人教版选修三《动物细胞融合与单克隆抗体》课件优质PPT.ppt

1、（2）骨髓瘤骨髓瘤细胞特点：能无限增殖。胞特点：不能不能（3）杂交瘤交瘤细胞特点：B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞融合得到胞融合得到杂交瘤交瘤细胞，既能无限增殖，又胞，既能无限增殖，又能能产生特异性抗体。生特异性抗体。2.制制备过程程3.单克克隆隆抗抗体体优点点：_、并可大量制并可大量制备。4.单克隆抗体的克隆抗体的应用用（1）作作为诊断断试剂，具具有有准准确确、_、简易易、_的的优点。点。（2）用于治用于治疗疾病和疾病和_。特异性特异性强强、灵敏度高、灵敏度高高效高效快速快速运运载药物物想一想想一想2什什么么是是单克克隆隆抗抗体体？鼠鼠的的单克克隆隆抗抗体体能能否用于人体疾病的治否用于人

2、体疾病的治疗？为什么？什么？【提示提示】单克隆抗体是由克隆抗体是由单一一杂交瘤交瘤细胞胞增殖增殖产生的高度生的高度专一的抗体。不能。因一的抗体。因为鼠鼠的的B淋巴淋巴细胞所胞所产生的抗体与人体生的抗体与人体B淋巴淋巴细胞胞产生的抗体是不同的。生的抗体是不同的。要点突破讲练互动要点突破讲练互动要点一要点一动物物细胞融合胞融合1.动物物细胞融合的操作步胞融合的操作步骤2.动物物细胞的融合胞的融合过程程细胞胞膜膜融融合合细胞胞质融融合合细胞胞核核融融合合（标志着志着细胞融合的完成胞融合的完成）。3.重重组细胞的特点胞的特点融合形成的融合形成的杂交瘤交瘤细胞具有两个胞具有两个细胞的胞的遗传信息，通信息

3、，通过动物物细胞培养，胞培养，杂交瘤交瘤细胞表胞表现出两个出两个亲本的特点。本的特点。4.植物体植物体细胞胞杂交和交和动物物细胞融合的区胞融合的区别植物体植物体细胞胞杂交交动物物细胞融合胞融合原理原理细胞膜流胞膜流动性和植性和植物物细胞全能性胞全能性细胞膜流胞膜流动性性步步骤酶酶解法去掉解法去掉细胞壁胞壁后后,诱导原生原生质体融体融合合,形成形成杂种体种体细胞胞,再再经过植物植物组织培培养形成养形成杂种植株种植株分散成分散成单个个细胞胞后后诱导细胞融合胞融合诱导方法方法物理方法、化学方物理方法、化学方法法物理方法、化学物理方法、化学方法、方法、灭活病毒活病毒结果果形成形成杂种植株种植株形成形成

4、杂种种细胞胞特特别提醒提醒二者的区二者的区别除表中所列外，除表中所列外，还有有培养基的培养基的类型和成分，所用的型和成分，所用的酶酶等的不同，等的不同，但二者均需在无菌条件下但二者均需在无菌条件下进行。行。（2012太原五中高二太原五中高二检测）运用运用动物物体体细胞胞杂交技交技术可可实现基因定位。研究基因定位。研究发现：用人的用人的细胞与小鼠体胞与小鼠体细胞胞进行行杂交得到的交得到的杂种种细胞含有双方的染色体。胞含有双方的染色体。杂种种细胞在持胞在持续分裂分裂过程中程中仅保留鼠的染色体而人保留鼠的染色体而人类染色体染色体逐逐渐丢失，只剩一条或几条。如失，只剩一条或几条。如图是人的缺是人的缺乏

5、乏HGPRT酶酶突突变细胞株胞株（HGPRT）和小鼠的和小鼠的缺乏缺乏TK酶酶细胞株胞株（TK）融合后并在融合后并在HAT培养培养例例1液中培养的液中培养的过程，程，结果表明最果表明最终人的染色体人的染色体在融合在融合细胞中胞中仅有有3号染色体或号染色体或17号染色体号染色体或两者都有。已知只有同或两者都有。已知只有同时具有具有HGPRT酶酶和和TK酶酶的融合的融合细胞才可在胞才可在HAT培养液中培养液中长期存活与繁殖。期存活与繁殖。（1）体体细胞胞杂交交突突破破了了_，过程程常常用用的的生生物物方方法法是是_。（2）过程程中中，为了了防防止止细菌菌的的污染染，所所用用培培养养液液应该添添加加

