第04章药物定量分析与分析方法验证PPT资料.ppt

1、几个概念：容量分析法、滴定终点、滴定误差容量分析法、滴定终点、滴定误差 操作简单、快速；操作简单、快速；比较准确（相对误差比较准确（相对误差0.2%0.2%）；）；仪器普通易得仪器普通易得 常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选上一内容下一内容回主目录（二）容量分析法的（二）容量分析法的计算计算问题问题 2.2.滴定度的计算滴定度的计算 aAaA（待测物）（待测物）+bBbB（滴定液）（滴定液）cCcC +dDdD a ba b T/MT/M 1 1c cT=ca/bMc：滴定液浓度：滴定液浓度（mol/L）M：被测物分子量：被测物分子

2、量1.1.滴定度滴定度（T T）：）：每每1 1mlml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量（mg）mg）上一内容下一内容回主目录用溴酸钾法测定异烟肼用溴酸钾法测定异烟肼M（CM（C6 6H H7 7NN3 3O）O）137.14137.14的含量时，溴酸钾滴定液的摩尔浓的含量时，溴酸钾滴定液的摩尔浓度为度为0.02mol/L0.02mol/L（以（以KBrO3KBrO3为单元），化为单元），化学反应式如下：学反应式如下：3C3C6 6H H7 7NN3 3OO2KBrO2KBrO3 33C3C6 6H H5 5NONO2 2+3N+3N2 2+KBr+3H

3、+KBr+3H2 2OO上一内容下一内容回主目录3.3.百分含量的计算百分含量的计算 WW：供试品取样量供试品取样量 设至终点时，消耗滴定液体积为设至终点时，消耗滴定液体积为V mlV ml则药物理论质量为则药物理论质量为V VT T浓度校正因数浓度校正因数（1 1）直接滴定法）直接滴定法上一内容下一内容回主目录（2 2）间接滴定法）间接滴定法1 1）生成物滴定法）生成物滴定法 药物药物 +A B 滴定滴定滴定剂滴定剂 2 2）剩余滴定法（回滴法）剩余滴定法（回滴法）药物药物 +A（定、过量）（定、过量）剩余的剩余的 A+B （回滴）（回滴）V 空白试验空白试验V0WW司可巴比妥钠司可巴比妥钠

4、=0.1022g=0.1022g，cBr2=0.05mol/LcBr2=0.05mol/L，cNa2S2O3cNa2S2O30.1mol/L0.1mol/L；V1=15.73mlV1=15.73ml，V0=23.21mlV0=23.21ml；MMC12H17N2NaO3C12H17N2NaO3=260.27=260.27，FNa2S2O3FNa2S2O31.0381.038。司可巴比妥钠的含量测定司可巴比妥钠的含量测定1.1.计算滴定度；计算滴定度；2.2.计算百分含量。计算百分含量。上一内容下一内容回主目录上一内容下一内容回主目录光谱分析法光谱分析法 紫外紫外可见分光光可见分光光度法度法 U

5、VVis 原子吸收分光光原子吸收分光光度法度法 AAS 荧光分析法荧光分析法 二、光谱分析法二、光谱分析法上一内容下一内容回主目录（一）紫外（一）紫外-可见分光光度法可见分光光度法 灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1.特点特点 准确度高，准确度高，RSD（%）为为2%5%5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛 2.2.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECLA=ECL 吸收系数：摩尔吸收系数吸收系数：摩尔吸收系数 研究分子结构研究分子结构 百分吸收系数百分吸收系数 含量测定含量测定吸收光谱范围：紫外：吸收光谱范围：20

6、0200400nm400nm 可见：可见：400400760nm760nm 上一内容下一内容回主目录3.3.仪器的校正和检定仪器的校正和检定 吸收度准确性的检定：吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波重铬酸钾的硫酸溶液，规定波 长处测定长处测定 ，应符合，应符合P P9191表表1 1中规定中规定 波长的校正：波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身 所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正杂散光的检查：杂散光的检查：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，规定波长处测定规定波长处测定透光率透光

7、率，应符合应符合P91表表2 中规定中规定上一内容下一内容回主目录4.4.对溶剂的要求对溶剂的要求:含杂原子的有机溶剂通常具有很强的含杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收末端吸收它们的使用范围均不能小于截止使用波长它们的使用范围均不能小于截止使用波长 石英石英吸收池、吸收池、空气空气为空白为空白 （nmnm）溶剂溶剂+吸收池吸收池A 220 220240 240 0.40 0.40 241 241250 250 0.20 0.20 251 251300 300 0.10 0.10 300 300以上以上 0.050.05上一内容下一内容回主目录5.5.测定方法测定方法确定波长确定波长 要求供

