USP微生物检测精要_精品文档优质PPT.ppt

1、USP概述无菌控制也适用于非无菌产品控制贯穿于一个药物或生物制剂从研发到市场到成品控制的整个过程整个过程中的各种微生物控制的整合将提高最终产品微生物质量的保证USP提供了每个阶段微生物控制的程序和指导微生物学是开发、生产及成品测试的一部分USP概述作为重要组成的微生物控制原料和组分的微生物控制环境的微生物控制生产过程的微生物控制成品的微生物控制所有微生物控制的整合人员的微生物控制USP概述原料和组分的微生物控制的USP观点及文件非无菌产品的微生物检查：微生物计数测试非无菌产品的微生物检查：控制菌检查非无菌药品的微生物评估USP概述环境微生物控制的USP观点及文件洁净室和其他受控环境的微生物评估

2、消毒剂与杀菌剂无菌测试隔离系统验证USP概述过程微生物控制的USP观点及文件灭菌与无菌保证生物指示剂灭菌化学和物理化学指示剂，及综合指示剂生物指示剂耐受力测试USP概述成品微生物控制的USP观点及文件无菌测试细菌内毒素测试热原测试抗菌有效性测试最终灭菌药品参数放行无菌产品包装完整性评估 微生物实验室规范 微生物实验室规范重要的控制点无菌技术培养基控制菌种控制设备控制实验室布局和运作数据文件控制员工培训 微生物实验室规范无菌技术防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法无菌环境灭菌消毒卫生要求无菌操作技术 微生物实验室规范培养基微生物实验室工作质量的核心是培养基，应根据既定的目的选

3、用正确的培养基。生产商应提供相关的CoA和说明书配制储存菌种选用水纯化水，去离子水，蒸馏水记录用量成分的测量校准过的天平，天平的量程应准确清洁的容器和工具记录称量 微生物实验室规范培养基不要过度加热加热帮助溶解，通常培养基变深说明过度加热添加剂加入后需充分混合清洁的玻璃器皿防止外来污染和抑菌剂玻璃器皿清洁 微生物实验室规范培养基灭菌条件供应商提供参数，或自己验证高压蒸汽灭菌，过滤除菌验证应考虑无菌和培养基生长能力湿热灭菌要考虑装载分布，通常121 15min 微生物实验室规范培养基灭菌条件在无菌和过度加热之间平衡消毒锅灭菌结束后，不建议在其中存储培养基不正确的加热、灭菌条件会影响培养基的 颜色

4、 澄清度 pH 凝固能力 促生长能力 选择性 微生物实验室规范培养基储存制备培养基的储存，注意低于0，凝胶结构破坏避光 避热琼脂培养基密封 融化重复融化应被限制（不超过一次），防止过度加热或潜在污染融化时，使用 水浴或流通蒸汽 微波炉，热板要防止过度加热融化的培养基储存 在4045水浴不应超过8小时 浇制平皿前擦干 微生物实验室规范培养基储存培养基应标示批号，制备批号制备日期，有效期培养基名称有效期确定根据成分，配方，容器，储存条件等确定生长能力试验数据支持 微生物实验室规范培养基储存培养基应根据生产商的说明书，并在验证过的条件下储存培养基储存不得超过有效期重要区域环控用培养基必须双层包装最终

5、灭菌，否则进行全数预培养及用前检查 微生物实验室规范培养基质控测试所有待用的培养基应检查：生长能力 每批制备的培养基均需进行 测试菌种根据药典，供应商说明及环境中分离得到的菌株 生长能力测试不合格 调查 不得使用该批号无菌pH，0.2容器/平皿的完整性抑制或指示能力定期稳定性检查以确认储存效期 微生物实验室规范微生物菌种保藏建立标准程序处理、保存菌种。防止污染和特性变化必须小心地处理使用前确认菌种的身份，纯度根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术-70以下或冷冻干燥保存储备菌种，可延长保存周期开启后不要重新冷冻菌种追溯传代次数，不超过五代 微生物实验室规范实验室设备维护绝大部分实验室设备需要进