6、一一定定量量的的_。此此外外还要要定定期期用用_处理理细胞胞，使使贴壁壁生生长的的细胞脱落形成胞脱落形成细胞胞悬液。液。（3）从培养从培养过程看，程看，HAT培养液不培养液不仅能提供养能提供养料，料，还起起_作用。作用。（4）从从图示示结果看，可以确定人的果看，可以确定人的_基因位于基因位于_号号染色体；染色体；该方法可以方法可以对鼠基因定位鼠基因定位吗？_。【解析解析】（1）体体细胞胞杂交具有突破有性交具有突破有性杂交交方法局限的方法局限的优点点,过程程是是细胞融合的胞融合的过程程,对于于动物物细胞常采用胞常采用灭活的病毒活的病毒诱导融合。融合。（2）为防止防止杂菌菌污染，在培养液中可加入一

7、定染，在培养液中可加入一定量的抗生素；使量的抗生素；使贴壁壁细胞脱落形成胞脱落形成细胞胞悬液液的方法是用胰蛋白的方法是用胰蛋白酶酶定期定期处理。理。（3）图中中过程程是一个是一个筛选的的过程，程，HAT培养液不培养液不仅能提能提供养料供养料,还起特殊的起特殊的选择作用，即只有同作用，即只有同时具具有有HGPRT酶酶和和TK酶酶的融合的融合细胞才能存活。胞才能存活。（4）该方法不能方法不能对鼠基因鼠基因进行定位，因行定位，因为运用运用此方法定位基因有一个前提，即要保此方法定位基因有一个前提，即要保证杂种种细胞在持胞在持续分裂分裂过程中程中仅保留鼠的染色体而保留鼠的染色体而人人类染色体逐染色体逐渐

8、丢失，或只剩一条或几条。失，或只剩一条或几条。鼠的染色体是全部的，即使知道存在某基因鼠的染色体是全部的，即使知道存在某基因,也无法也无法认定定该基因位于哪条染色体上。基因位于哪条染色体上。【答答案案】（1）有有性性杂交交方方法法的的局局限限灭活活的的病毒病毒诱导（2）抗生素胰蛋白抗生素胰蛋白酶酶（3）选择（4）TK酶酶17不能不能互互动动探究探究（1）本本题中中细胞胞融融合合手手段段不不同同于于植植物物体体细胞胞杂交的是什么？交的是什么？（2）本本题中中培培养养液液中中融融合合处理理后后的的细胞胞类型型最最多有几种？分多有几种？分别是什么是什么细胞？胞？【提提示示】（1）动物物细胞胞融融合合的

9、的手手段段与与植植物物体体细胞胞杂交交的的区区别是是前前者者通通常常采采用用灭活活的的病病毒毒作作为诱导剂。（2）细胞胞类型通常有型通常有5种，即鼠种，即鼠鼠、人鼠、人人、人、人人鼠、人、鼠鼠、人、鼠单独的独的细胞。胞。【易易误警警示示】（1）常常用用的的病病毒毒诱导剂有有仙仙台台病病毒毒、新新城城鸡瘟瘟病病毒毒、疱疱疹疹病病毒毒等等，其其中中仙仙台病毒最常用。台病毒最常用。（2）用做用做诱导剂的病毒必的病毒必须事先事先灭活，使病毒活，使病毒的感染活性、增殖能力的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的失但不破坏病毒的抗原抗原结构。构。要点二要点二单克隆抗体的制克隆抗体的制备1.单克隆抗体制克隆抗

10、体制备的关的关键思路及操作依据思路及操作依据（1）关关键思路：思路：克隆克隆单一的一的B淋巴淋巴细胞，形成胞，形成细胞群；胞群；将将B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞融合，胞融合，获得得杂交交瘤瘤细胞。（2）用用B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞融合的原因：胞融合的原因：每每一一个个B淋淋巴巴细胞胞只只能能分分泌泌一一种种特特异异性性抗抗体；不同种体；不同种类的的B淋巴淋巴细胞分泌的抗体不同胞分泌的抗体不同;B淋巴淋巴细胞在体外培养胞在体外培养时不能无限增殖；不能无限增殖；骨髓瘤骨髓瘤细胞能胞能够无限增殖。2.单克隆抗体制克隆抗体制备过程中的程中的筛选及原因及原因（1）第一次第一次筛选是在