8、试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.30.30.70.7 狭缝调整狭缝调整 上一内容下一内容回主目录供试品溶液的吸光度供试品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度对照品溶液的浓度对照品溶液的浓度5.5.测定方法测定方法1 1）对照品比较法：）对照品比较法：条件：A.A.待测物与对照品在相同条件下测定待测物与对照品在相同条件下测定B.B.待测物与对照品浓度相近待测物与对照品浓度相近上一内容下一内容回主目录制剂：制剂：原料药：稀释倍数取样量取样量平均片重平均片重片粉量片粉量上一内容下一内容回主目录2 2）吸收系数法（绝对法）吸收系数法（绝对法）吸光

9、度吸光度百分吸收系数百分吸收系数液层厚度，液层厚度，cmcm，如无特，如无特别注明，别注明，L L=1cm=1cm可在手册或文献中查到可在手册或文献中查到上一内容下一内容回主目录盐酸氯丙嗪（规格盐酸氯丙嗪（规格1ml:10mg1ml:10mg，E E1%1%1cm1cm915）915）的含的含量测定：精密量取本品量测定：精密量取本品5ml5ml，置，置200ml200ml量瓶中，量瓶中，用盐酸溶液（用盐酸溶液（9100091000）稀释至刻度，摇匀；）稀释至刻度，摇匀；精密量取精密量取2ml2ml，置，置100ml100ml量瓶中，用盐酸溶液量瓶中，用盐酸溶液（9100091000）稀释至刻度

10、，摇匀，在）稀释至刻度，摇匀，在254nm254nm波波长处测定吸光度为长处测定吸光度为0.4690.469。计算其百分含量。上一内容下一内容回主目录3 3）计算分光光度法：）计算分光光度法：多种，具体按每种药物规定的方法进行多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：如：V VA A的三点校正法的三点校正法4 4）比色法）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定。加入显色剂后，按照对照品比较法测定。影响显色因素很多，故需注意平行操作。空白溶剂：溶剂空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理显色剂，同法处理上一内容下一内容回主目录三、色谱分析法三、色谱分析法 特点：高灵敏度、特点：高灵敏度、高效能、高速度

11、、应用广泛高效能、高速度、应用广泛 按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理：排阻色谱分类分类 按分离方法：按分离方法：PCPC；TLCTLC；柱色谱；GCGC；HPLCHPLC 根据混合物中各组分的根据混合物中各组分的色谱行为差异色谱行为差异，先，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法，方法，是分离分析混合物的最有力手段是分离分析混合物的最有力手段。上一内容下一内容回主目录 1.1.对仪器一般要求对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变其他均可

12、适当改变 色谱图色谱图2020分钟分钟内记录完毕内记录完毕 流出方向流出方向（一）（一）HPLCHPLC法法常用常用色谱柱：反相色谱柱色谱柱：反相色谱柱检测器：紫外检测器：紫外-可见分光检测器可见分光检测器流动相：甲醇流动相：甲醇-水，乙腈水，乙腈-水水上一内容下一内容回主目录2.2.系统适用性试验系统适用性试验 色谱柱的色谱柱的理论板数理论板数：n n=5.54（=5.54（t tR R/WWh/2h/2）2 2分离度分离度：R R=2=2（t tR2R2 t tR1R1）/（）/（WW1 1+WW2 2）;）;应大于应大于1.51.5灵敏度灵敏度：S/NS/N；不应小于不应小于3 3 拖尾

13、因子拖尾因子：T T=WW0.05h0.05h/2/2 应在应在0.9 0.9 5 5 1.05 1.05 重复性重复性：对照液连续进样：对照液连续进样5 5次，峰面积次，峰面积RSD2.0RSD2.0 （一）（一）HPLCHPLC法法上一内容下一内容回主目录（1 1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量对照品对照品+内标物内标物对照溶液，进样，测定，计算校正因子对照溶液，进样，测定，计算校正因子 3.3.在含量测定中的应用在含量测定中的应用供供试试品品+内内标标供供试试品品溶溶液液，进进样样，测测定定供供试试品品和和内内标物质的峰面积或峰高，计算含量

14、标物质的峰面积或峰高，计算含量上一内容下一内容回主目录 （2 2）外标法测定供试品主成分含量）外标法测定供试品主成分含量供试品供试品供试品溶液供试品溶液对照品对照品对照品溶液对照品溶液进样，测定，计算含量进样，测定，计算含量 缺点：不易准确控缺点：不易准确控制进样量，宜用定制进样量，宜用定量环进样量环进样上一内容下一内容回主目录1.1.对对GCGC仪器一般要求仪器一般要求 载载 气：气：氮气氮气 色谱柱：色谱柱：填充柱或毛细管柱填充柱或毛细管柱 填充柱：内径填充柱：内径2 24mm4mm，长，长1 110m10m，内装吸附剂，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍固定液的载体高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径毛细管柱：内径0.20.20.5mm0.5mm，长，长1010100m100m，一，一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联固定液般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联固定液检测器：检测器：氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器色谱图：色谱图：3030分钟内记录完毕分钟内记录完毕 （二）（二）GCGC法法色谱适用性实验、色谱适用性实验、测定法：同测定法：同HPLCHPLC上一内