专题2第1节微生物的实验室培养PPT文档格式.ppt

1、一般的培养基都含有一般的培养基都含有水、碳源、氮源水、碳源、氮源和无机盐。和无机盐。培养基还需要满足微生物生长对培养基还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质以及氧气的要求。特殊营养物质以及氧气的要求。培养基1000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组成牛肉膏 5g蛋白胨 10gNaCl 5gH2O 定容至1000 mL提供的主要营养物质碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素无机盐氢元素、氧元素（二）无菌技术1.1.对实验操作的空间、操作者的衣着和手，对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行进行清洁和消毒清洁和消毒（disinferctiondisinferction）。）。2.2.将用于

2、微生物培养的器皿、接种用具和将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行培养基等器具进行灭菌灭菌（sterilizationsterilization）。3.3.为避免周围环境中微生物的污染，实验为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在操作应在酒精灯火焰附近进行酒精灯火焰附近进行。4.4.实验操作时应实验操作时应避免已经灭菌处理的材料避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。用具与周围的物品相接触。消毒和灭菌消毒：消毒：是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面 或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢

3、子）。消毒的方法消毒的方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法（牛奶）、化学药：煮沸消毒法、巴氏消毒法（牛奶）、化学药剂进行消毒（酒精檫手、氯气消毒水源等）。剂进行消毒（酒精檫手、氯气消毒水源等）。灭菌：则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微 生物包括芽孢和孢子。生物包括芽孢和孢子。灭菌的方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。除此之外，实验室里还用紫外线或化学药物经行消毒。高压蒸汽灭菌锅干热灭菌箱实验操作实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）1 1计算计算、称量称量操作步骤操作步骤 根据牛肉膏蛋白胨

4、培养根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制基配方的比例，计算配制100m L的培养基时，各种成的培养基时，各种成分的用量。分的用量。准确地称取各种成分。牛肉膏比较牛肉膏比较粘稠粘稠，可以用，可以用玻玻棒挑取棒挑取，放在称量纸上称量。，放在称量纸上称量。牛肉膏和蛋白胨都牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，容易吸潮，称取时动作要迅速，称后称取时动作要迅速，称后及及时盖上瓶盖。时盖上瓶盖。2溶化溶化 将称好的牛肉膏将称好的牛肉膏连同称量纸连同称量纸一起放入烧杯，一起放入烧杯，加加入少量的入少量的水水，加热。加热。当牛肉膏溶化并与称量纸当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，分离后，用玻棒取出称量纸用玻棒取出称量纸。

5、往。往烧杯中加入称量好的烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯蛋白胨和氯化钠化钠，用玻棒搅拌，使其溶解。，用玻棒搅拌，使其溶解。加入加入琼脂，琼脂，加热使其熔化。在此加热使其熔化。在此过程中，过程中，不断搅拌，防止琼脂糊不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂底而导致烧杯破裂。当琼脂完全。当琼脂完全熔化后，补加熔化后，补加自来水自来水100 mL。3.3.灭菌灭菌 将配制好的将配制好的培养基培养基转移到锥形瓶中，转移到锥形瓶中，加棉塞加棉塞，包，包上牛皮纸，并上牛皮纸，并用皮筋勒紧用皮筋勒紧，再放入，再放入高压灭菌锅高压灭菌锅，在，在压力为压力为100 100 kPakPa、温度为、温度为121121条件下

6、，灭菌条件下，灭菌1530 1530 minmin。将。将培养皿培养皿用几层旧报纸抱紧，用几层旧报纸抱紧，58 58 套套培养基培养基作一包，包好后放入作一包，包好后放入干热灭菌箱干热灭菌箱内，在内，在160170 160170 下灭菌下灭菌2 h2 h。4 4倒平板倒平板 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在左右时，在酒精酒精灯附近灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）倒平板。（倒平板操作见课本）2d2d后观察平板，后观察平板，无杂菌污染才可用来接种无杂菌污染才可用来接种.5 5无菌检查无菌检查 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室的温室中培养中培养24244848小

7、时小时，以检查灭菌是否，以检查灭菌是否彻底。彻底。倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养

8、基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。

9、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一

10、个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法涂布平板操作涂布平板操作本课题知识小结本课题知识小结:选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞第2课时