6、行标准的验证（IQ、OQ、PQ）定期校准、保养定期进行性能检查根据设备的特性和使用状况确定频率定期清洁、消毒 微生物实验室规范实验室布局和运作实验室布局应该有利于实验室运作 防止交叉污染 活动分区 无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行 注意安全实验室应通过不同的进入通路和隔断来区分“洁净”区和“阳性”区，包括更衣，清洁，消毒，洁净区的生物安全柜仅用于无菌和洁净的操作当样品发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区 微生物实验室规范实验室布局和运作在无菌条件下小心地对物料进行取样环控培养基应在待取样区域环境中放入环控设备并小心的操作无菌隔离装置技术的使用可能是有效的微生物实验室规范样品

7、处理大部分样品，水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感。产品处方、容器材质、储存时间/温度减少样品，取样与测试间的间隔时间，并控制储存条件。远距离的转移需确认转移条件对测试及样品的影响。可能的话，在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品。取样记录 样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门，实验室样品，接受及确认微生物实验室规范培养基培养时间培养时间短于3天，用小时表示3035培养1872小时培养指定的最短时间，当超过培养时间时，进行良好的微生物结果判断培养时间长于3天，用天表示3035培养35天从上午或下午，培养至结束当天的相同时间段，进行结果判断微生物实验室规范人员培训制药企业微

8、生物实验室人员应该接受过微生物学或相关健康科学的正规学习（在校学习）相关SOP的培训被赋予保持其技术和经验的职责程序SOP应易于理解并作为培训计划的基础SOP的编号或标题提供了一个便利的将培训文件化方法每个岗位应有相应培训要求，进行上岗前资质确认微生物实验室规范人员培训绩效评估应定期进行应证明人员在实验室核心活动中的能力微生物实验室管理人员应经过适当的教育和培训管理、计划、预算、安全、调查技巧、技术报告编写、相关SOP等微生物技术水平应不低于其管理的技术人员了解微生物学原则、能科学地解释法规及指南有足够的微生物知识与经验提供技术指导微生物实验室规范实验室资源管理层保证实验室有足够的资源完成要求

9、的测试熟悉预算管理制定实验室绩效考核指标微生物实验室规范文件实验室文件至少包括：微生物人员培训和能力确认（上岗资质）设备验证、校准和维护测试中的设备性能（如温度记录）培养基制备、无菌检查、生长能力测试、选择性能力培养基清单与控制根据程序进行测试的重要参数数据和计算的确认经QA人员或相应领导审核过的报告超标调查结果微生物实验室规范实验室结果的维护记录重要的测试步骤及参数，用以确认结果的完整性，并为能重复测试提供信息至少应包括日期测试样品微生物检验人员名字程序编号测试结果偏差（如有）测试参数（设备，菌种，培养基）管理人员审核签名微生物实验室规范实验室结果的维护设备重要设备记录在测试记录上校准计划适

10、用的话，有使用记录重要的温度记录（水浴，培养箱，灭菌锅）应该具溯源性数据纠错错误的地方划一横线，签名和日期微生物实验室规范实验室结果的维护测试结果应包含平皿计数结果（如有）数据分析的方法应罗列在相关的SOP中对粘贴的图表、数据，骑缝签名存档记录应存档并防止丢失应有记录保存计划微生物实验室规范测试结果解释微生物数据有时不容易解释与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试人员污染是始终被关心的问题样品或环境中的微生物并非均匀分布微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左右因此，得到的结果与期望的结果略有差异并不是重大问题。微生物实验室规范测试结果解释避免污染非常重要结果必须从广泛的微

