植物组培快繁程序PPT课件下载推荐.ppt

1、效果。自自然然环环境境生生长长植植株株温室控制条件下生长植株温室控制条件下生长植株已已离体培养植株离体培养植株 在多数情况下，应尽量使用温室或在多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材料作为人工气候室控制培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程中的微生外植体来源，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件物感染概率。同时，生长在控制条件下的植物可以保持培养材料间的一致下的植物可以保持培养材料间的一致性，提高实验的可重复性，也便于培性，提高实验的可重复性，也便于培养技术的规范。养技术的规范。某些多年生植物或特殊材料，必须取某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物

2、，就需要尽可能自自然生长的植物，就需要尽可能避免避免使用那些生长过于潮湿和不洁净环境使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中中的植物。对于培养过程中可能出现内生的植物。对于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，应尽量菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的取生长旺盛期的生长点部位生长点部位作为起始培养的材料作为起始培养的材料。2 2、供体植株的管理、供体植株的管理 取取自自室室外外的的外外植植体体材材料料，供供体体植植株株的的管管理理十十分分重重要要，这这与与外外植植体体培培养养时时的的污染率密切相关。植株管理中应注意：污染率密切相关。避避免免昆昆虫虫危危害害 许许多多昆昆虫虫如如蚜蚜虫虫、螨螨类类和和飞飞

3、虱虱是是许许多多植植物物病病虫虫害害的的传传播播媒媒介，会引起植物组织的潜在感染。介，会引起植物组织的潜在感染。注意防病注意防病 尤其是真菌和细菌病害尤其是真菌和细菌病害的侵染，取自感病植株的外植体，在的侵染，取自感病植株的外植体，在培养中的污染率远远高于来自健康植培养中的污染率远远高于来自健康植株的外植体，必要时需使用化学药剂株的外植体，必要时需使用化学药剂防治病害。防治病害。控制湿度控制湿度 给供体植株浇水时应从给供体植株浇水时应从根部给水，避免从上部浇水，以免上根部给水，避免从上部浇水，以免上部形成易于病原侵染的湿度环境；尽部形成易于病原侵染的湿度环境；尽可能降低温室湿度；取材前尽可能保

4、可能降低温室湿度；取材前尽可能保持植株干爽。持植株干爽。3 3、材料取材、材料取材 材料选择材料选择 培培养养材材料料应应选选择择有有代代表表性性的的主主要要植植物物、选选择择性性状状优优良良的的种种质质或或特特殊殊的的基基因因型。型。快快速速繁繁殖殖时时应应在在植植株株生生长长的的最最适适时时期期取取材材，如如花花药药培培养养应应在在花花粉粉发发育育到到单单核期取材。核期取材。取材取材 从从生生长长健健壮壮的的无无病病虫虫害害的的植植株株上上选选取取发发育育正正常常的的器器官官和和组组织织。最最好好采采用用茎茎尖尖，后代性状较稳定，携带细菌较少。后代性状较稳定，携带细菌较少。选选取取材材料料

5、的的大大小小一一般般在在0.5-1.0cm0.5-1.0cm之之间间。胚胚胎胎培培养养或或脱脱毒毒在在0.5cm0.5cm以以下下。材材料料太太大易污染，材料太小难于成活。大易污染，材料太小难于成活。1 1、预处理、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去先对植物材料进行修剪整理，去掉不需要部分，将准备使用的植物材掉不需要部分，将准备使用的植物材料（外植体）在流水中冲洗料（外植体）在流水中冲洗20-6020-60分分钟，备用。如特别不洁的外植体，可钟，备用。如特别不洁的外植体，可先用加有洗涤剂的水清洗先用加有洗涤剂的水清洗10-1510-15分钟，分钟，再用流水冲洗干净。再用流水冲洗干净。二、外植

6、体的灭菌与接种二、外植体的灭菌与接种2 2、表面灭菌、表面灭菌（1 1）操操作作人人员员穿穿戴戴灭灭过过菌菌的的工工作作服服、口口罩罩。进进入入接接种种室室前前双双手手用用洗洗涤涤剂剂清清洗洗干干净净，操操作作前前再再用用70%70%酒酒精精或或消消毒毒剂擦洗双手。剂擦洗双手。（2 2）操操作作期期间间双双手手和和台台面面常常用用70%70%酒酒精精或或消消毒毒剂剂擦擦拭拭。超超净净工工作作台台使使用用前前必必须须用用紫紫外外灯灯照照射射杀杀菌菌，然然后后开开启启风机。风机。（3 3）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊子）可放入子）可放入70-75%70-75%酒精中，

