1、1、动 物:家兔2、器 械:动物手术器材(手术刀、手术剪、止血钳、玻璃分针,动脉夹,丝线,注射器,兔手术台),气管插管,橡皮管(长1 m以上,短10-20 cm),体重秤,呼吸换能器(或张力换能器),生物信号处理系统等。3、药品和试剂:20%乌拉坦、3%乳酸、生理盐水等。实验方法:1、仪器的连接与标定将换能器和微机记录系统的信号输入通道连接,刺激电极与刺激输出通道连接,设定记录呼吸运动的参数,水压计呼吸通道定标(已定标)2、捉拿、称重、麻 醉(1)捉拿:以右手抓住兔颈部的毛皮提起,然后左手托其臀部或腹部,让其体重重量的大部分集中在左手上,避免了抓取过程中的动物损伤。(2)麻醉:兔耳缘静脉注射:
2、20%氨基甲酸乙酯称量兔子体重2.8kg,按5 ml/kg体重的剂量需用14ml麻醉剂,抽吸麻醉液时先取下针头,多吸一部分,排出气泡选择耳缘静脉,用酒精刺激后血管较粗;按压住血管根部,血管鼓起再进针,针头扎进1/3至1/2,并用拇指固定住,从远心端开始,循序向根部移动。注射时推动液体先快后慢(前1/3快,后面慢慢推进)。进行静脉麻醉时,先将总用药量的三分之一快速注入,使动物迅速渡过兴奋期,余下的三分之二量缓慢注射,并密切观察动物麻醉状态及反应。4 麻醉兔子至呼吸深慢而平稳,角膜反射明显迟钝,全身肌肉松弛,皮肤夹捏反射消失时停止麻醉。并将剩余麻醉液需回收;3. 家兔固定和剪毛固定:门牙拉直使颈部
3、挺起,固定头部,绑定四肢;剪毛:剪刀贴住皮肤剪毛;提起毛再剪,易剪破皮肤 4. 颈部手术颈部正中切口分离软组织暴露气管钝性分离双侧迷走神经,各自穿2根丝线备用,钝性分离气管,底下穿棉线备用气管倒T形切口,插入Y形气管插管,棉线固定5.气管插管(1)穿线备用(2)环状软骨下1cm ,做倒T型切口(气管插管术示意图-示气管切口)(3)将三通管向肺方向插入,固定(气管插管术示意图-示固定插管)6. 分离神经 由里向外翻出气管一侧组织颈动脉鞘:粗 迷走神经,中 交感神经,细 减压神经神经分离示意图:神经分离示意图-示迷走神经7、腹部手术(1)切开胸骨下端剑突部位的皮肤,再沿腹白线切开长约2ml的切口。
4、细心分离表面的组织(勿伤及胸骨),暴露出剑突与骨柄(注意不要伤害膈肌)。(2)将系有长线的金属钩钩住或用线系住胸骨柄,线的另一端接张力换能器。(3)连接实验装置(4)选实验项目:8、观察正常呼吸曲线(1)观察正常呼吸曲线的频率和幅度(2)观察呼吸运动的影响因素增加无效腔(观察呼吸频率和幅度变化)窒息:夹闭两侧气管软管(几秒到几十秒,时间不要太长,否则会引起窒息死亡)(观察呼吸频率和幅度变化)吸入 CO2:肺活量较大的同学呼出的CO2,10s以上吹气(不要对着软管直接吹,用手捧住软管,相对密闭,吹气)。(观察呼吸频率和幅度变化)吸气末吹气,呼气末抽气。静脉内注入3乳酸 2ml(观察呼吸频率和幅度
5、变化)切断右侧迷走神经,观察呼吸频率和幅度。再切断左侧迷走神经,观察呼吸频率和幅度变化。 连续电脉冲刺激迷走神经中枢端(靠近头部的一端), 观察呼吸频率和幅度变化。实验结果正常呼吸频率曲线:注入CO2:呼吸加深加快切断迷走神经:呼吸加深“呼吸运动调节”实验分析实验项目呼吸运动预期结果分析增加吸入气中的CO2加深加快1)血中CO2CO2经血脑屏障进入脑脊液生成H2CO3解离出H+刺激中枢化学感受器延髓呼吸中枢兴奋呼吸加深加快2)血中CO2直接刺激颈动脉窦,主动脉弓外周化学感受器呼吸加深加快注射乳酸同上,但H+不易通过血脑屏障,主要通过外周化学感受器起作用。吸入纯N2(缺氧)血中PO2呼吸加深加快
6、;刺激外周化学感受器感受器呼吸加深加快长管呼吸(增大无效腔)加深1)PO2机制同上;2)PCO2机制同上;3)呼吸肌本体感受性反射影响切断双侧迷走N加深变慢牵张反射因传入神经切断而中断点刺激迷走N中枢端呼吸最终终止肺扩张反射和肺缩小反射的传入神经都在迷走N内,点刺激中枢端会导致呼吸运动改变,持续给予点刺激,呼吸运动最终停止。注意事项1、手术中,若遇到出血,常用的止血方法有:钳夹止血法,压迫止血法,结扎止血法,烧烙止血法2、分离神经时不能用尖的或锋利的金属机械;3、实验观察中,在刺激开始、撤除时,应做好标记。4、剪辑和打印结果时,尽量把波形压缩,显示变化趋势即可,不需要每个波的细节。5、刺激神经
7、之前,应先检查是否有刺激电流输出。6、神经需刺激时才拉出,不要一直由保护电极勾住,防止神经干燥。7、每一实验项目必须在前一项目对动物的影响基本恢复之后才能进行。思考题1、 分析增加呼吸无效腔,呼吸运动改变的原因。答:肺泡通气量=(潮气量-无效腔气量)*呼吸频率所以当增大无效腔时,肺泡通气量减小,而深而慢的呼吸可以使肺泡通气量增大,肺泡气更新率加大,有利于气体交换。2、 双侧切断迷走神经以后,呼吸运动的变化说明什么问题?迷走神经有调节呼吸运动的作用3、 分析注射乳酸后呼吸运动变化的原因。乳酸增加,动脉血中H+增加,外周化学感受器感受到变化,冲动沿窦神经和迷走神经传入延髓呼吸有关的核团,反射性的使呼吸加深加快,肺通气量增加。
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