11、是在B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞胞融合之后，因融合之后，因为有三种融合情况：有三种融合情况：B淋巴淋巴细胞与胞与B淋巴淋巴细胞融合、骨髓瘤胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞融合、胞融合、B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞融合，胞融合，而只有而只有B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞的融合胞的融合细胞胞才是需要的才是需要的杂种种细胞。（2）第二次第二次筛选需先在多孔培养皿上培养，在需先在多孔培养皿上培养，在每个孔只有一个每个孔只有一个杂交瘤交瘤细胞的情况下开始培胞的情况下开始培养，然后再养，然后再筛选出能出能产生所需特异性抗体的生所需特异性抗体的细胞群。由于胞群。由于该细胞群是由

12、胞群是由单个个杂交瘤交瘤细胞胞克隆来的，所以克隆来的，所以产生的抗体一定是化学性生的抗体一定是化学性质单一、特异性一、特异性强强的的单克隆抗体。克隆抗体。（2012北京四中高二北京四中高二质检）1975年科年科学家首次利用学家首次利用B淋巴淋巴细胞胞杂交瘤技交瘤技术制制备出出单克隆抗体。请根据下根据下图回答回答问题：例例2（1）病病原原体体注注入入小小鼠鼠体体内内后后，要要经过_细胞胞处理理后后形形成成抗抗原原MHC复复合合体体，才才能能被被免疫免疫细胞胞识别。（2）制制备单克克隆隆抗抗体体所所用用的的B淋淋巴巴细胞胞一一般般从从脾脾中中采采集集，然然后后以以_作作诱导剂，使使B淋淋巴巴细胞胞

13、和和骨骨髓髓瘤瘤细胞胞融融合合。通通过筛选和和克克隆隆培培养养，获得得的的杂交交瘤瘤细胞胞具具有有_的特点。的特点。（3）单克隆抗体的特点是克隆抗体的特点是_。根根据据上上图写写出出应用用杂交交瘤瘤技技术获得得单克克隆隆抗抗体体的的两两种种主主要要方方法法_。解析：灭活的仙台病毒和聚乙二醇均可活的仙台病毒和聚乙二醇均可诱导动物物细胞融合。胞融合。杂交瘤交瘤细胞同胞同时具有两个具有两个亲代代细胞的胞的遗传特性。可以在体外也可以在体特性。可以在体外也可以在体内培养内培养杂交瘤交瘤细胞胞获得得单克隆抗体。答案：（1）吞噬吞噬（或巨噬或巨噬）（2）灭活活的的仙仙台台病病毒毒或或聚聚乙乙二二醇醇既既能能

14、产生生特特异性抗体，又能无限增殖异性抗体，又能无限增殖（3）特异性特异性强强，纯度高度高（或：或：专一性一性强强、灵敏度、灵敏度高高）体外培养法和体外培养法和动物体内培养法物体内培养法变式训练变式训练（2012西宁五中高二西宁五中高二检测）根据根据单克隆抗体制克隆抗体制备流程示意流程示意图判断以下判断以下选项中正确的是中正确的是（）A单克隆抗体技术的原理包括细胞增殖、细单克隆抗体技术的原理包括细胞增殖、细胞膜的流动性、细胞的全能性等胞膜的流动性、细胞的全能性等B根据培养基的物理性质分类，图中根据培养基的物理性质分类，图中HAT培培养基属于选择培养基养基属于选择培养基C在制备单克隆抗体的过程中有两次选择，在制备单克隆抗体的过程中有两次选择，第一次是选择杂交瘤细胞，第二次是选择能够第一次是选择杂交瘤细胞，第二次是选择能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞产生特异性抗体的杂交瘤细胞D老鼠骨髓瘤细胞染色体数是老鼠骨髓瘤细胞染色体数是40，效应，效应B细胞的染色体数为细胞的染色体数为46，融合后形成的杂交瘤，融合后形成的杂交瘤细胞细