7、使用时需酒精中，使用时需火焰灼烧灭菌，冷却后使用。火焰灼烧灭菌，冷却后使用。（4 4）外植体放入超净工作台内，置）外植体放入超净工作台内，置70-75%70-75%酒精中酒精中5-60 5-60 秒，秒，0.10.1氯化汞氯化汞6-6-1010分钟，或分钟，或10%10%的漂白粉上清液中的漂白粉上清液中10-1510-15分钟，然后用无菌水冲洗分钟，然后用无菌水冲洗3-53-5次。灭菌次。灭菌时需进行搅动。时需进行搅动。常用灭菌药剂的使用和效果常用灭菌药剂的使用和效果 灭菌剂使用浓度（%）清除的难易消毒时间效 果次氯酸钠910易530很好次氯酸钙2易530很好漂 白 粉饱和浓度易530很好氯

8、化 汞0.11较难210最好酒 精7075易0.22好过氧化氢1012最易515好溴 水12易210很好硝 酸 银1较难530好抗 菌 素450mg/L中3060较好（1 1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。见方的小块；微茎尖要剥成只含微茎尖要剥成只含l l2 2片幼叶的茎尖大小等。在片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。（2 2）解开包口纸，将培

9、养瓶口几乎水平拿着，）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着，避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。3、外植体的接种、外植体的接种（3 3）迅迅速速用用镊镊子子夹夹取取切切割割分分离离下下的的所所需需组组织织、细细胞胞、器器官官，送送入入培培养养容容器器内内，轻轻轻轻插插入入培培养养基基。若若是是叶叶片片直直接接附附在在培培养养基基上上，以以放放1 13 3块块为为宜宜。接接完完种种后后，将将管管口口在在火火焰焰上上再再灼灼烧烧数数秒秒钟钟。然然后后及及时时盖上瓶盖

10、或封口。盖上瓶盖或封口。注意：所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。叉污染；三、培养三、培养 指把离体植物材料放在培养室（有光照、温度条件）里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。1、培养含义、培养含义2、培养方法、培养方法l（1）固体培养法固体培养法即用琼脂固化培养基来培养植物材即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。虽然料的方法。虽然该方法设备简单，易行，但养分分布不该方法设备简单，易

11、行，但养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。现象发生。l（2）液体培养法液体培养法即用不加固化剂的液体培养基培养即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅动或振动培较少，所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给，采用往养液的方法以确保氧气的供给，采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般为度一般为50100r/min，这种定期浸没，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气

12、的供给。氧气的供给。培养步骤培养步骤初代培养初代培养继代培养继代培养生根培养生根培养3、培养步骤、培养步骤（1 1）初代培养）初代培养目的目的：获得无菌材料和无性繁殖系。无性繁殖系：是指由一个外植体继代增殖，繁殖出是指由一个外植体继代增殖，繁殖出的具有相同遗传物质的植株群体。的具有相同遗传物质的植株群体。包括：芽丛、不包括：芽丛、不定芽、胚状体、原球茎等。定芽、胚状体、原球茎等。培养基培养基：诱导或分化培养基。培养基中培养基中CTKCTK多，多，IAAIAA少。少。类型（根据发育方向）类型（根据发育方向）：丛生芽增殖型器官发生型丛生芽增殖型器官发生型胚状体发生型胚状体发生型原球茎发生型原球茎发

13、生型根、芽根、芽胚状体胚状体根、芽根、芽愈伤组织愈伤组织芽芽根根芽芽外外植植体体试试管管苗苗原球茎原球茎根、芽根、芽外植体成苗途径外植体成苗途径根根类型型方式方式事例事例丛生芽增殖型生芽增殖型腋芽萌腋芽萌发，以芽增殖芽，以芽增殖芽，扩大繁殖系数大繁殖系数甘蔗、香蕉、香石竹、甘蔗、香蕉、香石竹、丝石竹石竹器官器官发生型生型通通过脱分化形成愈脱分化形成愈伤组织，再分化出苗，再分化出苗烟草、油菜等烟草、油菜等胚状体胚状体发生型生型从愈从愈伤组织或直接从子叶、下胚或直接从子叶、下胚轴和花和花药培养中培养中产生生甘蔗、胡甘蔗、胡萝卜、石刁卜、石刁柏等柏等原球茎型原球茎型由茎尖或腋芽由茎尖或腋芽产生原球茎放入培养基中生原球茎放入培养基中发育成小植株育成小植株兰花花球茎芽型球茎芽型叶柄表面叶柄表面产生生圆球形小突起（球茎芽），球形小突起（球茎芽），一端出芽一端出根一端出芽一端出根观叶海棠叶海棠块茎型茎型叶片或叶柄上形成粒状芋叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分一步分化出芽和根化出芽和根花叶芋花叶芋鳞茎型茎型鳞片近片近轴面或面或边缘直接形成直接形成带根的小根的小鳞茎茎百合、郁金香、百合、郁金香、贝母母等等孢子型子型用成熟或未成熟的用成熟或未成熟的孢子子进行培养行培养地地钱、狼尾蕨等、狼尾蕨等根茎型根茎型蕨蕨类具有横向的茎及直立的短根茎