分解纤维素的微生物的分离PPT文件格式下载.ppt

1、2 2、农作物秸秆农作物秸秆：米秸、麦秸、稻草、草、木屑米秸、麦秸、稻草、草、木屑米秸、麦秸、稻草、草、木屑米秸、麦秸、稻草、草、木屑 等富等富含大量的纤维素，被利用的机会很少、效率低；含大量的纤维素，被利用的机会很少、效率低；纤维素生物燃料：最有希望替代石油能源最有希望替代石油能源 科学家正致力于研究，怎样将科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物、木材及生长更为迅农业废弃物、木材及生长更为迅速的草本植物，速的草本植物，转化为种类繁多转化为种类繁多的生物燃料的生物燃料（甚至是航空燃油）。（甚至是航空燃油）。3教学目标教学目标:1、知道纤维素酶的种类及作用、知道纤维素酶的种类及作用2、初步掌握从土

2、壤中分离出分解纤维、初步掌握从土壤中分离出分解纤维 素的微生物的实验方法素的微生物的实验方法5一、基础知识一、基础知识1.1.纤维素纤维素 纤维素是一种由纤维素是一种由葡萄糖葡萄糖首尾相连而成的首尾相连而成的高高分子分子化合物，是含量最丰富的化合物，是含量最丰富的多糖多糖类物质。类物质。6 土壤中某些微生物能够产生土壤中某些微生物能够产生纤维素酶纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。72.2.纤维素酶纤维素酶 纤维素酶是一种纤维素酶是一种 ，一般认为它，一般认为它 ，即，即 ，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤

3、维二糖分解成葡萄糖。将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖纤维二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素纤维素一、基础知识一、基础知识复合酶复合酶至少包括至少包括三种组分三种组分C C1 1酶酶（外切酶外切酶）、和葡萄糖苷酶和葡萄糖苷酶C CX X酶酶（内切酶内切酶）8在一支试管中添加纤维素酶，在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；另一支试管不添加纤维素酶；思考思考1实验分析：实验分析：P27的小的小实验是如何构成对照的？实验是如何构成对照的？滤滤纸纸崩崩溃溃法法92 2、纤维素分解菌的筛选、纤维素分解菌的筛选1、筛选纤维素分解菌的方法、筛选纤维素分解菌

4、的方法_。该方法可以通过该方法可以通过_反应直接筛选。反应直接筛选。刚果红染色法刚果红染色法颜色颜色2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成、其原理是：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被，当纤维素被_分解后，分解后，红色复合物无法形成，出现以红色复合物无法形成，出现以_为中心的为中心的_，可以通过，可以通过_ 来来筛选纤维素分解菌。筛选纤维素分解菌。红色复合物红色复合物纤维素酶纤维素酶纤维素分解菌纤维素分解菌 透明圈透明圈是否产生透明圈是否产生透明圈10可根据是否可根据是否产生产生透明圈透明圈来筛选纤维来筛选纤维素分解菌素分解菌11练一练：练一练：1.1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是下列关于

5、纤维素酶的说法，错误的是A.纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B.纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C.纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D.葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖122.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是菌，下列说法错误的是A.刚果红能与纤维素形成红色复合物刚果红能与纤维素形成红色复合物 B.刚果红能与纤维二糖形成红色复合物刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C.刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物刚果红不能与葡萄糖形成红

6、色复合物D.若培养基上产生了透明圈，则说明已筛若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌选出了纤维素分解菌13（三三）、实验设计、实验设计土壤土壤取样取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释将样品涂将样品涂布到布到鉴别鉴别培养基培养基挑选挑选菌落菌落什么什么样的样的环境环境取样取样?培养的目的培养的目的?选择培养基的选择培养基的特点特点?挑选什挑选什么样的么样的菌落菌落?鉴别培养基鉴别培养基的特点的特点?如何鉴别如何鉴别?根据根据：微生物：微生物对生存环境的对生存环境的要求，到相应要求，到相应环境中去找；环境中去找；目的：增加纤维素增加纤维素分解菌的浓度，分解菌的浓度，以以确保能够从样品

