人工方法配置而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。5.培养基的种类按物理状态分： 液体、半固体、固体培养基（高层、斜面、高层斜面、平板）按用途分：基础、营养、鉴别、选择和特殊培养基5.细菌的培养方法需氧培养法（37，1824h）二氧化碳培养法：二氧化碳

6、培养箱和烛缸法 厌氧培养法6.生化反应 （一）碳水化合物的代谢试验1.糖（醇、苷）类发酵试验（1）原理：不同细菌分解糖（醇、苷）的酶各异，代谢能力产物各不同，有的不分解，有的仅产酸，有的既产酸又产气，利用此特点鉴别细菌。（2）培养基：0.51.0%糖类等，内有指示剂。（3）方法：细菌接种糖发酵管，37、24h孵育后观察结果结果判断：有的细菌能分解某些糖产酸产气（AG/+），有的只能产酸而不产气（A/+），有的则不能分解糖类（N/-）2. 葡萄糖代谢类型鉴别试验（O/F试验） 原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧分子参加，在无氧环境下不能分解葡萄糖，称为氧化型; 在分解葡萄糖的过程中，可以进

7、行无氧降解，称为发酵型，此型细菌在有氧和无氧环境下都能分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。 培养基：H-L培养基（O/F 氧化-发酵培养基） 阴性杆菌指示剂为溴麝香草酚兰；阳性球菌指示剂为溴甲酚紫。 方法：2支试管，一支加灭菌的液体石蜡覆盖，使培养基与空气隔绝；另一支不加灭菌的液体石蜡，培养基暴露于空气中。35培养1824h后，观察结果 结果及应用：氧化型细菌（O）仅在有氧环境中分解葡萄糖，在无氧环境中不分解，加液体石蜡不变色，不加液体石蜡变色；发酵型细菌（F）在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，两管均变色不利用型细菌（N）有氧或无氧的环境中都不能分解葡萄糖，两管均不变色产碱型细菌（K）开

8、放管变蓝，封闭管不变色3.-半乳糖苷酶试验（ONPG）具有-半乳糖苷酶的细菌，可分解邻-硝基酚- -D-半乳糖苷（ONPG），生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下亦可检出。（2）试剂：0.75M ONPG溶液取纯化菌落于0.25ml无菌生理盐水中，制成浓的菌悬液，加入一滴甲苯使酶释放，375min，再加入等量的ONPG溶液，水浴20min-3h观察结果。（4）应用：迅速或迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定a 细菌分解乳糖需要两种酶，一种是半乳糖苷渗透酶，可是乳糖通过细菌的细胞壁进入菌体内另一种是-半乳糖苷酶，可将乳糖分解成半乳糖和葡

9、萄糖，进而再分解。缓慢分解乳糖的细菌缺乏渗透酶，不能将乳糖快速运到细胞内所以需几天乳糖才能被分解。b 乳糖：葡萄糖和半乳糖通过-半乳糖苷键连接 ONPG：邻硝基酚取代了葡萄糖，其分子小很多可直接进入菌体内。4.七叶苷水解试验有的细菌可将七叶苷水解成七叶素和葡萄糖，前者与二价铁离子反应，生成黑色化合物七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基（3）方法及应用：肠球菌阳性，其他链球菌阴性5.甲基红试验（MR） 原理：细菌在代谢糖的过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸的代谢有两种途径，一种是丙酮酸进一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，使PH降低到4.5以下，加入甲基红试剂显红色（阳性）。如果酸进一步转化为其它物

10、质（醇、酮、醛、气体和水），或丙酮酸按另一途径代谢，则PH仍保持在6.2以上，加入甲基红试剂呈黄色（阴性）。 培养基 ：葡萄糖蛋白胨水 方法：将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育后加入甲基红试剂，立即观察结果。结果应用：大肠埃希菌阳性，产气肠杆菌阴性。6. V-P试验 原理 ：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化生成二乙酰，二乙酰再与培养基中精氨酸、肌酐等所含的胍基结合，形成红色化合物（胍缩二乙酰）。培养基：同甲基红试验方法：将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育后加入V-P试剂，35放置1530分钟观察结果。 结果与应用: 同

11、甲基红试验一起使用。甲基红阳性者V-P试验常阴性（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验1.明胶液化试验细菌分泌的明胶酶（胞外蛋白水解酶）能分解明胶使明胶失去凝固能力而液化（2）方法：将待检菌接种于明胶培养基中， 35孵育24h到7日，每24h取出放入4 冰箱约30min以上，观察有无液化。（明胶的凝固点20 ，高于24 呈液化状态 ）（3）应用：a 肠杆菌科细菌鉴别b 厌氧菌鉴定c 非发酵菌鉴定常用2. 吲哚试验（靛基质试验）原理：具有色氨酸酶的细菌，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（靛基质），吲哚与加入试剂对位二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚呈红色。培养基：蛋白胨水培养基方法与结果：将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，3