11、生物角度去解释：可能的污染物的情况产品中微生物存活的可能微生物生长特性（尤其是真菌孢子的散布，生长）微生物实验室规范测试结果解释对不合格结果进行调查通常会发现，不合格由以下2个原因中的一个造成。实验室错误产品不合格无论哪种情况，管理层必须立即被通知微生物实验室规范测试结果解释纠偏计划如果发现实验室错误，需要纠偏措施的有效性需要跟踪和记录无效测试由于错误将试验结果视作无效必须记录确认测试（复试）应有SOP描述何时进行确认测试药物制剂和药用物质的接受标准介绍非无菌制剂中存在的微生物可能降低产品的治疗作用，甚至使之失活，并可能对病人健康产生不良影响。生产商必须按GMP的指导进行制剂产品的生产储存和分

12、发，以保证最终制剂仅带有低水平的微生物。药物制剂和药用物质的接受标准介绍非无菌产品的微生物检查根据非无菌产品的微生物检查：微生物计数和非无菌产品的微生物检查：控制微生物测试正文中的方法进行。药物制剂和药用物质的接受标准剂型TAMC（cfu/g or mL）TCYMC（cfu/g or mL）无控制微生物（1g or mL）口服固体1000100大肠口服液体10010大肠直肠制剂1000100局部及鼻腔制剂10010金黄 铜绿阴道制剂10010金黄 铜绿白念吸入剂10010金黄 铜绿耐胆盐G-非无菌制剂的微生物质量标准药物制剂和药用物质的接受标准剂型TAMC（cfu/g or mL）TCYMC（

13、cfu/g or mL）无控制微生物（1g or mL）部分药物成分，辅料1000100_非无菌原料的微生物质量标准药物制剂和药用物质的接受标准除了表中的微生物，其他需检查的微生物的重要性应根据下述评估：产品用途（眼，鼻，等）产品特点：支持生长吗？或有防腐性应用的方法药物接受者：对婴儿、幼儿及衰弱患者的风险是不同的存在疾病、伤口、器官损伤相应因素的风险评估由经授权的有资质的人员进行。药物制剂和药用物质的接受标准适当的书面程序必须建立并遵循以防止非无菌药品中的有害微生物。不仅仅是不存在USP规定的微生物药物制剂和药用物质的接受标准有害微生物有害微生物的概念不适用于无菌产品。将用于非无菌产品的微生

14、物测试，及非无菌生产环境中分离到的微生物评估及清洁验证。药物制剂和药用物质的接受标准有害微生物可以被定义为：1.能在产品中增殖的微生物，对药品的物理特性及治疗作用有负面影响2.由于产品中微生物的数量及致病性能导致使用该药品的患者受到感染药物制剂和药用物质的接受标准有害微生物：洋葱伯克氏菌需氧的非芽孢杆菌。存在于水中，土壤及植物中，如水果和蔬菜。伯克氏菌属中有两种常见人体致病菌，洋葱伯克氏菌及类鼻疽伯克氏菌。洋葱伯克氏菌是患有囊肿性纤维化和慢性肉芽肿疾病的患者体内重要的呼吸道致病菌。以前属于假单胞菌菌属。药物制剂和药用物质的接受标准有害微生物：铜绿假单胞菌考虑到其感染数量和感染类型，及有关的发病

15、率和死亡率，它是假单胞菌属中最重要的人体致病菌。这些细菌引起的疾病范围从表皮感染到爆发性坏血症。铜绿假单胞菌是医院感染主因。它是医院呼吸道感染的首要原因，对于加护病房插管治疗的病人危害极大，死亡率达40%到50%。几年前，铜绿假单胞菌被认为是小儿及成人艾滋病患者发病和死亡的重要原因。药物制剂和药用物质的接受标准USP微生物质量接受标准USP各论要求是最低的公共标准通则提供了符合各论要求的方法有效期内测试不等于成品所需的所有放行测试水分活性水分活性Aw产品中水的蒸汽压P对相同温度下纯水中的蒸汽压P0的比率。它在数字上等于密闭系统中产品产生的相对湿度的1/100它是物料中游离态的水分的测量。注意：水分活性水分含量水分活性为什么水分活性对微生物生长重要呢？1.微生物需要产品中游离态的水进行增殖2.水分活性测定是比