7、中确保能够从样品中分离到所需要的微分离到所需要的微生物；生物；刚果红染色法刚果红染色法14挑选产生透明圈的菌落挑选产生透明圈的菌落 挑取产生挑取产生明显的透明圈的菌落，明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。一般即为分解纤维素的菌落。接种到接种到纤维素分解菌的纤维素分解菌的选择选择培养培养基上，在基上，在30300 0C C 37370 0C C培养，可获得纯培养，可获得纯培养。培养。151、纤维素分解菌选择培养基、纤维素分解菌选择培养基属于属于_（固体、液体）培（固体、液体）培养基，原因是养基，原因是_【资料二资料二】选择培养选择培养阅读资料二阅读资料二“选择培养基选择培养基”，回答以

8、下几问题：，回答以下几问题：液体液体没有添加琼脂没有添加琼脂2、该培养基对微生物、该培养基对微生物_（具有，不具有）选（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择择作用。如果具有，其选择机制是机制是_ 具有具有 以纤维素粉为唯一以纤维素粉为唯一碳源，能分碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁解纤维素的微生物可以大量繁殖；殖；16若设置一个对照实验说明选择培养的作若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将用，应控制的变量是将_改为改为_。3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？的作用？葡萄糖葡萄糖纤维素粉纤维素粉提示：自变量为培养基的种类

9、，即普通培养基和选择提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤或者将纤维素改为葡萄糖。维素改为葡萄糖。17 说明：说明：分析分析“纤维素分解菌的选择培养基纤维素分解菌的选择培养基配方配方”可知，该配方中的酵母膏也能够提供少可知，该配方中的酵母膏也能够提供少量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中生长繁殖。只不过，由于酵母膏的含量极少，生长繁殖。只不过，由于酵母膏的含量极少，因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量繁殖。繁殖。1

10、8 在选择培养的条件下，可以使那些能够在选择培养的条件下，可以使那些能够适适应应这种营养条件的微生物得到这种营养条件的微生物得到迅速繁殖迅速繁殖，而那，而那些些不适应不适应这种营养条件的微生物的繁殖被这种营养条件的微生物的繁殖被抑制抑制，因此可以起到因此可以起到“浓缩浓缩”的作用。的作用。为什么选择培养能够为什么选择培养能够“浓缩浓缩”所需的微生物所需的微生物？20培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子KH2PO4 0.25g无机盐无机盐土豆汁土豆汁 100mL碳源、生长因子碳源、生长因子

11、琼脂琼脂 15g凝固剂凝固剂上述物质溶解后，加蒸馏上述物质溶解后，加蒸馏水定容至水定容至1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素鉴别鉴别纤维素分解菌的培养基纤维素分解菌的培养基（水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠）21【资料三资料三】刚果红染色法刚果红染色法方法一：方法一：先培养微生物，再加先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应入刚果红进行颜色反应方法二：方法二：在倒平板时就加入刚在倒平板时就加入刚果红果红22染色法染色法优点优点缺点缺点方法一方法一 方法二方法二 颜色反应基本颜色反应基本上是纤维素分上是纤维素分解菌的作用解菌的作用 操作繁琐，刚操作繁琐，刚果红会使菌落之间果红会使菌落之

12、间发生混杂发生混杂操作简便，操作简便，不存在菌落不存在菌落混杂问题混杂问题 产生淀粉酶的产生淀粉酶的微生物也产生模糊微生物也产生模糊透明圈，有些微生透明圈，有些微生物能降解色素，形物能降解色素，形成明显的透明圈。成明显的透明圈。思考：这两种方法各有哪些优点与不足思考：这两种方法各有哪些优点与不足23四、结果分析与评价四、结果分析与评价 1.1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获

13、得如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。了分解纤维素的微生物。24 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行还需要进行_实验，纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有发酵方法有_ _ 发酵和发酵和_ _ 发酵。纤发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的维素所产生的_ _ 含量进行定量测定。含量进行定量测定。发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶 液体液体 固体固体 葡萄糖葡萄糖 五、课题延伸五、课题延伸25分解分解纤维纤维素的素的微生微生物的物的分离分离纤维素酶纤维素酶种类、作用、催化种类

14、、作用、催化刚果红染色刚果红染色筛选原理筛选原理实实验验设设计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养涂布培养涂布培养纯化培养纯化培养前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纤维素土壤富含纤维素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鉴别染色鉴别分离出分解菌分离出分解菌课堂总结课堂总结261 1、请回答下列与检验饮用水有关的问题：、请回答下列与检验饮用水有关的问题：（1 1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量记录菌落数量,这种方为这种方为 。稀释稀释涂布涂布平板法平板法