1、通过吸收曲线对求知样品进行定性分析。根据朗伯比耳定律:A=bc,只要绘出标准曲线,测出试液的吸光度,就可以得到未知样的含量。,4,仪器与试剂,1756CRT型紫外可见分光光度计(上海精仪公司)2容量瓶(25mL)3吸量管(5mL)4苯甲酸(AR)储备液:0.05000g L-1,5,紫外分光光度计的使用,1开机:2 吸收池配套性检查3吸收曲线绘制4工作曲线的绘制5样品测定,6,实验步骤,1开机:打开计算机,进入window 98操作系统后,打开仪器开关,点击桌面上的“756CRT”操作软件,“联机”后,系统直接进入初始化窗口。如已初始化过,系统提示“是否初始化?”可选择“否”,则系统进行系统设
2、置后进入工作窗口;也可选择“是”,则系统进入初始化窗口,待仪器初始化结束,进入操作主页面。然后仪器预热20分钟后开始进行测定工作。,7,2.吸收池配套性检查 石英吸收池在220nm装蒸馏水,以一个吸收池为参比,调节T为100%,测定另一吸收池的透射比,其偏差应小于0.5%,可配成一套使用,记录第二比色皿的吸光度值作为校正值。,8,3吸收曲线绘制,(1)确定波长扫描参数:狭缝宽度:2 nm;扫描速度:较快;采样间隔:1nm;测量方式:吸光度;绘图方式:重叠;重复次数:1 波长范围:200350 nm;纵坐标:从0-1 存储文件:选择路径和文件名(如E:学生实验),9,(2)基线校正 用蒸馏水作参
3、比进行基线校正,点击“基线校准”开始进行基线校准(3)波长扫描 将盛有苯甲酸标准溶液的比色皿分别放入样品光路,点击“开始扫描”,得到苯甲酸溶液的吸收曲线,找到最大吸收波长。,10,4工作曲线的绘制,(1)标准系列的配制 于5支25mL容量瓶中,用5mL吸量管分别加入2.0;3.0;4.0;5.0;6.0mL的0.05000g L-1苯甲酸储备液用蒸馏水定容至刻度,摇匀。,11,(2)工作曲线的绘制,进入定量分析界面,按顺序进行标样设定,以所确定的苯甲酸最大吸收波长为测定波长,以蒸馏水为参比,分别测定这五个标准溶液吸光度值,绘制标准曲线,记下工作曲线方程和相关系数。,12,5样品测定,用2mL 吸量管吸取未知液2mL于25mL容量瓶中,用蒸馏水将其稀释定容,摇匀。将此溶液放在光路上,在仪器上直接进行 样品测定,记下其浓度值。,13,结果记录和数据处理,1、工作曲线的绘制,14,问题讨论,1、紫外可见分光光度法的定性、定量分析的依据是什么?2、紫外可见分光光度计的主要组成部件有哪些?3、设计一个采用分光光度法测定三组分含量的实验方案。,